Uterine secretory activity and histology of prepubertal female dogs in an animal model of partial ablation of endometrial glands development / Atividade secretória uterina e histologia de cadelas pré-púberes em um modelo animal de ablação parcial do desenvolvimento das glândulas uterinas

Inadequate exposure of the female reproductive system to steroids in uterine developmental periods can partially inhibit the development of endometrial glands in dogs. However, the effects of steroids on the formed glands functionality remain unknown, as well as the possible occurrence of endometrial fibrosis. This study aimed to evaluate the secretory activity of endometrial glands in prebubertal female dogs submitted to a protocol of partial ablation of the uterine adenogenesis. Sixteen females of non-specific breed were distributed into two groups; MPA (n=8), females that received applications of medroxyprogesterone acetate every 3 weeks; and C (n=8) untreated control females. Ovariohysterectomy was performed in all animals at the age of 6 months and evaluated the uterine horns by histological and histochemistry exams. The secretion intensity (degrees 1-4) was evaluated using periodic acid-Schiff (PAS) and alcian blue (AB) pH 2.5. Histological evaluation was performed using Masson's trichrome and toluidine blue. Only degree 1 and 2 marks for PAS were observed in both groups, with no difference of uterine secretion intensity between the groups regarding the degrees found. However, the MPA group revealed higher intensity of uterine secretion compared to group C (p<0.05). Staining with AB pH 2.5 also revealed only degree 1 and 2 marks in both groups, with no statistically significance between them. Masson's trichrome staining revealed no marks in the periglandular region in both groups. A higher among of mast cells was observed in the myometrial region of the uterus in both groups. Prepubertal female dogs with partial ablation of the uterine adenogenesis present minimal uterine secretory activity, absence of periglandular fibrosis and increased presence of mast cells in the myometrium compared to endometrium.(AU)

A exposição inadequada do sistema reprodutor feminino a esteróides em períodos do desenvolvimento uterino pode inibir parcialmente o desenvolvimento das glândulas endometriais em cães. Entretanto, não se conhece os efeitos dos esteróides sobre a funcionalidade das glândulas formadas, bem como a possível ocorrência de fibrose endometrial. Objetivou-se avaliar a atividade secretória das glândulas endometriais de cadelas pré-púberes submetidas a protocolo de ablação parcial da adenogênese uterina. Foram utilizadas 16 fêmeas, sem-raça-definida, distribuídas nos grupos MPA (n=8), fêmeas que receberam aplicações de acetato de medroxiprogesterona a cada 3 semanas, e C (n=8), fêmeas controle não tratadas. Aos seis meses de idade, foi realizada ovariohisterectomia em todos os animais, e avaliados os cornos uterinos pelo exame histológico e de histoquímica. Para avaliar a intensidade de secreção (graus 1-4), foram utilizadas periodic acid-Schiff e alcian blue (AB) pH 2,5. Para a avaliação histológica foram utilizados tricrômico de Masson e azul de toluidina. Apenas marcações graus 1 e 2 foram observadas para PAS em ambos os grupos, sem diferença na intensidade de secreção uterina entre grupos com relação aos graus encontrados. Entretanto, o grupo MPA apresentou maior intensidade de secreção uterina em relação ao grupo C (p<0,05). Com relação ao AB pH 2,5, em ambos os grupos também foram encontradas apenas marcações de graus 1 e 2, sem diferença estatística entre grupos. Não foram observadas marcações para a coloração de tricrômico de Masson na região periglandular, em ambos os grupos. Foi observada maior quantidade de mastócitos presentes no útero na região do miométrio, em ambos os grupos. Conclui-se que cadelas pré-púberes com ablação parcial da adenogênese uterina apresentam mínima atividade secretória uterina, ausência de fibrose periglandular e maior presença de mastócitos no miométrio em relação ao endométrio.(AU)

Uterine secretory activity and histology of prepubertal female dogs in an animal model of partial ablation of endometrial glands development / Atividade secretória uterina e histologia de cadelas pré-púberes em um modelo animal de ablação parcial do desenvolvimento das glândulas uterinas

Inadequate exposure of the female reproductive system to steroids in uterine developmental periods can partially inhibit the development of endometrial glands in dogs. However, the effects of steroids on the formed glands functionality remain unknown, as well as the possible occurrence of endometrial fibrosis. This study aimed to evaluate the secretory activity of endometrial glands in prebubertal female dogs submitted to a protocol of partial ablation of the uterine adenogenesis. Sixteen females of non-specific breed were distributed into two groups; MPA (n=8), females that received applications of medroxyprogesterone acetate every 3 weeks; and C (n=8) untreated control females. Ovariohysterectomy was performed in all animals at the age of 6 months and evaluated the uterine horns by histological and histochemistry exams. The secretion intensity (degrees 1-4) was evaluated using periodic acid-Schiff (PAS) and alcian blue (AB) pH 2.5. Histological evaluation was performed using Masson's trichrome and toluidine blue. Only degree 1 and 2 marks for PAS were observed in both groups, with no difference of uterine secretion intensity between the groups regarding the degrees found. However, the MPA group revealed higher intensity of uterine secretion compared to group C (p<0.05). Staining with AB pH 2.5 also revealed only degree 1 and 2 marks in both groups, with no statistically significance between them. Masson's trichrome staining revealed no marks in the periglandular region in both groups. A higher among of mast cells was observed in the myometrial region of the uterus in both groups. Prepubertal female dogs with partial ablation of the uterine adenogenesis present minimal uterine secretory activity, absence of periglandular fibrosis and increased presence of mast cells in the myometrium compared to endometrium.(AU)

A exposição inadequada do sistema reprodutor feminino a esteróides em períodos do desenvolvimento uterino pode inibir parcialmente o desenvolvimento das glândulas endometriais em cães. Entretanto, não se conhece os efeitos dos esteróides sobre a funcionalidade das glândulas formadas, bem como a possível ocorrência de fibrose endometrial. Objetivou-se avaliar a atividade secretória das glândulas endometriais de cadelas pré-púberes submetidas a protocolo de ablação parcial da adenogênese uterina. Foram utilizadas 16 fêmeas, sem-raça-definida, distribuídas nos grupos MPA (n=8), fêmeas que receberam aplicações de acetato de medroxiprogesterona a cada 3 semanas, e C (n=8), fêmeas controle não tratadas. Aos seis meses de idade, foi realizada ovariohisterectomia em todos os animais, e avaliados os cornos uterinos pelo exame histológico e de histoquímica. Para avaliar a intensidade de secreção (graus 1-4), foram utilizadas periodic acid-Schiff e alcian blue (AB) pH 2,5. Para a avaliação histológica foram utilizados tricrômico de Masson e azul de toluidina. Apenas marcações graus 1 e 2 foram observadas para PAS em ambos os grupos, sem diferença na intensidade de secreção uterina entre grupos com relação aos graus encontrados. Entretanto, o grupo MPA apresentou maior intensidade de secreção uterina em relação ao grupo C (p<0,05). Com relação ao AB pH 2,5, em ambos os grupos também foram encontradas apenas marcações de graus 1 e 2, sem diferença estatística entre grupos. Não foram observadas marcações para a coloração de tricrômico de Masson na região periglandular, em ambos os grupos. Foi observada maior quantidade de mastócitos presentes no útero na região do miométrio, em ambos os grupos. Conclui-se que cadelas pré-púberes com ablação parcial da adenogênese uterina apresentam mínima atividade secretória uterina, ausência de fibrose periglandular e maior presença de mastócitos no miométrio em relação ao endométrio.(AU)

Correlation between clinical findings, mast cell count and interleukin 31 immunostaining in the skin of dogs with atopic dermatitis / Correlação entre achados clínicos, contagem de mastócitos e imunomarcação de interleucina 31 na pele de cães com dermatite atópica

In this study the correlation between the clinical score, mast cell count and interleukin 31 (IL-31) immunostaining in the skin of dogs with atopic dermatitis was determined. A total of 31 dogs of different breeds, from one to eight years of age, were chosen for the study. The 20 females and 11 males were categorized based on the CADESI-4 system, as having discrete, moderate or marked atopic dermatitis. Skin samples were collected from the axillary and interdigital regions and stained with hematoxylin and eosin for cytohistomorphological analyses and toluidine blue to evaluate the mast cell counts, and immunohistochemistry for the IL-31 immunostaining. Animals revealing higher atopic dermatitis scores had greater numbers of mast cells and IL-31 immunolabeled cells. More numbers of cells immunolabeled for IL-31 were evident in the axillary skin compared with the interdigital skin in dogs having this condition. A correlation was identified between the clinical scores and mast cell numbers in the interdigital region, as well as between the clinical scores and number of cells immunolabeled for IL-31 in the axillary area. A correlation was also reported between the mast cell numbers and IL-31 immunolabeled cells only in the axillary skin, and none in the interdigital regions. It was thus concluded that the mast cells and IL-31 are involved in the pathogenesis of the canine atopic dermatitis (CAD), as well as lymphocytes and plasma cells. It was also observed that the higher the degree of clinical severity of the disease, the more the numbers of mast cells and IL-31 in the skin of those animals suffering from CAD, which implies the influence of these immunological constituents on the genesis of pruritus and disease progression.(AU)

Este estudo avaliou a correlação entre o escore clínico, a contagem de mastócitos e a imunomarcação de interleucina 31 (IL-31) na pele de cães com dermatite atópica. Foram selecionados 31 cães de diferentes raças, com idade entre um e oito anos, sendo 20 fêmeas e 11 machos, divididos em discretamente, moderadamente e acentuadamente acometidos por dermatite atópica segundo o sistema CADESI-4. Amostras da pele das regiões axilar e interdigital foram colhidas e submetidas às colorações de hematoxilina e eosina para a avaliação cito-histomorfológica e azul de toluidina para a contagem de mastócitos, bem como a técnica de imunoistoquímica para a imunomarcação de IL-31. Os animais com maior escore de dermatite atópica apresentaram maior número de mastócitos e de células imunomarcadas para IL-31. Houve maior número de células imunomarcadas para IL-31 na pele da axila em relação à interdigital nos cães com a doença. Foi constatada correlação entre o escore clínico e a quantidade de mastócitos no interdígito, bem como entre o escore clínico e a quantidade de células imunomarcadas para IL-31 na axila. Também foi verificada correlação entre a quantidade de mastócitos e células imunomarcadas para IL-31 na pele da região axilar, mas não da interdigital. Conclui-se que mastócitos e a IL-31 estão envolvidos na patogenia da DAC, assim como linfócitos e plasmócitos. Também, quanto maior o grau de severidade clínica da doença, maior a quantidade de mastócitos e IL-31 na pele dos animais com DAC, o que remete à influência desses componentes imunológicos na gênese do prurido e progressão da doença.(AU)

Structural and physical-chemical analyses of sulfated polysaccharidesfrom the sea lettuce Ulva lactuca and their effects on thrombin generation / Análises estrutural e físico-química de polissacarídeos sulfatados da alface do mar Ulva lactuca e seus efeitos sobre geração de trombina

Ulva lactuca (Chlorophyceae) has biotechnologically-important sulfated-polysaccharides (Ul-SPs), but their potentials on thrombin generation (TG) are unknown. This study analyzed the structural and physicalchemical features of the Ul-SPs as modulators of TG. Proteolytic digestion yielded (13.13%) extract containing sulfate (20.43%) and total sugars (65.72%), besides ulvan consisting of rhamnose, xylose, glucose, glucuronic acid and α-/β-types glycosidic linkages as characterized by one-/two-dimensions nuclear magnetic resonance (NMR) experiments. Fractionation of the Ul-SPs by DEAE-cellulose chromatography yielded Ul-SP1 and Ul-SP2 (0.50 and 0.75 M NaCl, respectively) showing sulfation (15.72-18.04%) and total sugars (59.73-60.58%) consistent with the charge density pattern by combination of agarose/polyacrylamide gel eletrophoresis using sequential staining with toluidine blue and stains-all, although with slight differences in their sizes (40 and >100 kDa, respectively). By both activated partial thromboplastin time (APTT) and prothrombin time (PT) tests, anticoagulation of the fractions was virtually detected by APTT (0.39 and 0.43 IU, respectively) against heparin (193 IU). Fractions acted differently on both intrinsic/extrinsic pathways in TG using 60-fold diluted human plasma, with 50% efficacies up to 8.3 μg, whereas at high concentrations suggested intrinsic hypercoagulability since heparin abolished both systems at low amounts. Ul-SPs block TG, but predicting thrombosis in increasing doses.

Clorofícea Ulva lactuca possui polissacarídeos sulfatados (Ul-PSs) importantes biotecnologicamente, porém são desconhecidos seus potenciais sobre geração de trombina (GT). Analisaram-se as características estruturais e físico-químicas dos Ul-PSs como moduladores de GT. Digestão proteolítica rendeu (13,13%) extrato contendo sulfato (20,43%) e açúcares totais (65,72%), além de ulvana, como caracterizada por experimentos de ressonância magnética nuclear uni-/bi-dimensionais, consistindo de ramnose, xilose, glucose, ácido glucurônico e ligações glicosídicas tipos-α/-β. Fracionamento dos Ul-PSs por cromatografia de DEAE-celulose rendeu Ul-PS1 e Ul-PS2 (0,50 e 0,75 M de NaCl, respectivamente) mostrando sulfatação (15,72-18,04%) e açúcares totais (59,73- 60,58%) consistentes com o grau de densidade de carga por combinação de eletroforese em gel de agarose/poliacrilamida usando coramento sequencial com azul de toluidina e "stains-all", embora com diferenças quanto aos seus tamanhos (40 e >100 kDa, respectivamente). Por ambos os testes do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) e do tempo de protrombina, anticoagulação das frações foi detectada virtualmente pelo TTPA (0,39 e 0,43 UI, respectivamente) frente heparina (193 UI). Frações atuaram diferentemente sobre ambas as vias intrínsica/extrínsica na GT usando plasma humano diluído 60 vezes, com eficácias de 50% até 8,3 μg, enquanto em concentrações maiores sugeriram hipercoagulabilidade intrínsica visto que heparina aboliu ambos os sistemas em quantidades baixas. Ul-PSs bloqueiam GT, porém prevendo trombose em doses crescentes.

Structural and physical-chemical analyses of sulfated polysaccharidesfrom the sea lettuce Ulva lactuca and their effects on thrombin generation / Análises estrutural e físico-química de polissacarídeos sulfatados da alface do mar Ulva lactuca e seus efeitos sobre geração de trombina

Ulva lactuca (Chlorophyceae) has biotechnologically-important sulfated-polysaccharides (Ul-SPs), but their potentials on thrombin generation (TG) are unknown. This study analyzed the structural and physicalchemical features of the Ul-SPs as modulators of TG. Proteolytic digestion yielded (13.13%) extract containing sulfate (20.43%) and total sugars (65.72%), besides ulvan consisting of rhamnose, xylose, glucose, glucuronic acid and α-/β-types glycosidic linkages as characterized by one-/two-dimensions nuclear magnetic resonance (NMR) experiments. Fractionation of the Ul-SPs by DEAE-cellulose chromatography yielded Ul-SP1 and Ul-SP2 (0.50 and 0.75 M NaCl, respectively) showing sulfation (15.72-18.04%) and total sugars (59.73-60.58%) consistent with the charge density pattern by combination of agarose/polyacrylamide gel eletrophoresis using sequential staining with toluidine blue and stains-all, although with slight differences in their sizes (40 and >100 kDa, respectively). By both activated partial thromboplastin time (APTT) and prothrombin time (PT) tests, anticoagulation of the fractions was virtually detected by APTT (0.39 and 0.43 IU, respectively) against heparin (193 IU). Fractions acted differently on both intrinsic/extrinsic pathways in TG using 60-fold diluted human plasma, with 50% efficacies up to 8.3 μg, whereas at high concentrations suggested intrinsic hypercoagulability since heparin abolished both systems at low amounts. Ul-SPs block TG, but predicting thrombosis in increasing doses.(AU)

Clorofícea Ulva lactuca possui polissacarídeos sulfatados (Ul-PSs) importantes biotecnologicamente, porém são desconhecidos seus potenciais sobre geração de trombina (GT). Analisaram-se as características estruturais e físico-químicas dos Ul-PSs como moduladores de GT. Digestão proteolítica rendeu (13,13%) extrato contendo sulfato (20,43%) e açúcares totais (65,72%), além de ulvana, como caracterizada por experimentos de ressonância magnética nuclear uni-/bi-dimensionais, consistindo de ramnose, xilose, glucose, ácido glucurônico e ligações glicosídicas tipos-α/-β. Fracionamento dos Ul-PSs por cromatografia de DEAE-celulose rendeu Ul-PS1 e Ul-PS2 (0,50 e 0,75 M de NaCl, respectivamente) mostrando sulfatação (15,72-18,04%) e açúcares totais (59,73- 60,58%) consistentes com o grau de densidade de carga por combinação de eletroforese em gel de agarose/poliacrilamida usando coramento sequencial com azul de toluidina e "stains-all", embora com diferenças quanto aos seus tamanhos (40 e >100 kDa, respectivamente). Por ambos os testes do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) e do tempo de protrombina, anticoagulação das frações foi detectada virtualmente pelo TTPA (0,39 e 0,43 UI, respectivamente) frente heparina (193 UI). Frações atuaram diferentemente sobre ambas as vias intrínsica/extrínsica na GT usando plasma humano diluído 60 vezes, com eficácias de 50% até 8,3 μg, enquanto em concentrações maiores sugeriram hipercoagulabilidade intrínsica visto que heparina aboliu ambos os sistemas em quantidades baixas. Ul-PSs bloqueiam GT, porém prevendo trombose em doses crescentes.(AU)

AVALIAÇÃO DA BIOLOGIA REPRODUTIVA E HISTOPATOLOGIA DOS OVÁRIOS DE FÊMEAS INGURGITADAS DE Rhipicephalus microplus SUBMETIDAS A UMA FORMULAÇÃO CONTENDO FIPRONIL E FLUAZURON

Rhipicephalus microplus (Canestrini, 1888) é um importante ectoparasito na criação de bovinos em regiões tropicais, subtropicais e temperadas no mundo. Esse carrapato atua na transmissão de patógenos, como Babesia bovis, Babesia bigemina e Anaplasma marginale, levando a um quadro clínico de moderado a grave. Outro prejuízo causado por R. microplus é a espoliação sanguínea, que leva a debilidade, anemia, perda de peso, podendo levar a óbito, em grandes infestações. Como o carrapato R. microplus representa importância médico veterinária, elevando os custos de produção de bovinos, torna-se importante a realização de controle, que é atualmente realizado quase que exclusivamente com a utilização de carrapaticidas organossintéticos. Atualmente, existem formulações comerciais disponíveis para controle de R. microplus com base na associação dos princípios ativos, fipronil e fluazuron, que tem sido amplamente utilizada. Contudo, não existem informações a respeito dos efeitos citotóxicos dessas moléculas sobre esse carrapato. Estudos sobre as alterações morfológicas causadas por esses produtos permitirão melhor compreensão do mecanismo de ação e toxicidade desses ingredientes ativos em diferentes órgãos. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar o potencial efeito histológico de uma formulação comercial, contendo fipronil e fluazuron sobre a biologia reprodutiva e ovários de fêmeas ingurgitadas de R. microplus. Para a realização do estudo, três bezerros foram infestados com aproximadamente 5.000 larvas nos dias -24, -21, -19, -17, -14, -12, -10, -7, -5 e -3, considerando o dia 0, o dia do tratamento. O tratamento consistiu na aplicação da formulação carrapaticida comercial contendo fipronil (1,25 %) e fluazuron (2,5%) (Tick Gard®- MSD Saúde Animal). Antes da aplicação da formulação carrapaticida, foram recuperadas 20 fêmeas ingurgitadas, naturalmente desprendidas dos bovinos, para formação do grupo controle. Após a aplicação da formulação comercial, foram coletadas fêmeas ingurgitadas naturalmente desprendidas dos animais nos dias +4, +12 e +20. Após a aplicação da formulação comercial, foram coletadas fêmeas ingurgitadas naturalmente desprendidas dos animais nos dias +5, +10 e +20 para acompanhamento da biologia reprodutiva e +4, +12 e +20 para avaliação da histologia dos ovários. As fêmeas coletadas para acompanhamento da biologia reprodutiva foram mantidas em câmara climatizada para oviposição, posteriormente, incubação desses ovos, enquanto as fêmeas utilizadas para as análises histológicas foram mantidas em câmara climatizada por 4 dias e após esse período, foram dissecadas. Os ovários foram retirados e armazenados em eppendorf com formalina tamponada 10%, onde permaneceram por 2 semanas. Posteriormente, os ovários foram desidratadas de forma seriada em etanol e incluídos em historesina de inclusão (Leica®) sendo armazenado durante duas semanas à 4º C. Após esse período os órgãos foram transferidos para moldes de silicone com resina de polimerização para formação dos blocos. Os blocos foram seccionados na espessura de 4.0 µm utilizando um micrótomo (Leica RM 2145) e distribuídos em lâminas para microscopia 26x76 mm com extremidade fosca. Os cortes foram corados com azul de toluidina (1%) e as lâminas foram avaliadas em microscópio para fotodocumentação. Na avaliação da biologia reprodutiva, foi observado que as fêmeas provenientes dos grupos tratados produziram uma menor quantidade de ovos (p<0,05) e esses ovos apresentaram uma menor viabilidade (p<0,5), quando comparados com o grupo controle. Todos os grupos tratados (G2 - dia+4; Grupo 3 - dia +12 e grupo 4 - +20) tiveram alterações morfológicas consideráveis. As alterações foram: desorganização citoplasmática, degradação citoplasmática, formato irregular do oócito, vesícula germinativa com formato irregular, redução dos grânulos de vitelo, vacuolização dos grânulos de vitelo e rompimento do oócito. Também foi observado um menor número de oócitos em todos estágios de desenvolvimento (I, II, III, IV e V) e um maior número de oócitos indeterminados, nos ovários de fêmeas provenientes dos grupos tratados (p<0,05), quando comparados com o grupo controle. A partir desses resultados, é possível concluir que a formulação comercial contendo fipronil e fluazuron apresentou efeito citotóxico nos ovários de fêmeas ingurgitadas de R. microplus.

Rhipicephalus microplus is an important ectoparasite inside cattle breeding in tropical, subtropical and temperate region in the world. This tick is responsible for pathogens transmission, like Babesia bovis, Babesia bigemina and Anaplasma marginale, inducing a pathological condition that can lead to a moderate to severe clinical condition. Another harm caused by R. microplus is the large amount of blood sucking, which causes weakness, anemia, weight loss and death in case of large infestation. The R. microplus represents a great importance regarding to livestock cost, thus it is important control this ectoparasite which is done almost exclusively with chemical acaricide. Currently, there are commercial formulations for R. microplus control that contain, associated or not, fipronil and fluazuron. These substances are known to be widely used for decades, however there isn`t any information regarding cytotoxic effects of these molecules on ticks. Research on morphological changes caused by these two products allows a better understanding of how these active ingredients act in different tick organs. Thus, the objective of this study was to evaluate the reproductive biology and histological effects of a commercial formulation, containing fipronil and fluazuron on the ovary of R. microplus engorged females. Three calves were infested with approximately 5.000 larvae on days -24, -21, -19, -17, -14, -12, -10, -7, -5 and -3, considering day 0, the treatment day. The treatment consisted on the application of a commercial acaricidal formulation with fipronil (1,25 %) and fluazuron (2,5%) (Tick Gard®- MSD Saúde Animal). Before application of acaricidal formulation, 20 engorged females, naturally detached form the cattle, were recovered, to form the control group. After application of the commercial formulation, engorged females naturally detached from the animals were collected on days +5, +10 and +20 for reproductive biology monitoring and on days +4, +12 and +20 for ovaries histology evaluation. The females collected for reproductive biology monitoring were kept in a climatecontrolled chamber for oviposition, subsequently incubating these eggs, while the females used for histological analysis were kept in a climate-controlled chamber for 4 days and then dissected. The ovaries were dissected and stored in Eppendorf with buffered formalin 10%, which were remained for 2 weeks at 4°C. Subsequently, the ovaries were dehydrated serially in ethanol (70%, 80%, 90%, 95% and 100%) during 15 minutes interval, and included in inclusion historesin (Leica®) for another 2 weeks at 4º C. After this period, the organs were transferred to silicone molds with polymerization resin to form blocks. The blocks were sectioned at thickness of 4,0 µm, using a microtome (Leica RM 2145) and distributed on microscope slides 26x76 mm with a matte tip. The sections were stained with toluidine blue (1%). In reproductive biology evaluation, it was observed that females from the treated groups produced a smaller amount of eggs (p<0.05) and these eggs had a lower viability (p<0.5) when compared to the control group. In the histological analysis, many alterations were observed in the oocytes of females from all treated groups, including irregularly shaped oocyte, irregularly shaped germinal vesicle, yolk granules reduction, yok granules vacuolization and oocyte disruption. It was also observed a smaller number of oocytes in all stages of development (I, II, III, IV and V) and a greater number of indeterminate oocytes on ovaries of females from the treated groups (p<0.05), when compared with the control group. From these results, it is possible to conclude that the commercial formulation containing fipronil and fluazuron affected the reproductive biology of engorged females of R. microplus, and one of the mechanisms that possibly explains this effect is the cytotoxic action that the formulation with fipronil + fluazuron presented in the ovaries.

PARÂMETROS HEMATOLÓGICOS, BIOQUÍMICOS E ELETROCARDIOGRÁFICOS DE IGUANA IGUANA (REPTILIA, SQUAMATA, IGUANIDAE) DE VIDA LIVRE, NA REGIÃO URBANA DE SANTARÉM, PARÁ, BRASIL

Objetivou-se com este estudo realizar o estudo hematológico, bioquímico, hemoparasitário e eletrocardiográfico de I. iguana no município de Santarém, Pará, Brasil. No presente estudo foram utilizados 36 iguanas verdes capturadas nas dependências externas de uma propriedade particular. As análises hematológicas, bioquímicas e hemoparasitárias foram realizadas com uma única amostra de sangue colhido por venopunção jugular em tubo com anticoagulante contendo heparina sódica. O hemograma foi realizado por meio da contagem de células em câmara de Neubauer pelo método de Azul de Toluidina 0,01%. As análises bioquímicas foram realizadas com o plasma heparinizado e utilizando a metodologia de bioquímica seca. Os valores hematológicos e bioquímicos foram comparados em relação a sazonalidade em dois extremos, verão e inverno amazônicos. A pesquisa de hemoparasitos foi realizada em distensões sanguíneas coradas com corante hematológico. Os parâmetros eletrocardiográficos foram realizados posicionando os eletrodos no tórax do paciente próximo aos membros anteriores. Dentre os resultados hematológicos, houve diferenças estatísticas entre os sexos para os valores de eritrócitos, sendo estes maiores nos machos, e, entre as estações houve diferenças estatísticas nos valores de eritrócitos e hemoglobina, sendo estes maiores na estação quente. Nos valores bioquímicos, houve diferenças estatísticas significantes entre os sexos nos valores de triglicerídeos, lipoproteínas de muito baixa densidade (VLDL), cálcio e fósforo, sendo estes maiores nas fêmeas, e, entre as estações houve diferenças estatísticas nos valores de cálcio, fósforo, proteínas totais e albumina, sendo estes maiores durante a estação quente. Onda SV foi observada com muita dificuldade em alguns casos e em 9 iguanas estava ausente. Todos os iguanas apresentaram ritmo sinusal, com onda P seguida pelo complexo QRS. Todas as ondas P, R, QRS e T observadas foram positivas. Onda Q e Onda S esteve ausente ou menor que 0,05mV em 20 iguanas. Foram determinados os valores hematológicos, bioquímicos e eletrocardiográficos em I. Iguana em região de clima tropical, os valores também foram determinados para a estação quente e para a estação seca. Há a presença de hemoparasitos nesses animais, entretanto, a infecção não demonstrou alterações importantes nos valores de eritrócitos, leucócitos e trombócitos. Este estudo forneceu os parâmetros eletrocardiográficos em I. iguana de vida livre e de clima tropical, não sendo observado diferenças entre as estações.

The objective of this study is to carry out the hematological, biochemical, hemoparasitic and electrocardiographic study of I. iguana in the municipality of Santarém, Pará, Brazil. In the present study, 36 green iguanas captured on the external premises of a specific property were used. As hematological, biochemical and hemoparasitic analyzes were performed with a blood sample collected by jugular venipuncture in a tube with anticoagulant containing sodium heparin. The blood count was performed by counting cells in the Neubauer chamber using the 0.01% Toluidine Blue method. As biochemical analyzes were performed with heparinized plasma and using a dry biochemistry methodology. Hematological and biochemical values were compared in relation to seasonality in two extremes, Amazonian summer and winter. A survey of hemoparasites was carried out on blood strains stained with hematological. Electrocardiographic parameters were performed by placing the electrodes on the patient's chest near the forelimbs. Among the hematological results, there were statistical differences between the sexes for the erythrocyte values, these being the largest in males, and among the statistics, there were statistical differences in the erythrocyte and hemoglobin values, the largest being in the hot season. In the biochemical values, there were statistically significant differences between the sexes in the values of triglycerides, very low density lipoproteins (VLDL), calcium and phosphorus, these being higher in children, and between seasonal statistics in the values of phosphorus, phosphorus, total proteins and albumin, which are higher during the hot season. Onda SV was observed with great difficulty in some cases and was absent in 9 iguanas. All iguanas presented sinus rhythm, P wave followed by the QRS complex. All P, R, QRS and T waves were observed positive. Q wave and S wave were absent or less than 0.05mV in 20 iguanas. Hematological, biochemical and lectrocardiographic values were selected in I. Iguana in the tropical region, the values were also selected for the hot season and for the dry season. There is a presence of hemoparasites in these animals, however, an infection does not demonstrate significant changes in the values of erythrocytes, leukocytes and thrombocytes. This study provided the electrocardiographic parameters in free-living iguana and tropical climate, with no difference between easons.

Avaliação histológica, histoquímica e imuno-histoquímica de mastocitomas cutâneos em cães

O mastocitoma é o tumor mesenquimal cutâneo mais prevalente do cão. Na região de Santa Maria, RS, este neoplasma corresponde a 20% dos tumores malignos de pele diagnosticados na rotina laboratorial. O diagnóstico clínico-patológico pode ser realizado através da citologia, exame histopatológico e imuno-histoquímico. A técnica de imuno-histoquímica é empregada para diferenciar tumores biologicamente mais agressivos de tumores menos agressivos. Entretanto, alguns dos imunomarcadores atualmente disponíveis sofrem influência pela fixação em formol, interferindo nos resultados. O principal objetivo deste estudo foi avaliar em mastocitomas cutâneos caninos a interferência do formol na imunomarcação para a proteína KIT e a proteína Ki67 em quatro tempos de fixação pré-estabelecidos (24, 48, 72 e 96h). Foram utilizados ainda, dois sistemas de amplificação para determinar possíveis diferenças na detecção para cada um dos dois anticorpos estudados. Este estudo foi dividido em duas partes: um estudo retrospectivo, analisando amostras de tecidos de 25 casos de biópsias sem conhecimento do tempo de fixação; e um estudo prospectivo, analisando amostras de tecidos de 12 casos com tempos de fixação conhecidos. Em ambos os estudos foram aplicados dois sistemas de graduação histológica (Patnaik e Kiupel), a coloração especial de azul de toluidina e a imuno-histoquímica para as proteínas KIT e Ki67. Adicionalmente, no estudo prospectivo, foram testados dois sistemas de amplificação para a proteína Ki67 (biotinilado e não biotinilado) e a técnica de AgNOR (contagem das regiões organizadoras nucleolares argirofílicas). Foi observado que a fixação por até 96h não interferiu na avaliação imuno-histoquímica para a proteína KIT. Porém, para a proteína Ki67, houve marcada interferência quando a fixação foi superior a 24h. Ambos os sistemas de amplificação utilizados mostraram resultados satisfatórios. Porém, não houve diferenças e/ou melhora nos resultados da imunomarcação para o Ki67, quando comparados os dois sistemas de amplificação. A utilização adicional do método histoquímico de AgNOR, para avaliar a taxa de proliferação celular, é sugerida quando o tempo de fixação do neoplasma for desconhecido ou superior a 24h.

Mast cell tumors (MCTs) is the most prevalent cutaneous mesenchymal tumor of the dog. In the region of Santa Maria, RS, this neoplasm corresponds to 20% of the malignant skin tumors diagnosed in the laboratory routine. The clinical-pathological diagnosis can be made through cytology, histopathological examination and immunohistochemistry. The immunohistochemical technique is used to differentiate biologically more aggressive tumors from less aggressive tumors. However, some of the currently available immunomarkers are influenced by formalin fixation, interfering with the results. The main objective of this study was to evaluate the interference of formaldehyde in the immunostaining of KIT protein and Ki67 protein in four pre-established fixation times (24, 48, 72 and 96h) in MCTs. Two amplification systems were also used to determine possible differences in detection for each one of the antibodies studied. This study was divided into two parts: a retrospective study, analyzing tissue samples from 25 cases of biopsies without knowledge of fixation time; and a prospective study, analyzing tissue samples from 12 cases with known fixation times. In both studies, two histological grading systems (Patnaik and Kiupel), the special staining of toluidine blue and the immunohistochemistry for KIT and Ki67 proteins were applied. Additionally, in the prospective study, two amplification systems (biotinylated and not biotinylated) for the Ki67 protein and the AgNOR technique (counting of the argirophilic nucleolar organizing regions) were tested. It was observed that the fixation for up to 96h did not interfere in the immunohistochemical evaluation for the KIT protein. However, for Ki67 protein, there was marked interference when the fixation was greater than 24h. Both amplification systems showed satisfactory results. However, there were no differences and/or improvement in the results of immunostaing for Ki67 when compared the amplification systems. The additional useof the AgNOR method to evaluate the rate of cell proliferation is suggested when the fixation time of the neoplasm is unknown or greater than 24 hours.

Testis evaluation of adult Wistar rats after neonatal treatment with fluoxetine / Avaliação testicular de ratos Wistar adultos após tratamento neonatal com fluoxetina

In current assay the serotoninergic system in newly-born Wistar rats underwent pharmacological modification by fluoxetine, a selective serotonin reuptake inhibitor (SSRI), to investigate its repercussion on testicular parameters in adult animals. Thirty animals were distributed according to treatment: control animals (n = 6), animals treated with 1 mg kg-1 (n = 6), 5 mg kg-1 (n = 6), 10 mg kg-1 (n = 6) and 20 mg kg-1 (n = 6) of fluoxetine (IP). When 150 days old, the animals were anesthetized and perfused intra-cardiacally with fixative solution. Testes were routinely processed for inclusion in plastic resin (methacrylate glycol). Further, 4 m-thick histological sections were stained with toluidine blue/sodium borate 1% and analyzed histometrically. Pharmacological intervention on the serotoninergic system during the postnatal period of the testes development in Wistar rats with fluoxetine chlorohydrate reduced parameters, such as testicular weight, testis liquid weight and seminiferous tubules diameter. However, testicular parameters, such as daily sperm production (DSP), spermatogenesis efficiency (DSP/g/testis) and cell population in stage VII of adult animals, were not influenced by fluoxetine chlorohydrate usage during neonatal period. Results show that administration of fluoxetine during 21 days after birth may induce adverse changes in the spermatogenesis of adult rats.(AU)

No presente trabalho, o sistema serotoninérgico de ratos Wistar recém-nascidos foi farmacologicamente modificado por um inibidor seletivo de recaptação da serotonina, fluoxetina, com o objetivo de observar sua repercussão nos parâmetros testiculares em ratos adultos. Trinta animais foram distribuídos de acordo com o tratamento: controle (n = 6), tratado com 1 mg kg-1 (n = 6), 5 mg kg-1 (n = 6), 10 mg kg-1 (n = 6) e 20 mg kg-1 (n = 6) de fluoxetina. Aos 150 dias de vida, os animais foram anestesiados e perfundidos intracardiacamente com solução fixadora. Os testículos foram removidos e processados para inclusão em resina plástica (glicol metacrilato). Cortes histológicos com 4 m de espessura foram corados por azul de toluidina/borato de sódio 1% e analisados histometricamente. O tratamento com fluoxetina reduziu nos parâmetros de peso testicular líquido e bruto, bem como no diâmetro dos túbulos seminíferos. Entretanto, os parâmetros testiculares de produção espermática diária (PED), eficiência espermática (PED/g/testículo) e população de células germinativas no estágio VII não estavam alteradas pelo tratamento com fluoxetina. Em conclusão, a administração de fluoxetina durante 21 dias após o nascimento pode induzir efeitos adversos na espermatogênese de ratos adultos.(AU)

Microstructure and morphoquantitative study of pineal gland in Santa Ines sheep / Estudo morfoquantitativo e da microestrutura da glândula pineal em ovinos Santa Inês

This study examined morphoquantitative aspects of the pineal gland in Santa Ines sheep in anoestrus physiological and reproductive activity. Seven female adult sheep collected from slaughterhouses in the Brasilia-DF region, with no clinical signs related to diseases of the nervous system were used. The brains were removed and their dimensions were measured. The brains were sectioned to expose and measure the pineal gland. The fragments of the diencephalon containing the pineal gland were immersed in 20% formaldehyde solution. Subsequently, the fragments were submitted to conventional histological techniques. The Hematoxylin-eosin, Toluidine blue and Gomori trichrome staining were used for a morphoquantitative analysis. The brain had an average length of 67.25 ± 1.75 mm and average width of 58.97 ± 4.0 mm. The pineal gland had an average length of 6.98 ± 0.79 mm and average width of 6.40± 1.35 mm. The quantitative analysis showed an average 86.27 ± 30.44 of pinealocytes per field. According to the Pearson correlation test, the number of pinealocytes showed a weak negative linear correlation (r = -0.11) with the length of the pineal gland and a weak positive linear correlation (r = 0.39) with the width. Therefore, the number of pinealocytes has a stronger correlation with the width of the gland compared to the length. Mastocytes were present in only one animal (14.28%). Calcareous concretions were observed in two animals (28.57%). The connective tissue formed the capsule surrounding the gland with no projections into the parenchyma.

O presente estudo avaliou os aspectos morfoquantitativos e qualitativos da glândula pineal em fêmeas de ovinos da raça Santa Inês em atividade reprodutiva e anestro fisiológico. Foram utilizados sete ovinos, fêmeas e adultas, coletados em frigoríficos da região de Brasília-DF. Estes não apresentavam sinais clínicos relacionados a afecções do sistema nervoso. Os encéfalos foram retirados e dimensões mensuradas. Posteriormente foram seccionados para expor a glândula pineal e mensurar suas dimensões. Os fragmentos do diencéfalo, contendo a glândula pineal, foram submersos em solução aquosa a 20% de formaldeído e posteriormente submetidos a técnicas histológicas convencionais. Para a avaliação morfoquantitativa desta glândula, foram empregadas as colorações Hematoxilia-Eosina, Azul de Toluidina e Tricrômio de Golmori. O encéfalo teve um comprimento médio de 67,25 ± 1,75 mm e a largura média de 58,97 ± 4,0 mm. Já a glândula pineal apresentou o comprimento médio de 6,98 ± 0,79 mm e a largura média de 6,40 ± 1,35 mm. Diante da análise microscópica, foi obtida uma média de 86,27 ± 30,44 pinealócitos por campo. Ao ser aplicado o teste de correlação de Pearson, o número de pinealócitos apresentou fraca correlação linear negativa (r = -0,11) em relação ao comprimento da glândula pineal e uma fraca correlação linear positiva (r = 0,39) em relação à largura da mesma. Portanto o número de pinealócitos possui uma maior relação com a largura da glândula do que com o comprimento. Mastocitos estiveram presentes em apenas um animal (14,28%) e as concreções calcareas foram observadas em dois animais (28,57%). A glândula se mostrou envolta por uma cápsula de tecido conjuntivo com ausência de projeções para o parênquima.

AVALIAÇÃO DOS DIFERENTES NÍVEIS DE FENO DE ALFAFA SOBRE PARÂMETROS MORFOMÉTRICOS E QUALITATIVOS DO PARÊNQUIMA TESTICULAR E NIVEIS SÉRICOS DE TESTOSTERONA EM OVINOS (Ovis aries) SEM RAÇA DEFINIDA

Objetivando-se avaliar os diferentes níveis de feno de alfafa sobre os parâmetros morfométricos e qualitativos do parênquima testicular e niveis séricos de testosterona em ovinos (ovis aries) sem raça definida, foram utilizados 40 carneiros em crescimento, com peso corporal médio inicial de 26 ± 1,85 kg e oito meses de idade aproximadamente. Os animais foram submetidos ao confinamento de 100 dias(sendo 44 dias para adaptação ao manejo e 56 dias para a administração das dietas experimentais). Os tratamentos foram compostos por quatro níveis de feno alfafa: 0%, 20%, 40% e 60%, de modo que foi mantida proporção de 60% de volumoso para todas as rações. Ao final do confinamento, foi realizada a coleta de sangue para dosagem de testosterona sérica e pesagem dos animais. Após o abate, os complexos testículo-epidídimo foram removidos e pesados individualmente, logo após foi calculado o índice gonadossomático. Foram obtidos cortes histológicos (4 m) do testículo, os quais foram corados em Hematoxilina-Floxina e Azul de Toluidina, montados com Entelan e analisados morfologicamente e morfometricamente em microscópio Óptico.O peso corporal, biometria testicular e IGS não apresentaram diferença estatística nem efeito de regressão. Dentre os parâmetros tubulares, a altura e área de epitélio sofreram efeito linear decrescente. Na proporção volumétrica,a túnica própria, os volumes total e individual das células de Leydig,assim como os vasos sanguíneos sofreram efeito de regressão linear crescente. Na produção espermática também houve tanto efeito de regressão quanto diferença estatística, além da regressão sofrida pelo número de espermátides arredondadas por secção. Desta forma, foi possível concluir que a inclusão de alfafa numa proporção acima de 20% não é recomendada para ovinos reprodutores, pois compromete o parênquima testicular.

Aiming to evaluate the different levels of alfalfa hay on morphometric and qualitative parameters of the testicular parenchyma and serum testosterone levels in sheep (Ovisaries) of mixed breeds, 40 sheep were used in growth, with average body weight of 26 ± 1.85 kg to approximately eight months of age. The animals were subjected to 100 days confinement (with 44 days for adaptation to management and 56 days for the administration of the experimental diets). The treatments consisted of four levels of alfalfa hay: 0%, 20%, 40% and 60%, so was maintained proportion of 60% forage for all diets. At the end of the experiment, blood collection was performed for serum testosterone measurement and weighing of animals. After slaughter, the complex testicle-epididymis were removed and individually weighed, after we calculated the GSI. Histological sections were obtained (4 mm) of testicle, which were stained with hematoxylin-Phloxine and Toluidine Blue, mounted with entelan and analyzed morphologically and morphometrically in optical microscope. The body weight, scrotal circumference and IGS showed no statistical difference neither regression effect. Among the tubular parameters, height and epithelium area suffered decreasing linear effect. The volumetric ratio, the tunic, the individual volumes and the total Leydig cells as well as blood vessels suffered increasing linear regression effect. In sperm production there was also much effect regression as statistical difference, besides the regression suffered by the rounded number of spermatids per section. Thus, it was concluded that the inclusion of alfalfa a ratio above 20% is not recommended for breeding sheep because it compromises the testicular parenchyma.

MORFOFISIOLOGIA TESTICULAR DE SAGUIS HÍBRIDOS DE VIDA LIVRE (CALLITRICHIDAE: PRIMATAS), RIO DE JANEIRO RJ, BRASIL

A espermatogênese é um processo biológico altamente eficiente que se inicia com a proliferação das espermatogônias que, após divisões e diferenciação, dão origem aos espermatozóides. O número final de espermatozóides produzidos em uma espécie depende de vários fatores, sendo muito baixo em primatas. As espécies de saguis Callithrix jacchus e Callithrix penicillata são primatas do Novo Mundo que, por possuírem processos espermatogênicos semelhantes ao do homem, tornam-se modelos experimentais atrativos. Esses saguis filogeneticamente próximos hibridizam gerando indivíduos altamente adaptados e viris em meio natural. O presente estudo descreve a organização morfofuncional dos testículos e quantifica os componentes testiculares, ainda não estudados para este híbrido. Para isso, testículos de nove animais foram obtidos após a eutanásia de saguis machos adultos provenientes do SERCAS - UENF. Os testículos foram fixados em solução de Karnovsky modificada (glutaraldeído a 4% e paraformaldeído a 4% em tampão fosfato 0,05 M, pH 7,3) e processados para estudos em microscopia de luz. Secções de três micrômetros de espessura foram obtidas e coradas com azul de toluidina/borato de sódio. Esses saguis híbridos apresentaram índice gonadossomático de 0,37%, bem maior que observado para espécies de comportamento monogâmico ou poligâmico masculino de dominância, como o homem (0,08%) e o gorila (0,02%) e semelhante ao valor encontrado para o C. penicillata (~0,4%), sugerindo que o sagui apresenta comportamento sexual predominantemente promíscuo. O percentual do parênquima ocupado pelos túbulos seminíferos de 87% encontra-se num patamar elevado entre os mamíferos já investigados, e o percentual observado para as células de Leydig (1,4%) é muito baixo. Os valores médios encontrados para o diâmetro tubular (228 m) e o comprimento tubular (~20 metros) por grama de testículo encontra-se dentro da faixa média observada para a maioria das espécies de mamíferos já investigadas. Os coeficientes obtidos para as contagens feitas nos saguis hibridos mostraram que as perdas celulares durante a meiose (50%; índice meiótico) são equivalentes a outros ixmamíferos e relativamente acima ao citado para o C. jacchus e o C. penicillata (~15%) seus progenitores, e bastante próxima àquelas citadas para o homem (~70%). O rendimento geral da espermatogênese ficou em torno de 8,3:1 e superior ao do homem (3,2:1). A eficiência da célula de Sertoli foi 3 vezes maior do que o valor citado para o homem. O número de células de Sertoli por grama de testículo (~58 milhões) encontra-se em conformidade a outros mamíferos. A medida encontrada para o volume individual da célula de Leydig (~323m3) ficou bem abaixo do encontrado para o C. penicillata (1400m3), diferindo também do observado para a maioria dos mamíferos e representando um valor bastante baixo do valor médio citado para o homem (2940-4300m3). Em contrapartida, existe um maior número dessas células por grama de testículo nos saguis híbridos (47,4 milhões) do que o encontrado para C. penicillata (13,9 milhões) e para o homem (9 milhões), fator esse significativo (r=0,8) ao se tratar do baixo volume de células de Leydig em correlação com a concentração de testosterona encontrado nos saguis híbridos aqui estudados. Com isso, por meio da morfologia tubular, foi possível concluir que a composição celular do estádio 1 do ciclo do epitélio seminífero desses saguis híbridos é muito semelhante à relatada para humanos.

Spermatogenesis is a highly efficient biological process that begins with the proliferation of spermatogonia that progressively differentiate into sperms. The final number of sperms produced in a species depends on several factors, being very low in primates. The species of Callithrixthrix jacchus and Callithrix penicillata marmosets are primates of the New World that have similar spermatogenic process as humans, becoming attractive experimental models. These marmosets phylogenetically close hybridize themselves generating individuals highly adapted and virile in the wild. This study describes the morpho-functional organization of the testicles and quantifies its components, not yet studied for this hybrid. For this, testicles of nine animals were obtained after the euthanasia of adult male marmosets from SERCAS-UENF. The testicles were fixed in glutaraldehyde solution at 4% and 4% paraformaldehyde in 0.05 M phosphate buffer, pH 7.3 and processed for studies in light microscopy. Sections of three micrometers thick were obtained and stained with blue toluidine/sodium borate. These hybrids marmosets showed GSI of 0.37%, much higher than observed in species of monogamous or polygamous male dominance behavior, such as men (0.08%) and the gorilla (0.02%) and similar to the value found to the C. penicillata (~0.4%), suggesting that the marmoset presents a behaviour predominantly sexually promiscuous. The percentage of parenchyma occupied by the 87% seminiferous tubules is the highest baseline level in mammals already investigated, and the percentage observed in the Leydig cells (1.4%) is very low. The average values found for the tubular diameter (228 m) and the tubular length (~20 meters) per gram of testicles is within the average range observed for most mammalian species that have been investigated. The coefficients for the countings made in hybrid marmosets showed that cell losses during meiosis (50%; meiotic index) are equivalent to other mammals and relatively up to the quoted for C. jacchus and C. penicillata (~15%) their parents, and very close to those quoted for man (~70%). The spermatogenesis yield was around 8.3:1 and higher to the men (3.2:1). The efficiency of the Sertoli cells was 3 times higher than the value quoted for man. The number of Sertoli cells per gram of testicles (~58 million) is in accordance with xiother mammals. The measure found to the individual Leydig cell volume (~323m3) was below to that found for C. penicillata (1400m3), also differing from the observed for most mammals, and representing a very low value of the mentioned average value for man (2940-4300m3). On the other hand, there is a higher number of these cells per gram of testicles in hybrid marmosets (47.4 million) than the one found for C. penicillata (13.9 million) and for men (9 million), being a significant factor (r=0.8) when dealing with the low volume of Leydig cells in correlation with testosterone concentration found in hybrid marmosets in this study. Thus, through the tubular morphology was concluded that the cellular composition of stage 1 of the seminiferous epithelium cycle of these hybrid marmosets is very similar to that reported for humans.

Análise computacional da compactação da cromatina de espermatozoides de galo / Computational analysis of chromatin condensation of rooster spermatozoa

Testaram-se variantes metodológicas utilizando azul de toluidina (AT), até se estabelecer um protocolo confiável para a avaliação computacional da compactação da cromatina em espermatozoides de galo. Para tal, foram utilizados sêmen de 10 galos com 35 semanas de idade e sêmen de 10 galos com 60 semanas de idade. O melhor método foi o de hidrólise com ácido clorídrico 1N por 10 minutos, coloração em cubeta com AT 0,025 por cento, pH 4,0, por 20 minutos, desidratação em álcool, diafanização em xilol e montagem com bálsamo do Canadá. Todas as amostras de sêmen foram submetidas a este protocolo e posteriormente avaliadas por análise de imagem computacional, em que foram feitas mensurações da área, comprimento, largura, perímetro, homogeneidade da compactação da cromatina dentro de cada cabeça e intensidade de compactação da cromatina. Os espermatozoides de galos velhos apresentaram mais alterações na cromatina que os de galos jovens. Os galos jovens apresentaram cabeça dos espermatozoides maior que os galos mais velhos. A análise computacional da compactação da cromatina mostrou-se um método menos subjetivo e mais preciso que a avaliação visual das cabeças dos espermatozoides.(AU)

The methodological variants using toluidina blue (AT) to establish a trustworthy protocol for the computational analysis of chromatin condensation of rooster spermatozoa were studied. Twenty semen samples were used: ten from 35-week-old roosters and ten from 60-week-old roosters. Different methods of denaturation and staining were tested. The best method was hydrolysis with 1N HCl for 10 minutes, staining in bucket with 0.025 percent AT, pH 4.0, for 20 minutes, dehydration in alcohol, clearing in xylol, and mounted with Canada balsam. All the semen samples were submitted to this protocol and later evaluated by computational image analysis. Area, length, width, perimeter, and chromatin compaction homogeneity of head spermatozoa were measured. The sperm of older roosters presented more chromatin changes than the ones of younger ones. The spermatozoa of younger roosters presented bigger heads than the ones of older roosters. The computational analysis of chromatin compaction showed to be less subjective and more precise than the visual evaluation for identification of chromatin alterations of rooster spermatozoa.(AU)

Ultraestrutura e expressão das enzimas: citocromo P450 aromatase e citocromo P450c17 (17-α-hidroxilase/17,20-liase) nas diferentes fases do desenvolvimento da via espermática e espermatogênese em cutia (Dasyprocta sp.) criada em cativeiro / Ultrastructure and expression of enzymes: cytochrome P450 aromatase and cytochrome P450c17 (17-α-hydroxylase/17,20-lyase) in different developmental stages of spermatogenesis and excurrent canals in agouti (Dasyprocta sp.) kept in captivity

Espécies silvestres com grande potencial zootécnico devem ser exploradas de forma racional a fim de se evitar a extinção das mesmas. Assim se dá a importância de pesquisas voltadas à reprodução daquelas criadas em cativeiro, como a cutia (Dasyprocta sp.). Este animal é um mamífero e roedor vivente, em sua maioria, na Caatinga brasileira. A ultraestrutura é a base para determinar os estágios celulares e, assim, facilitar as comparações dos processos entre cutias e roedores silvestres ou outros mamíferos. As enzimas P450 aromatase e P450c17 são responsáveis pela regulagem da produção de estrógenos e andrógenos, respectivamente. Considerando a hipótese de que o comportamento de expressão das enzimas do complexo citocromo P540 permanece o mesmo no testículo e na via espermática de cutias durante as fases de desenvolvimento sexual, objetivou-se observar a atuação das enzimas P450 aromatase e P450c17 (17-α-hidroxilase/17,20-liase) nas diferentes fases do desenvolvimento sexual, detalhar a ultraestrutura dos componentes desta via e constatar o desenvolvimento do processo espermatogênico. Segmentos do ducto deferente, epidídimo e testículo de 28 cutias machos em diferentes idades (um dia, 2-14 meses) foram fixados em paraformoldeído e glutaraldeído. O material foi coletado no Centro de Multiplicação da Universidade Federal Rural do Semiárido, Mossoró, RN (Autorização IBAMA nº 2028236/2008). Foram feitos: histologia, seguindo o protocolo padrão para hematoxilina e eosina; processamento para corte semifino (azul de toluidina); microscopia eletrônica de transmissão e varredura; e imunohistoquímica. Este trabalho foi pioneiro ao observar que o epidídimo de cutias é composto por células basais, células principais, células haloides e, quando impúbere, por células \"limpas\", e por células apicais, quando a partir da puberdade. O ducto deferente de cutias antes da puberdade era caracterizado por duas camadas musculares, possivelmente devido à falta de trânsito espermático. No epitélio germinativo foram encontradas, em sua maioria, células em prófase I, principalmente em paquíteno. A espermiogênese é completa quando na pré-puberdade, entretanto, a espermiação ocorre a partir dos 9 meses de idade. A expressão da enzima P450 aromatase variou ao longo do desenvolvimento sexual, sendo na puberdade seu pico de atividade. A P450c17 não mostrou nenhuma ação em qualquer fase sexual. Pode-se concluir que o epitélio germinativo testicular e intersticial, bem como o epitélio pseudoestratificado estereociliado do epidídimo e do ducto deferente de cutias criadas em cativeiro sofrem mudanças morfológicas e funcionais ao longo do desenvolvimento sexual. As atividades androgênicas preponderantes em cutias criadas em cativeiro ocorrem no período da puberdade

Wild species with great potential livestock should be explored rationally in order to prevent the extinction of the same. Thus is the importance of research aimed at reproducing those bred in captivity, such as agouti (Dasyprocta sp.). This animal is a mammal and rodent living mostly in the Brazilian Caatinga. The ultrastructure is the basis for determining the stages and thus facilitates comparisons of cases between agouti and wild rodents or other mammals. The enzymes P450 aromatase and P450c17 are responsible for regulating the production of estrogens and androgens, respectively. On the assumption that the behavior of expression of the enzymes of complex cytochrome P540 remains the same in the testis and excurrent canals of the agouti during the stages of sexual development, aimed to observe the activity of the enzymes P450 aromatase and P450c17 (17-α- hidroxilase/17,20-lyase) in different stages of sexual development, detail the ultrastructure of the components of this pathway and observe the development of spermatogenesis. Segments of the vas deferens, epididymis and testis of 28 agouti males at different ages (1 day, 2-14 months) were fixed in glutaraldehyde and paraformoldehyde. The material was collected on Center of Multiplication of Federal Rural University of the Semi-arid, Natal, RN (IBAMA Authorization No. 2028236/2008). Were made: histology following the standard protocol for hematoxylin and eosin; processing to semithin (blue toluidine), electron microscopy of transmission and scanning; and immunohistochemistry. This work was pioneered by observing that the epididymis is composed by basal cells, principal cells, haloids cells; and for clean cells when impubertal and apical cells after puberty in agoutis. The vas deferens before puberty was characterized by two muscle layers, possibly due to the lack of sperm transit. In the germinal epithelium were found mostly cells in prophase I, mainly in pachytene. Spermiogenesis is complete when prepubertal phase; however, spermiation takes place from 9 months of age. The expression of enzymes of the cytochrome complex varied over sexual development and peak activity of P450 aromatase was at puberty. The P450c17 showed no action at any stage of sexual development. It can be concluded that the testicular germinal epithelium and interstitial epithelium as well as the pseudostratified estereociliated epithelium of the epididymis and vas deferens undergo morphological and functional changes during the sexual development. Androgenic activities prevalent in agoutis kept in captivity occur during puberty

MICROSTRUCTURE AND MORPHOQUANTITATIVE STUDY OF PINEAL GLAND IN SANTA INES SHEEP / Estudo morfoquantitativo e da microestrutura da glândula pineal em ovinos Santa Inês.

O presente estudo avaliou os aspectos morfoquantitativos e qualitativos da glândula pineal em fêmeas de ovinos da raça Santa Inês em atividade reprodutiva e anestro fisiológico. Foram utilizados sete ovinos, fêmeas e adultas, coletados em frigoríficos da região de Brasília-DF. Estes não apresentavam sinais clínicos relacionados a afecções do sistema nervoso. Os encéfalos foram retirados e suas dimensões mensuradas. Posteriormente foram seccionados para expor a glândula pineal e mensurar suas dimensões. Os fragmentos do diencéfalo, contendo a glândula pineal, foram submersos em solução aquosa a 20% de formaldeído e posteriormente submetidos a técnicas histológicas convencionais. Para a avaliação morfoquantitativa desta glândula, foram empregadas as colorações Hematoxilia-Eosina, Azul de Toluidina e Tricrômio de Gomori. O encéfalo teve um comprimento médio de 67,25 ± 1,75 mm e a largura média de 58,97 ± 4,0 mm. Já a glândula pineal apresentou o comprimento médio de 6,98 &plu

MICROSTRUCTURE AND MORPHOQUANTITATIVE STUDY OF PINEAL GLAND IN SANTA INES SHEEP / Estudo morfoquantitativo e da microestrutura da glândula pineal em ovinos Santa Inês.

O presente estudo avaliou os aspectos morfoquantitativos e qualitativos da glândula pineal em fêmeas de ovinos da raça Santa Inês em atividade reprodutiva e anestro fisiológico. Foram utilizados sete ovinos, fêmeas e adultas, coletados em frigoríficos da região de Brasília-DF. Estes não apresentavam sinais clínicos relacionados a afecções do sistema nervoso. Os encéfalos foram retirados e suas dimensões mensuradas. Posteriormente foram seccionados para expor a glândula pineal e mensurar suas dimensões. Os fragmentos do diencéfalo, contendo a glândula pineal, foram submersos em solução aquosa a 20% de formaldeído e posteriormente submetidos a técnicas histológicas convencionais. Para a avaliação morfoquantitativa desta glândula, foram empregadas as colorações Hematoxilia-Eosina, Azul de Toluidina e Tricrômio de Gomori. O encéfalo teve um comprimento médio de 67,25 ± 1,75 mm e a largura média de 58,97 ± 4,0 mm. Já a glândula pineal apresentou o comprimento médio de 6,98 &plu

Triagem de plantas do cerrado e pantanal sul- matogrossense e ação do 3-o-tigloilmelianol isolado de guarea kunthiana (meliaceae) sobre rhipicephalus (boophilus) microplus (canestrini, 1887) (acari: ixodidae)

A bovinocultura leiteira e de corte são pilares de grande importância para a economia brasileira e dentre os entraves dessa atividade estão os ectoparasitas, em destaque o Ixodídeo R. microplus que tem adquirido resistência aos acaricidas sintéticos. Plantas do Cerrado e Pantanal Sul- Mato-grossense tem sido objeto de estudos biomonitorados em insetos e várias têm sido selecionadas com comprovada atividade. A presente pesquisa teve como objetivo realizar a triagem de 73 extratos etanólicos originários de 24 famílias e 44 espécies de plantas destes biomas e avaliar o efeito do composto 3-O-tigloilmelianol isolado de Guarea kunthiana (Meliaceae) sobre R. microplus. Na triagem, os extratos foram testados a 0,20% in vitro, sobre fêmeas ingurgitadas de R. microplus. Pelo índice de eficácia foram selecionados os extratos de frutos de G. kunthiana (99,08%), tronco de Nymphaea amazonum (Nymphaeaceae) (51,67%), folhas de Strychnos pseudoquina (Loganiaceae) (48,02%) e tronco de Ocotea lancifolia (Lauraceae) (34,52%). Para se conhecer as alterações causadas pelo 3-O-tigloilmelianol nos ovários, foram utilizados três grupos de 24 espécimes, entre controles e os tratados com a substância a 0,01% em teste de imersão por cinco minutos, enxugado e colocado em BOD a 27oC com 90% UR. Após 24, 48 ou 72 h cada grupo foi dissecado e os ovários foram depositados em ependorfes contendo solução tampão por 24 h, após foram incluídos em historesina, cortados com 2 ?m de espessura, depositados em lâminas de vidro, corados com azul de toluidina e observados em microscópio. Na análise biométrica, registrou-se significativa redução (50%) do índice gonadossomático nas amostras com 48 e 72 h após a imersão com relação ao controle. Houve redução significativa (22 a 60%) do número de oócitos I, IV e V nos grupos tratados, com 24 e 72 h após a imersão. Os oócitos II não foram reduzidos e os oócitos III sofreram redução somente com 24 h após a imersão. Os diâmetros maiores do citoplasma e do núcleo dos oócitos I tiveram redução com 72 h após a imersão, e no diâmetro menor do citoplasma a redução foi observada com 24 h após a imersão. Nos oócitos II somente o diâmetro maior do núcleo foi diminuído no grupo com 24 horas após a imersão. Os oócitos III e V não tiveram qualquer alteração no diâmetro dos oócitos, e os da fase IV tiveram redução no diâmetro maior do citoplasma. O 3-O-tigloilmelianol provocou marcada irregularidade na deposição do córion dos oócitos nas fases III e IV, com 24 h após imersão. O 3-O-tigloilmelianol foi testado sobre as larvas a 0,01 a 0,00125% utilizando o teste “sanduiche”, utilizando em torno de 300 exemplares após 15 a 21 dias de eclosão. A mortalidade foi avaliada, após 24, 72 e168 h, porém sem registro de ação. O 3-O-tigloilmelianol foi testado sobre as metalarvas e metaninfas utilizando o teste de imersão, utilizando 100 exemplares por concentração entre tratados e controles. As ecdises foram registradas por dez dias. Observou-se que 60% de redução da ecdise em metalarvas e 20% em metaninfas na maior concentração. Os resultados desta pesquisa evidenciaram que as plantas tanto do Cerrado quanto do Pantanal Sul Matogrossense são promissoras em estudo de triagem. A descoberta da ação do protolimonóide 3-O-tigloilmelianol isolado da G. kunthiana sobre o ciclo reprodutivo de R. microplus, justificando sua prospecção como possível alternativa de controle desse carrapato

Avaliação morfo-quantitativa da glândula pineal de éguas em atividade reprodutiva e em anestro fisiológico / Morpho-quantitative evaluation of the pineal gland in reproductive active and physiologically anestrous mares

A glândula pineal (GP) integra o epitálamo, mostra-se sensível à luz e secreta um hormônio, a melatonina. Em vertebrados sua secreção é estimulada na ausência de luminosidade e parece interferir na adaptação das funções reprodutivas às condições de luminosidade, especialmente em animais que se reproduzem sazonalmente, possibilitando o nascimento dos filhotes em época mais favorável. Considerando a importância econômica dos eqüinos, tais particularidades tornam-se alvo de pesquisas, justificadas pela ação da GP sobre a reprodução. Objetivou-se avaliar aspectos macro e microscópicos do órgão, como características qualitativas referentes a fibras colágenas (FC) e elásticas (FE); número (NP) e tamanho (PP) de pinealócitos (Pnlct), e eventuais correlações entre estas e os períodos reprodutivos. Para tanto, utilizaram-se 24 éguas, selecionadas por palpação retal e idade, e distribuídas em duas fases: atividade reprodutiva (AR) e anestro fisiológico (AF), cada uma com 2 grupos (3-8 e 15-20 anos). Os animais foram medidos à cernelha (H) e pesados (PV). Colheu-se amostra de sangue para dosagem de estrógeno (E2), progesterona (P4) e melatonina (Mlt), bem como procedeu-se à retirada do sistema genital (SG) para comprovação da fase reprodutiva; do encéfalo e GP para mensurações, e desta para análises histológicas. Nos espécimes, além da avaliação visual do SG, foram determinados o comprimento (CE) e largura (LE) dos encéfalos; o comprimento (CO), largura (LO) e altura (AO) dos ovários e das GP (CGP, LGP e AGP). Após documentação fotográfica as GP foram seccionadas em seu maior eixo, obtendo-se 4 quadrantes. Adotou-se esquema de rodízio para imersão destes em soluções de Bouin, glutaraldeído, Metacar e McDowell. Utilizaram-se colorações por hematoxilina-eosina, fucsina básica/azul de toluidina, Verhöeff e técnica específica para microscopia eletrônica de transmissão. Para estudo morfométrico foi determinado o perímetro de 480 Pnlct por animal e avaliado o número destes em 2,48 mm² de tecido glandular. Os dados foram analisados utilizando-se estatística descritiva, correlação de Pearson, teste "F" e de Scott-Knott. A GP localizou-se no plano sagital mediano, dorso-caudalmente à aderência inter-talâmica e ventralmente ao esplênio do corpo caloso, apresentando formato ovóide ou piriforme (tipo A ou sub-calosa). Está envolvida por cápsula de tecido conjuntivo (TC), da qual partem septos que, acompanhados por vasos sanguíneos, dividem o parênquima em lóbulos. Os principais componentes glandulares são Pnlct e astrócitos. O PV, H, concentrações de E2, Mlt, CE, LE, CGP, LGP, AGP e PP não diferiram entre idades e/ou fases. Não foram encontradas interações entre PV, H, tamanhos de ovários, encéfalo e GP. Concentrações de P4 foram maiores nos animais em AR. O NP foi maior naqueles em AF, em ambas idades. Observaram-se FE em éguas em AR e AF, mas em maior quantidade nas jovens. Naquelas em AR observou-se maior quantidade de TC e de FC do tipo I. Nas em AF foi maior a quantidade de FC do tipo III e de Pnlct. Fibras nervosas e vesículas granulares e agranulares foram identificadas tanto no citoplasma de Pnlct quanto fora dele. Concreções calcáreas foram evidenciadas no núcleo, citoplasma ou espaço extracelular de todas GPs, independentemente da idade e/ou fase reprodutiva

The pineal gland (PG) is part of the epithalamus, is sensitive to light and secretes the hormone melatonin. In vertebrates its secretion is stimulated by lack of luminosity and appears to interfere with reproductive functions adaptation to luminosity, especially in seasonal breeding animals, directing births to periods more favorable for offspring survival. Considering the equine industry economical importance, research targets, focused on PG action in reproduction becomes very relevant. The objective was to evaluate macro and microscopic aspects of the PG, qualitative characteristics pertaining to collagen (CF) and elastic (EF) fibers; pinealocyte (Pnlct) number (PN) and size (PS) and eventual correlations between these variables and distinct reproductive periods. Twenty four mares were selected by rectal palpation and age, and classified as physiologically anestrous (PA) or reproductively active (RA). Furthermore, within PA and RA mares, two age subgroups (3 - 8 and 15 - 20 years old) were formed. Whither height (WH) and body weight (BW) were also recorded. Blood samples were taken for estradiol (E2), progesterone (P4) and melatonin (Mlt) measurements, as well as collection of the reproductive tract (RT), of the encephalon and PG for gross measurements and histological analysis. Macroscopic evaluation of the RT, length (EL) and width (EW) of the encephalon were determined. Ovary and PG lengths, widths and heights (OL and PGL, OW and PGW, and OH and PGH, respectively) were also measured. After photographic documentation PGs were sectioned along their major axis resulting in four quadrants. A rotational scheme was adopted for PG tissue immersion in Bouin´s, glutaraldehyde, metacar and McDowell solutions. The following staining procedures were used: haematoxylin-eosin, basic fuchsin/toluidine blue, Verhöeff and a transmission electron microscopy specific technique. For the morphometric study, the diameter of 480 Pnlct per animal was determined. PN was determined in 2.48mm² of PG tissue. Data was analysed by descriptive statistics, Pearson´s correlation and F and Scott-knott tests were performed for mean comparisons. PG was located in the median sagital plane, dorsocaudally to the inter-thalamic adherence and ventrally to the corpus callosum esplenium, showing an ovoid or piriform (type A or sub-callosum). The PG is surrounded by connective tissue (CT), from which septa originate, followed by blood vessels that divide the parenchyma in lobules. The main glandular components are Plnct and astrocytes. Body weight, WH, E2, Mlt, EL, EW, PGL, PGW, PGH and PS did not differ between age group and reproductive status. No interactions between BW, WH, ovarian, encephalon and PG sizes were observed. Progesterone concentrations were higher in RA mares. Pinealocyte number was greater for RA mares from either age group. EF content was similar between RA and PA mares, but higher in the younger groups. Higher CT and type I CF were observed in RA mares. Higher type III CF and PN were found in FA mares. Nervous fibers and granular and agranular vesicles were identified either in the Plnct cytoplasm or in the extra-cellular space. Calcium concretions were observed in the nucleus, cytoplasm or extra-cellular space of all PGs, independently of age and/or reproductive status

Purificação e caracterização parcial de uma Fucana C de Dictyota mentrualis e estudo do seu efeito antiinflamatório e nociceptivo

Em anos recentes, os polissacarídeos sulfatatos de algas marinhas tem emergido como importante classe natural de biopolimeros que podem ser aplicado na assistencia medica humana e veterinaria, tendoi a vantagem da alsência de potencial risco de contaminação por virus animal. Algumas amostras de fucanas foram isoladas de alga marinha maron tensido estudadas quanto a sua atividader anticoagulante, antitrombótica, antiinflamatória e antiviral. O efeito biológico das fucanas tem sido dependente do grau de sulfatação e do tamanho da molecula do polissacarídeo. Neste estudo foi realizado uma analise da composição da fucana extraída da alga maron Dictyota menstrualis e o efeito na migração de leucócitos no peritonio com sua molulação influencia na modulação da sensação dolorosa periférica. O polissacarídeos sulfatado foi extraído da alga maron por digestão proteolítica sequido por precipitação com acetona produzindo 05 frações. A eletroforese em gel usando tampão 0,05 M 1,3-diaminopropano-acetato (PDA) pH 9,0 revelado com 1,0% de azul de toluidina demonstrou a presença de polissacarídeos em todas as frações. A analise química demonstrou que todas as frações são compostas principalmente de fucose, xilose, galactose, ácido uronico e sulfato. As eletroforeses em três sistemas de tampões demonstraram que a fração 2,0v possui apenas uma população de fucana. Este componente foi purificado por exclusão molecular e demonstrou uma composição de fucose, xilose, sulfato e ácido urônico de 1,0:1,7:1,1:0,5 respectivamente. O efeito desda heterofucana na migração de leucócito observado 06 horas após a aplicação zymozan no peritonio. A heterofucana demonstrou alta atividade antimigratória diminuindo a migração em 100% na concentração de 20,0mg/kg, também apresentamdo um efeito modulado da sensação dolorosa periférica de modo dose dependente. Estes resultados sugerem que este fucana possa ser utilizada como novo antiinflamatório na industria farmaceutica

In recent years, sulfated polysaccharides from marine algae have emerged as an important class of natural biopolymers with potential application in human and veterinary health care, while taking advantage of the absence of potential risk of contamination by animal viruses. Among these, fucans isolated from the cell walls of marine brown alga have been study due to their anticoagulant, antithrombotic, anti-inflammatory and antiviral activities. These biological effects of fucans have been found to depend on the degree of sulfation and molecular size of the polysaccharide chains. In the present study, we examined structural features of a fucan extracted from brown alga Dictyota menstrualis and its effect on the leukocyte migration to the peritoneum. The sulfated polysaccharides were extracted from the brown seaweed by proteolytic digestion, followed by sequential acetone precipitation producing 5 fractions. Gel lectrophoresis using 0.05 M 1,3-diaminopropane-acetate buffer, pH 9.0, stained with 0.1% toluidine blue, showed the presence of sulfated polysaccharides in all fractions. The chemical analyses demonstrated that all fractions are composed mainly of fucose, xylose, galactose, uronic acid, and sulfate. Electrophoresis in agarose gel in three different buffers demonstrated that the fraction 2.0v have only one population of fucan. This compound was purify by exclusion molecular. It has shown composition of fucose, xilose, sulfate and uronic acid in molar ration of 1.0: 1.7: 1.1: 0.5 respectively. The effect of this heterofucan on the leukocyte migration was observed 6h after zymozan (mg/g) administration into the peritoneum. The heterofucan showed higher antimigratory activity, it decrease the migration of leukocyte in 83.77% to peritoneum. The results suggest that this fucan is a new antimigratory compound with potential pharmacological appications

Aspectos histológicos e morfométricos da pele de cães do nascimento aos 70 dias de idade, clinicamente saudáveis

A pele exerce várias funções importantes, por isto várias conseqüências deletérias podem advir devido à sua imaturidade ou perda da sua integridade. O objetivo deste trabalho foi o de avaliar a evolução da pele dos cães recém-nascidos em relação à sua morfologia e celularidade desde o nascimento até 70 dias de idade, em 28 filhotes. As amostras de pele foram colhidas da região dorsal nos um, 20, 40 e 60 dias de vida, e da região ventral nos 10, 30, 50, e 70 dias de vida. As amostras obtidas por meio de biópsia da pele dos filhotes foram processadas e coradas pela hematoxilina-eosina, ácido periódico de Schiff, calleja sem permanganato de potássio, tricrômico de Masson e vermelho do congo-azul de toluidina acidificada. Comparando-se os resultados obtidos com os dados da literatura do cão adulto pôde-se verificar que os neonatos possuem os mesmos componentes da pele dos adultos. A espessura da membrana basal é linear tanto em machos quanto em fêmeas. Em relação ao sexo, houve diferença significativa da espessura das fibras colágenas da derme superficial e derme profunda, fibras elásticas e reticulares do dorso direito entre os machos e fêmeas de um, 20, 40 e 60 dias de vida. Nos filhotes machos as fibras tiveram espessamento linear. No que diz respeito à idade também houve diferença estatística da espessura das fibras colágenas da derme superficial e profunda e fibras elásticas. Nos filhotes machos há tendência de espessamento destas fibras com o amadurecimento dos animais. O local anatômico da colheita, dorso direito e ventre direito dos animais de 60 dias de idade, teve influência na espessura das fibras elásticas. As fibras do dorso direito dos filhotes machos são mais espessas do que as do ventre direito dos filhotes fêmeas

The skin exerts several important functions; therefore many deleterious consequences may occur due to its immaturity or loss of integrity. The scope of this study was to evaluate the evolution of skin from newborn dogs in its morphology and cellular content from birth until 70 days of age on 28 puppies. The skin samples were collected from the dorsal area at one, 20, 40 and 60 days of life; and from the ventral area at 10, 30, 50, 70 days of life. The samples were obtained through skin biopsy and stained by hematoxylineosin, Schiff periodic acid, calleja without potassium permanganate, trichromic of Masson, and modified congo red-acidified toluidine blue stain. Comparing the obtained results to literature data for adult dogs, it was verified that newborns posses the same skin components of adult dogs. The thickness of the basal membrane is linear for both males and females. Regarding sex, there was a significant difference of thickness on collagen fibers from superficial and deep dermis, as well as on elastic and reticular fibers from the right dorsum among males and females of one, 20, 40 and 60 days of life. On male puppies the fibers presented linear thickening. Concerning the age, there also was significant difference of thickness on collagen fibers from superficial and deep dermis and elastic fibers. On male puppies there is a tendency of thickening for those fibers, as the animals grow mature. The anatomic site for collecting ? right dorsum and right ventral area of 60 day-old animals ? had an influence on the thickness of elastic fibers. The fibers from the right dorsum of male puppies are thicker when comparing to those from the right ventral area of female puppies