EQUINE TRACHEOBRONCHIAL WASH FILTRATION AND ITS EFFECTS ON DIFFERENTIAL CELL COUNT

Abstract Tracheobronchial wash (TBW) is a method to recover cell samples from the airways. The cytology of TBW fluid is an important technique for the diagnosis of pulmonary diseases in horses. Excessive mucus in TBW may cause cell damage and morphological changes that hinder cell type recognition, resulting in a misdiagnosis. The aim of this study was to compare the results of differential cell count in a tracheobronchial wash of filtered and non-filtered samples. Endoscopy and TBW procedures were performed in thirty horses. Each TBW sample was split into two aliquots. Two groups were formed: non-filtrated aliquots (NF) and filtrated aliquots (F). The filtration was performed using a hydrophilic gauze pad. After centrifugation, the differential cell count was performed considering 300 nucleated cells. The filtrated aliquots results presented a significant increase of macrophages count and a significant decrease in neutrophils count comparing to the results of non-filtrated aliquots. These findings were consistent with results of filtered bronchoalveolar wash published studies. Therefore, the filtration of TBW is not an efficient method.

Resumo O lavado traqueobrônquico (LTB) é um método usado para recuperar uma amostra de células das vias respiratórias. A citologia do LTB é descrita como uma importante ferramenta no diagnóstico de doença pulmonar em equinos. O excesso de muco geralmente presente no LTB pode alterar a morfologia, dificultando a identificação dos tipos celulares e, por consequência, prejudicando a contagem diferencial de células e a interpretação diagnóstica. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da filtração do LTB de equinos sobre a contagem diferencial de células na avaliação citológica do lavado traqueobrônquico. Foram utilizados 30 equinos que foram submetidos a coletas de amostras de LTB via endoscópio. De cada amostra obtida foi separada uma primeira alíquota não filtrada (NF). Uma segunda alíquota (F) foi obtida filtrando-se o LTB, utilizando-se uma compressa de gaze hidrófila. As alíquotas F e NF foram submetidas à citocentrifugação para contagem diferencial de 300 células nucleadas. Verificou-se um aumento significativo no percentual de macrófagos e redução significativa de neutrófilos nas amostras filtradas. As alterações observadas foram condizentes com achados de estudos prévios realizados em lavado broncoalveolar. Conclui-se que a filtração do LTB não é uma metodologia aconselhável, pois acarreta em alterações de contagem significativas nas proporções de importantes marcadores celulares de inflamação, podendo gerar possíveis erros de diagnóstico.

Equine tracheobronchial wash filtration and its effects on differential cell count / Efeito da filtração do lavado traqueobrônquico de equinos sobre a contagem diferencial de células

Tracheobronchial wash (TBW) is a method to recover cell samples from the airways. The cytology of TBW fluid is an important technique for the diagnosis of pulmonary diseases in horses. Excessive mucus in TBW may cause cell damage and morphological changes that hinder cell type recognition, resulting in a misdiagnosis. The aim of this study was to compare the results of differential cell count in a tracheobronchial wash of filtered and non-filtered samples. Endoscopy and TBW procedures were performed in thirty horses. Each TBW sample was split into two aliquots. Two groups were formed: non-filtrated aliquots (NF) and filtrated aliquots (F). The filtration was performed using a hydrophilic gauze pad. After centrifugation, the differential cell count was performed considering 300 nucleated cells. The filtrated aliquots results presented a significant increase of macrophages count and a significant decrease in neutrophils count comparing to the results of non-filtrated aliquots. These findings were consistent with results of filtered bronchoalveolar wash published studies. Therefore, the filtration of TBW is not an efficient method

O lavado traqueobrônquico (LTB) é um método usado para recuperar uma amostra de células das vias respiratórias. A citologia do LTB é descrita como uma importante ferramenta no diagnóstico de doença pulmonar em equinos. O excesso de muco geralmente presente no LTB pode alterar a morfologia, dificultando a identificação dos tipos celulares e, por consequência, prejudicando a contagem diferencial de células e a interpretação diagnóstica. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da filtração do LTB de equinos sobre a contagem diferencial de células na avaliação citológica do lavado traqueobrônquico. Foram utilizados 30 equinos que foram submetidos a coletas de amostras de LTB via endoscópio. De cada amostra obtida foi separada uma primeira alíquota não filtrada (NF). Uma segunda alíquota (F) foi obtida filtrando-se o LTB, utilizando-se uma compressa de gaze hidrófila. As alíquotas F e NF foram submetidas à citocentrifugação para contagem diferencial de 300 células nucleadas. Verificou-se um aumento significativo no percentual de macrófagos e redução significativa de neutrófilos nas amostras filtradas. As alterações observadas foram condizentes com achados de estudos prévios realizados em lavado broncoalveolar. Conclui-se que a filtração do LTB não é uma metodologia aconselhável, pois acarreta em alterações de contagem significativas nas proporções de importantes marcadores celulares de inflamação, podendo gerar possíveis erros de diagnóstico

Equine tracheobronchial wash filtration and its effects on differential cell count / Efeito da filtração do lavado traqueobrônquico de equinos sobre a contagem diferencial de células

Tracheobronchial wash (TBW) is a method to recover cell samples from the airways. The cytology of TBW fluid is an important technique for the diagnosis of pulmonary diseases in horses. Excessive mucus in TBW may cause cell damage and morphological changes that hinder cell type recognition, resulting in a misdiagnosis. The aim of this study was to compare the results of differential cell count in a tracheobronchial wash of filtered and non-filtered samples. Endoscopy and TBW procedures were performed in thirty horses. Each TBW sample was split into two aliquots. Two groups were formed: non-filtrated aliquots (NF) and filtrated aliquots (F). The filtration was performed using a hydrophilic gauze pad. After centrifugation, the differential cell count was performed considering 300 nucleated cells. The filtrated aliquots results presented a significant increase of macrophages count and a significant decrease in neutrophils count comparing to the results of non-filtrated aliquots. These findings were consistent with results of filtered bronchoalveolar wash published studies. Therefore, the filtration of TBW is not an efficient method(AU)

O lavado traqueobrônquico (LTB) é um método usado para recuperar uma amostra de células das vias respiratórias. A citologia do LTB é descrita como uma importante ferramenta no diagnóstico de doença pulmonar em equinos. O excesso de muco geralmente presente no LTB pode alterar a morfologia, dificultando a identificação dos tipos celulares e, por consequência, prejudicando a contagem diferencial de células e a interpretação diagnóstica. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da filtração do LTB de equinos sobre a contagem diferencial de células na avaliação citológica do lavado traqueobrônquico. Foram utilizados 30 equinos que foram submetidos a coletas de amostras de LTB via endoscópio. De cada amostra obtida foi separada uma primeira alíquota não filtrada (NF). Uma segunda alíquota (F) foi obtida filtrando-se o LTB, utilizando-se uma compressa de gaze hidrófila. As alíquotas F e NF foram submetidas à citocentrifugação para contagem diferencial de 300 células nucleadas. Verificou-se um aumento significativo no percentual de macrófagos e redução significativa de neutrófilos nas amostras filtradas. As alterações observadas foram condizentes com achados de estudos prévios realizados em lavado broncoalveolar. Conclui-se que a filtração do LTB não é uma metodologia aconselhável, pois acarreta em alterações de contagem significativas nas proporções de importantes marcadores celulares de inflamação, podendo gerar possíveis erros de diagnóstico(AU)

SÍNDROME DA ASMA EQUINA A CAMPO: AVALIAÇÃO DE PARÂMETROS INFLAMATÓRIOS DO TRATO RESPIRATÓRIO POSTERIOR

A Síndrome da Asma Equina (SAE) é um conjunto de transtornos pulmonares inflamatórios crônicos, incluindo a Doença Inflamatória das Vias Aéreas e a Obstrução Recorrente das Vias Aéreas, variáveis fenotípicas que afetam a saúde e o desempenho dos cavalos. As duas condições apresentam características clínicas, citológicas e funcionais sobrepostas que surgem da resposta pulmonar a alérgenos encontrados no ambiente. Dentre os mecanismos fisiopatológicos das afecções inflamatórias pulmonares estão o estresse oxidativo e a atividade dos neutrófilos, em especial a NETose, fenômeno inovador e pouco estudado em equinos, com significado clínico ainda não compreendido. Tais mecanismos são apontados como importantes contribuintes para a inflamação crônica e o dano tecidual pulmonar. O objetivo do presente estudo é confirmar a hipótese de associação direta entre o estresse oxidativo pulmonar e sistêmico à presença de redes extracelulares de neutrófilos (NETs) em secreções respiratórias de cavalos mantidos à pasto com diagnóstico de SAE. Para tal, foi realizado um estudo analítico transversal com 39 equinos, sadios, sem confirmação diagnóstica de asma ou com diagnóstico de asma. Foram realizados exame clínico, endoscópico, colheita de sangue, lavado traqueal e broncoalveolar. Além da citologia das secreções respiratórias, foram determinados o índice de peroxidação lipídica pulmonar e sistêmico (TBARS), bem como a existência de NETs no trato respiratório posterior. Os resultados demonstraram que a asma em sua variável fenotípica branda apresenta curso assintomático e que os animais com mais de sete anos são os mais acometidos. Percebe-se que a distinção entre cavalos saudáveis e com asma leve/moderada mantidos à pasto é limitada. A mensuração do TBARS pulmonar e sistêmico não possui correlação direta com a presença das NETs, mas houve correlação do estresse oxidativo pulmonar com as NETs verificado pela atividade da enzima mieloperoxidase (MPO). O lavado traqueal mostrou-se melhor para avaliação das NETs, havendo correlação entre as variáveis que a compõem. O escore de muco traqueal esta associado ao desequilíbrio oxidativo na árvore traqueobrônquica. As atividades das enzimas DNAse e MPO no lavado traqueal mostraram-se ferramentas potenciais para entender a dinâmica inflamatória da asma. A metodologia proposta permitiu pressupor a presença das NETs nos fluidos respiratórias. Entretanto, apenas a MPO mostrou-se útil na diferenciação entre animais sadios e com SAE leve/moderada, sendo uma ferramenta importante para o diagnóstico de equinos com asma subclínica.

Equine Asthma Syndrome (EAS) is a set of chronic inflammatory pulmonary disorders, including airway inflammatory disease and recurrent airway obstruction, phenotypic variables that affect horse health and performance. Both conditions present overlapping clinical, cytological and functional characteristics that arise from the pulmonary response to allergens found in the environment. Among the pathophysiological mechanisms of inflammatory lung diseases are oxidative stress and neutrophil activity, especially NETosis, an innovative phenomenon that has not been studied in equines, with clinical significance not understood yet. Such mechanisms are identified as important contributors to chronic inflammation and lung tissue damage. The objective of the present study is to confirm the hypothesis of a direct association between pulmonary and systemic oxidative stress to the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) in respiratory secretions of horses kept on grass with a diagnosis of EAS. For this, a cross-sectional analytical study was performed with 39 horses: healthy animals, with asthma or without asthma diagnosis confirmation. Clinical, endoscopic, blood collection, tracheal and bronchoalveolar lavage were performed. In addition to the cytology of respiratory secretions, the pulmonary and systemic lipid peroxidation index (TBARS) was determined, as well as the existence of NETs in the respiratory tract. The results showed that asthma in its mild phenotypic variable presents an asymptomatic course and that animals older than seven years are the most affected. It can be seen that the distinction between healthy horses and mild asthma maintained in pasture is limited. The measurement of pulmonary and systemic TBARS does not have a direct correlation with the presence of NETs, but there was a correlation of pulmonary oxidative stress with the NETs verified by the activity of the myeloperoxidase (MPO) enzyme. The tracheal wash was better for evaluation of the NETs, and there was a correlation between the variables that compose it. The tracheal mucus score is associated with oxidative imbalance in the tracheobronchial tree. The activities of the DNAse and MPO enzymes in the tracheal lavage were potential tools to understand the inflammatory dynamics of asthma. The proposed methodology allowed us to assume the presence of NETs in respiratory fluids. However, only MPO has been shown to be useful in the differentiation between healthy animals and with mild / moderate EAS, being an important tool for the diagnosis of horses with subclinical asthma.

Citologia do lavado broncoalveolar de eqüinos da Polícia Militar do Distrito Federal / Brochoalveolar wash citology from horses of the military police in the federal district

O objetivo deste trabalho foi avaliar os tipos celulares das vias aéreas de eqüinos da Polícia Militar do Distrito Federal. Foram utilizados 24 eqüinos, distribuídos em 2 grupos de 12: grupo I - animais em ronda e grupo II - animais afastados da escala. Ao exame físico e hematológico, os resultados foram compatíveis com a ausência de afecções clínicas. Na lavagem broncoalveolar (LBA), foram infundidos 240mL de solução salina. os LBAs, o grupo I registrou 25,25±7,3 células escamosas, 20,2±5,5 células epiteliais, 22,2±6,23 macrófagos e 2,02±5,77 eritrócitos. Nos LBAs do grupo II, observou-se 31,0±9,47 células escamosas, 19,0±5,20 células epiteliais, 43,0±13,88 macrófagos, 4,0±1,52 eosinófilos e 3,0±1,0 eritrócitos. Na verificação de complicações pós-experimento, não foram registradas seqüelas advindas da técnica de colheita.(AU)

The objective of this study was evaluate the airways' cells types from horses of the military police of Federal District. It was used 24 horses, divided into 2 groups of 12: group I - animals in policy activity and group II - animals out of policy activity. At the inspection, physical exam and blood exam, the results agreed with no present clinical pathologies. It was infused 240mL of saline solution in the bronchoalveolar wash. In the bronchoalveolar wash, the group I registered 25.25±7.3 squamous cells, 20.2±5.5 epithelial cells, 22.2±6.23 macrophages and 2.02±5.77 erythrocytes, and in the group II, it was observed 31.0±9.47 squamous cells, 19.0±5.20 epithelial cells, 43.0± 13.88 macrophages, 4.0± 1.52 eosinophile and 3.0± 1.0 erythrocytes. Verifying the occurrence of side effects after the experiment, there was no problem from the used technique.(AU)

Evaluation of tracheal wash of horses with exercise-induced pulmonary hemorrhage treated with furosemide / Avaliação do lavado traqueal de eqüinos portadores de hemorragia pulmonar induzida pelo exercício tratados com furosemida

Avaliaram-se os efeitos da furosemida sobre o lavado traqueal de eqüinos portadores de hemorragia pulmonar induzida pelo exercício (HPIE). Nove animais foram distribuídos em três grupos experimentais: grupo-controle, formado por três eqüinos hígidos e não portadores da doença; grupo 1, com três eqüinos portadores e não submetidos a tratamento; e grupo 2, com três eqüinos portadores da doença e tratados com furosemida na dose de 1mg/kg, quatro horas antes da atividade atlética. As amostras do lavado traqueal foram obtidas duas horas após o exercício físico e sua avaliação demonstrou que o uso do medicamento reduziu a severidade da HPIE, refletida pela redução no número relativo de hemossiderófagos (de 7,8 por cento no grupo 1 para 4,2 por cento no grupo 2) e no número de eritrócitos (de 77666 x 10³/ml no grupo 1 para 8000x10³/ml no grupo 2).(AU)

Cytological and microbiologic evaluation of bronchoalveolar lavage in healthy dogs / Avaliação citológica e microbiológica do lavado broncoalveolar em cães hígidos

The aim of this study was to standardize the transtracheal technique to collect the broncoalveolar lavage fluid without broncoscopy and to determine the normal cytologic and microbiologic findings of the lower respiratory tract wash, in healthy dogs. Thirty adult dogs (12 males and 18 females), age from one to eight years old, were submitted to sedation in order to permit the bronchoalveolar lavage. Bacterial and fungal microorganisms were isolated in 46.67% and 16.67 % of the lavage samples, respectively. In 43.3% out of the samples were isolated two or more microorganisms. Mean and standard deviation of colony-forming units (CFU)/ml were 21540±55298 and 13.33±43.4 for bacterial and fungal organisms, respectively. In cytological evaluation, alveolar macrophage was the predominant cell. Small amounts of neutrophils, lymphocytes, eosinophils, epithelial cells and bacteria were observed, besides positive correlation between macrophage score and bacteria CFU. The technique was adequated and showed wide margin of security.

Objetivando-se padronizar a técnica transtraqueal para coleta do lavado broncoalveolar não broncoscópico, bem como caracterizar a celularidade e microbiota residente em lavados do trato respiratório inferior (TRI) de cães normais, da região de Presidente Prudente, foram estudados 30 cães saudáveis, machos e fêmeas, sem raça definida, adultos. Os animais foram tranqüilizados e então submetidos à coleta do lavado, pela técnica transtraqueal. Foram isolados microrganismos bacterianos e fúngicos, respectivamente em 46,67% e 16,67% dos animais pesquisados. Em 43,3% das amostras foram isolados dois ou mais microrganismos. As médias de unidades formadoras de colônia (UFC) por mililitro de lavado broncoalveolar, para bactérias e fungos, foram de 21540 ± 55289 e 13,33 ± 43,4, respectivamente. A citologia revelou predominância de macrófagos alveolares e pequenas quantidades de neutrófilos, linfócitos, eosinófilos, células epiteliais e bactérias, além de correlação positiva entre o escore de macrófagos e as contagens de UFC de bactérias. A técnica avaliada mostrou-se adequada e segura.

Cytological and microbiologic evaluation of bronchoalveolar lavage in healthy dogs / Avaliação citológica e microbiológica do lavado broncoalveolar em cães hígidos

The aim of this study was to standardize the transtracheal technique to collect the broncoalveolar lavage fluid without broncoscopy and to determine the normal cytologic and microbiologic findings of the lower respiratory tract wash, in healthy dogs. Thirty adult dogs (12 males and 18 females), age from one to eight years old, were submitted to sedation in order to permit the bronchoalveolar lavage. Bacterial and fungal microorganisms were isolated in 46.67% and 16.67 % of the lavage samples, respectively. In 43.3% out of the samples were isolated two or more microorganisms. Mean and standard deviation of colony-forming units (CFU)/ml were 21540±55298 and 13.33±43.4 for bacterial and fungal organisms, respectively. In cytological evaluation, alveolar macrophage was the predominant cell. Small amounts of neutrophils, lymphocytes, eosinophils, epithelial cells and bacteria were observed, besides positive correlation between macrophage score and bacteria CFU. The technique was adequated and showed wide margin of security.

Objetivando-se padronizar a técnica transtraqueal para coleta do lavado broncoalveolar não broncoscópico, bem como caracterizar a celularidade e microbiota residente em lavados do trato respiratório inferior (TRI) de cães normais, da região de Presidente Prudente, foram estudados 30 cães saudáveis, machos e fêmeas, sem raça definida, adultos. Os animais foram tranqüilizados e então submetidos à coleta do lavado, pela técnica transtraqueal. Foram isolados microrganismos bacterianos e fúngicos, respectivamente em 46,67% e 16,67% dos animais pesquisados. Em 43,3% das amostras foram isolados dois ou mais microrganismos. As médias de unidades formadoras de colônia (UFC) por mililitro de lavado broncoalveolar, para bactérias e fungos, foram de 21540 ± 55289 e 13,33 ± 43,4, respectivamente. A citologia revelou predominância de macrófagos alveolares e pequenas quantidades de neutrófilos, linfócitos, eosinófilos, células epiteliais e bactérias, além de correlação positiva entre o escore de macrófagos e as contagens de UFC de bactérias. A técnica avaliada mostrou-se adequada e segura.

Avaliação citológica de lavados traqueobrônquico e broncoalveolar em cavalos clinicamente sadios pelo método de coloração de Rosenfeld

Comparisons of tracheobronchial (TBW) and bronchoalveolar wash (BAL) cytologies, using respectively 25 and 5 normal horses were made. Differential cell counts were made on both TBW and BAL fluids on Rosenfeld-stained cytocentrifuged preparations. Macrophages were the predominant cell types seen in both fluid samples and these findings suggest the possibility of an adequate sampling of the distal air passages. Differences were found in lymphocytes and macrophages between TBW and BAL cytologies. The main cell types in BAL fluids were macrophages (54.78±15.92%) and lymphocytes (33.70±14.41%). On the other hand, lymphocytes and macrophages were found in 2.91±3.44% and 81.51±11.06% of cell types in TBW fluids, respectively. Also, there were absences of epithelial and goblet cells in BAL cytology, and these explain the adequacy of the lower respiratory tract sampling, performed without causing trauma of proximal air passages. Other cell types were found in few numbers and no differences were found between TBW and BAL fluids. Differences were not detected concerning morphological characteristics between TBW and BAL preparations.

Foram realizados estudos comparativos dos exames citológicos obtidos a partir de amostras dos lavados traqueobrônquico (LTB) e broncoalveolar (LBA) de cavalos clinicamente sadios. Foram colhidas 25 amostras pela técnica do LTB (25 animais) e 25 amostras pela técnica do LBA (5 animais). A suspensão celular dos lavados foi centrifugada, confeccionando-se lâminas coradas pelo método de Rosenfeld. A contagem diferencial mostrou predominância de macrófagos em ambas as técnicas de colheita, confirmando a possibilidade de sua utilização para obter amostras celulares das vias aéreas distais. Observou-se diferença na proporção de macrófagos e linfócitos entre as técnicas dos lavados traqueobrônquico e broncoalveolar. As porcentagens de macrófagos e linfócitos observadas foram de 81,51±11,06% e 2,91±3,44% no LTB e de 54,78±15,92% e 33,70±14,41% no LBA, respectivamente. Também notou-se ausência de células epiteliais cilíndricas e produtoras de muco em LBA, indicando que essas amostras são provenientes da população alveolar e que esta técnica não traumatizou as vias aéreas proximais. Os demais tipos celulares foram identificados em proporções semelhantes e em pequenas quantidades em ambas as técnicas. As características morfológicas dos tipos celulares foram semelhantes nas duas técnicas.

Avaliação citológica de lavados traqueobrônquico e broncoalveolar em cavalos clinicamente sadios pelo método de coloração de Rosenfeld

Comparisons of tracheobronchial (TBW) and bronchoalveolar wash (BAL) cytologies, using respectively 25 and 5 normal horses were made. Differential cell counts were made on both TBW and BAL fluids on Rosenfeld-stained cytocentrifuged preparations. Macrophages were the predominant cell types seen in both fluid samples and these findings suggest the possibility of an adequate sampling of the distal air passages. Differences were found in lymphocytes and macrophages between TBW and BAL cytologies. The main cell types in BAL fluids were macrophages (54.78±15.92%) and lymphocytes (33.70±14.41%). On the other hand, lymphocytes and macrophages were found in 2.91±3.44% and 81.51±11.06% of cell types in TBW fluids, respectively. Also, there were absences of epithelial and goblet cells in BAL cytology, and these explain the adequacy of the lower respiratory tract sampling, performed without causing trauma of proximal air passages. Other cell types were found in few numbers and no differences were found between TBW and BAL fluids. Differences were not detected concerning morphological characteristics between TBW and BAL preparations.

Foram realizados estudos comparativos dos exames citológicos obtidos a partir de amostras dos lavados traqueobrônquico (LTB) e broncoalveolar (LBA) de cavalos clinicamente sadios. Foram colhidas 25 amostras pela técnica do LTB (25 animais) e 25 amostras pela técnica do LBA (5 animais). A suspensão celular dos lavados foi centrifugada, confeccionando-se lâminas coradas pelo método de Rosenfeld. A contagem diferencial mostrou predominância de macrófagos em ambas as técnicas de colheita, confirmando a possibilidade de sua utilização para obter amostras celulares das vias aéreas distais. Observou-se diferença na proporção de macrófagos e linfócitos entre as técnicas dos lavados traqueobrônquico e broncoalveolar. As porcentagens de macrófagos e linfócitos observadas foram de 81,51±11,06% e 2,91±3,44% no LTB e de 54,78±15,92% e 33,70±14,41% no LBA, respectivamente. Também notou-se ausência de células epiteliais cilíndricas e produtoras de muco em LBA, indicando que essas amostras são provenientes da população alveolar e que esta técnica não traumatizou as vias aéreas proximais. Os demais tipos celulares foram identificados em proporções semelhantes e em pequenas quantidades em ambas as técnicas. As características morfológicas dos tipos celulares foram semelhantes nas duas técnicas.