Pontos críticos na produção de embriões equinos com enfoque na doadora / Critical points in the production of equine embryos with a donor approach

Inúmeras são as vantagens da utilização da técnica de transferência de embriões (TE) em equinos. No entanto, alguns fatores podem afetar a taxa de recuperação embrionária: dia da colheita do embrião; condição uterina e idade da doadora; manejos reprodutivo, sanitário e nutricional; garanhão/qualidade do sêmen; habilidade do técnico; condições climáticas, número de ovulações e adaptação da doadora. O objetivo deste artigo é revisar os fatores que podem exercer influência sobre a taxa de recuperação embrionária tendo impacto direto nos índices reprodutivos de um programa de TE.(AU)

There are countless advantages of using the embryo transfer (ET) technique in horses. However, some factors may affect the embryonic recovery rate: day of embryo collection; uterine condition and donor age; reproductive, health and nutritional management; stallion/semen quality; skill of the technician; climatic conditions, number of ovulations and adaptation of the donor. The objective of this article is to review those factors that can influence the embryonic recovery rate, having a direct impact on the reproductive rates of an ET program.(AU)

Prostaglandin F2α treatment concurrent with artificial insemination does not affect bovine embryo production / Administração de prostaglandina F2 alfa no momento da inseminação artificial não afeta a produção de embriões bovinos

ABSTRACT: Treatment with prostaglandin F2α (PGF) induces ovulation and increases conception rates in cows, while improving embryo production in buffalos. However, its effect on superovulated cows is unknown. This study verified whether single PGF administration concurrent with artificial insemination (AI) improves fertilization and embryo production rates in superovulated cows. In each replicate, embryo donor cows were equally allocated to two groups: the untreated control and PGF groups. The latter of which received 482 µg of cloprostenol concurrent with the first AI. Each cow (n = 35) was subjected to two superovulations (SOV) in a crossover design (total = 70 embryo collections). In the control and PGF groups, respectively, the observed responses were [median (95% CI)]: 12 (10-18) and 15 (12-18) total structures, 9 (7-11) and 7 (6-10) viable embryos, 1 (0-1) and 1 (1-3) degenerated embryos, and 1 (0-3) and 2 (0-5) oocytes (P > 0.05). In conclusion, single PGF treatment concurrent with the first AI did not affect embryo production in superovulated cows.

RESUMO: A prostaglandina F2α (PGF) pode induzir a ovulação e melhorar tanto a concepção em vacas, como a produção de embriões em búfalas, mas o efeito em vacas superovuladas é desconhecido. Esse estudo teve como objetivo verificar se a administração de uma dose de PGF na inseminação artificial (IA) após a superovulação (SOV) melhora as taxas de fecundação e produção embrionária em vacas. Em cada replicação, vacas doadoras de embriões foram equilibradamente alocadas em dois grupos: controle, não tratado, ou PGF, que recebeu 482 µg de cloprostenol no momento da primeira IA. Cada doadora (n = 35) foi submetida a duas SOV em um delineamento crossover (total = 70 coletas de embriões). Nos grupos controle e PGF, respectivamente, foram observados [medianas (IC 95%)]: 12 (10-18) e 15 (12-18) estruturas totais; 9 (7-11) e 7 (6-10) embriões viáveis; 1 (0-1) e 1 (1-3) embriões degenerados; e 1 (0-3) e 2 (0-5) ovócitos (P > 0,05). Conclui-se que uma única administração de PGF no momento da primeira IA não afeta a produção embrionária de vacas superovuladas.

Processos que afetam a taxa de gestação pós-inovulação do embrião equino / Processes that affect pregnancy rate after embryo transfer

A transferência de embriões equinos é uma biotecnologia que traz inúmeros benefícios reprodutivos para um haras. Entretanto, os índices reprodutivos obtidos numa estação de monta podem ser afetados por diversos fatores que interferem tanto na recuperação embrionária que normalmente são relacionados à doadora de embriões, quanto na taxa de gestação na receptora de embriões. O objetivo do presente artigo foi revisar os fatores relacionados à receptora de embriões em programas de transferência de embriões equinos.(AU)

Equine embryo transfer is a biotechnology that brings reproductive benefits to a stud farm. However, the reproductive rates obtained in a breeding season can be affected by several factors that interfere both in the embryonic recovery that are normally related to the embryo donor, and in the pregnancy rate in the embryo recipient. The aim of this article was to review the factors related to the recipient of embryos in equine embryo transfer programs.(AU)

Ichthyofauna on the move: fish colonization and spread through the São Francisco Interbasin Water Transfer Project

Projects on river basin integration are keen social-economical drivers in dry regions like the Brazilian semiarid, however, there are concerning ecological impacts implied in those projects. In a long-term analysis, ichthyofauna colonization and spread through the East Axis of the São Francisco River Integration Project (SFIP) was monitored to assess possible impacts on the receiving Paraíba River basin. The fish were collected semiannually (2012 to 2021) from 19 sites in the São Francisco (SF) and Paraíba (PB) basins. A total of 69 fish species were recorded, with distinct fish assemblages between SF (n = 50), PB (n = 35), and the SFIP artificial reservoirs (n = 25). The SFIP reservoirs were colonized by species from the donor basin (SF). In a pioneer finding, Anchoviella vaillanti was recorded for the first time in the receiving basin and it is in the process of establishment. The two SF species that reached PB through the SFIP canals (A. vaillanti and Moenkhausia costae) may be using their year-round reproduction and wide diet to successful spread and colonize the new environment. Since we detected species with potential to reach the receiving basin and became invasives, the implementation of barriers to contain their spread are recommended.(AU)

Projetos de integração de bacias hidrográficas são socialmente importantes em regiões como o semiárido brasileiro, porém há impactos ecológicos preocupantes implícitos nesses grandes projetos de infraestrutura. A colonização e dispersão da ictiofauna pelo Eixo Leste do Projeto de Integração do Rio São Francisco (PISF) foi monitorada para avaliar possíveis impactos na bacia receptora do rio Paraíba do Norte. Os peixes foram coletados semestralmente (2012 a 2021) em 19 locais das bacias do São Francisco (SF) e Paraíba (PB). Foram registradas 69 espécies de peixes, sendo 50 nos pontos do SF, 25 nos reservatórios artificiais ao longo do PISF e 35 nos pontos do PB. As assembleias de peixes das bacias do SF, PB e dos reservatórios do PISF foram significativamente distintas. Os reservatórios do PISF foram colonizados por espécies provenientes da bacia doadora (SF). Anchoviella vaillanti foi registrada pela primeira vez na bacia receptora do PB e está em processo de estabelecimento. As duas espécies do SF que chegaram ao PB pelos canais do PISF (A. vaillanti e Moenkhausia costae) apresentaram dieta e estratégias reprodutivas que permitem o sucesso na disseminação e colonização. Uma vez que foram detectadas espécies com potencial de atingir a bacia receptora, recomenda-se o monitoramento e manejo contínuos.(AU)

Impacto da qualidade seminal e dos fatores relativos ao macho na produção in vitro de embriões bovinos / Impact of semen quality and other male-related factors on in vitro embryo production in cattle

A importância da qualidade do sêmen no processo comercial de produção in vitro de embriões (PIVE) é bem conhecida, ainda que não devidamente relatada na literatura. Existe não apenas uma significativa diferença entre touros nas taxas de clivagem e de blastocistos, mas também nas taxas de prenhezes subsequentes. Adicionalmente, há evidências de interação entre touro e tecnologia de processamento do sêmen (particularmente na separação de espermatozoides por sexo), entre touro e protocolo de preparação do sêmen para fertilização in vitro, e ainda entre touro e doadora. Controlar estes efeitos em uma rotina comercial tem sido um desafio crescente para os laboratórios, particularmente com a alta oferta de novos touros decorrente da recente adoção da seleção genômica. O presente trabalho aborda algumas destas questões, com base na experiência da Bio Biotecnologia da Reprodução Animal nesta área.(AU)

The importance of semen quality in a commercial in vitro embryo production (IVEP) routine is well-known, although underreported in the literature. There is not only a significant difference among sires on cleavage and blastocyst rates, but also on subsequent pregnancy rates. Moreover, there are evidences of interaction between sire and sperm processing technology (particularly in the case of sex-sorted semen), between sire and the protocol for sperm preparation for in vitro fertilization, and between sire and donor. Controlling such effects in a commercial routine has been a growing challenge for the laboratories, especially due to the high turnover of sires caused by the recent adoption of genomic selection in most breeds. The current study discusses some of these aspects, from the perspective of the experience of Bio Biotecnologia da Reprodução Animal in this field.(AU)

Prostaglandin F2α treatment concurrent with artificial insemination does not affect bovine embryo production / Administração de prostaglandina F2 alfa no momento da inseminação artificial não afeta a produção de embriões bovinos

Treatment with prostaglandin F2α (PGF) induces ovulation and increases conception rates in cows, while improving embryo production in buffalos. However, its effect on superovulated cows is unknown. This study verified whether single PGF administration concurrent with artificial insemination (AI) improves fertilization and embryo production rates in superovulated cows. In each replicate, embryo donor cows were equally allocated to two groups: the untreated control and PGF groups. The latter of which received 482 µg of cloprostenol concurrent with the first AI. Each cow (n = 35) was subjected to two superovulations (SOV) in a crossover design (total = 70 embryo collections). In the control and PGF groups, respectively, the observed responses were [median (95% CI)]: 12 (10-18) and 15 (12-18) total structures, 9 (7-11) and 7 (6-10) viable embryos, 1 (0-1) and 1 (1-3) degenerated embryos, and 1 (0-3) and 2 (0-5) oocytes (P > 0.05). In conclusion, single PGF treatment concurrent with the first AI did not affect embryo production in superovulated cows.

A prostaglandina F2α (PGF) pode induzir a ovulação e melhorar tanto a concepção em vacas, como a produção de embriões em búfalas, mas o efeito em vacas superovuladas é desconhecido. Esse estudo teve como objetivo verificar se a administração de uma dose de PGF na inseminação artificial (IA) após a superovulação (SOV) melhora as taxas de fecundação e produção embrionária em vacas. Em cada replicação, vacas doadoras de embriões foram equilibradamente alocadas em dois grupos: controle, não tratado, ou PGF, que recebeu 482 µg de cloprostenol no momento da primeira IA. Cada doadora (n = 35) foi submetida a duas SOV em um delineamento crossover (total = 70 coletas de embriões). Nos grupos controle e PGF, respectivamente, foram observados [medianas (IC 95%)]: 12 (10-18) e 15 (12-18) estruturas totais; 9 (7-11) e 7 (6-10) embriões viáveis; 1 (0-1) e 1 (1-3) embriões degenerados; e 1 (0-3) e 2 (0-5) ovócitos (P > 0,05). Conclui-se que uma única administração de PGF no momento da primeira IA não afeta a produção embrionária de vacas superovuladas.

Techniques of orthotopic renal transplantation in pigs: one donor to two recipients via inverted grafting

Purpose Although transplanting two kidneys from a single donor to two recipients has some advantages, the right and left kidneys are not anatomically identical; thus, a surgical procedure considering the anatomical features of the donor kidneys is needed when transplanting them into the opposite renal fossae. Based on vast experience, the surgical details of pig orthotopic kidney transplantation from one donor to two recipients was reported. Methods When the right kidney was transplanted to the left renal fossa, the graft was inverted upside down, not backwards, thus ensuring that the anteroposterior relationship of the renal vessels was maintained and anatomically natural vascular anastomosis could be performed. Results Using this technique, we could have developed a pig experimental model that is safe and has a high success rate, even for researchers in the middle of their training. This technique of inverting the graft upside down was reported in human kidney transplantation to make vascular anastomosis easier. Conclusions In pig orthotopic kidney transplantation from one donor to two recipients, an anatomically natural vascular anastomosis could be performed via inverted grafting when the right kidney was transplanted into the left renal fossa.(AU)

Synchronization with estradiol benzoate in the presence of the corpus luteum in Wagyu cows increases the number of medium follicles but does not interfere with in vitro production of embryos / Sincronização com benzoato de estradiol na presença do corpo lúteo em vacas de Wagyu aumenta o número de folículos médios, mas não interfere com a produção in vitro de embriões

Reproductive biotechnologies are emerging as an important element for livestock; however, some strategies must be modified to adapt to different breeding systems, such as the use of follicular synchronization protocols. This study aimed to evaluate follicular synchronization using estradiol benzoate (EB), in the presence of the corpus luteum (CL) from Wagyu oocyte donors in in vitro embryo production (IVEP). Rounds of IVEP were performed in heifers and cows (n=19) that were classified into three groups: G1/CL - animals with CL, G2/WCL - animals without CL, and G3/CL + EB - animals with CL that were subjected to follicular synchronization with EB at D0. The groups G1/CL and G2/WCL were considered the control and undertook the natural process of follicular dynamics. The results showed that the synchronization of the follicular wave with the application of EB in the presence of CL, presented a smaller number of small (6.05 ± 0.55) and large follicles (0.45 ± 0.15), but increased (P < 0.05) the number of medium-sized follicles (16.20 ± 0.90). However, the results of ovum pick up showed that regardless of whether or not EB was applied, and regardless of the presence or absence of CL in the Wagyu donor, there was no difference among the groups (P > 0.05) concerning the number of viable oocytes and the viability rate. It was concluded that follicular synchronization using EB in Wagyu oocyte donors that presented a CL, increased the number of medium-sized follicles. However, there was no improvement in the efficiency of ovum pick up, in vitro embryo production, and pregnancy rate.(AU)

As biotecnologias reprodutivas estão emergindo como um elemento importante para a pecuária, entretanto, algumas estratégias devem ser modificadas para se adaptar a diferentes sistemas de criação, como o uso de protocolos de sincronização folicular. Este estudo teve como objetivo avaliar a sincronização folicular utilizando benzoato de estradiol (BE), na presença do corpo lúteo (CL) de doadoras de oócitos Wagyu na produção in vitro de embriões (PIVE). Sessões de PIVE foram realizadas em novilhas e vacas (n=19) que foram classificadas em três grupos: G1/CL - animais com CL, G2/SCL - animais sem CL e G3/CL+BE - animais com CL que foram submetidos para sincronização folicular com BE em D0. Os grupos G1/CL e G2/ SCL foram considerados o controle e realizaram o processo natural da dinâmica folicular. Os resultados mostraram que a sincronização da onda folicular com a aplicação de BE na presença de CL, apresentou um menor número de folículos pequenos (6,05 ± 0,55) e grandes (0,45 ± 0,15), mas aumentou (P < 0,05) o número de folículos de tamanho médio (16,20 ± 0,90). No entanto, os resultados da ovum pick up mostraram que independente da aplicação ou não de BE, e independente da presença ou ausência de CL na doadora Wagyu, não houve diferença entre os grupos (P > 0,05) quanto ao número de oócitos viáveis e a taxa de viabilidade. Concluiu-se que a sincronização folicular por meio de BE em doadoras de oócitos Wagyu que apresentaram CL, aumentou o número de folículos de tamanho médio. No entanto, não houve melhora na eficiência da ovum pick up, na produção in vitro de embriões e na taxa de prenhez.(AU)

New approaches to superovulation in goats and sheep / Novos enfoques sobre superovulação em caprinos e ovinos

A superovulação é a principal tecnologia reprodutiva utilizada para a produção de embriões em ovinos e caprinos, mas a imprevisibilidade dos resultados continua sendo sua maior desvantagem. Vários fatores intrínsecos e extrínsecos são responsáveis por respostas superovulatórias variáveis em pequenos ruminantes e, portanto, esta questão é o foco principal de muitos estudos que visam melhorar a produção de embriões in vivo. A raça da doadora de embriões é uma fonte importante de variação nos resultados superovulatórios, e essa variabilidade pode ser observada não apenas entre genótipos prolíficos e não prolíficos. A suplementação com progesterona usada em conjunto com protocolos superovulatórios tem efeitos benéficos no desenvolvimento folicular e na produção de embriões; no entanto, a duração ideal da exposição à progesterona também parece variar entre as raças. Alguns estudos recentes dos tratamentos superovulatórios com hormônio folículo-estimulante (FSH) abordaram o tempo para iniciar um regime, a dose total do hormônio exógeno e o número de administrações. Além disso, embora a atividade ovariana seja fortemente afetada pela estação do ano, as flutuações anuais nas respostas superovulatórias ainda são controversas e mal compreendidas. Por último, vários estudos demonstraram que a eficácia dos tratamentos superovulatórios recorrentes pode diminuir, permanecer constante ou mesmo aumentar. Esta revisão tem como objetivo discutir os principais achados em torno da superovulação em pequenos ruminantes publicados nos últimos cinco anos.

Superovulation is the main reproductive technology used for embryo production in sheep and goats, but the unpredictability of results remains its greatest disadvantage. Several intrinsic and extrinsic factors are responsible for variable superovulatory responses in small ruminants and so this issue is the primary focus of many studies aimed to ameliorate in vivo embryo production. The breed of the embryo donor is an important source of variation in superovulatory outcomes, and such a variability can be seen not only between prolific and non-prolific genotypes. Progesterone priming used in conjunction with superovulatory protocols has beneficial effects on follicular development and embryo production; however, the optimal duration of progesterone exposure also seems to vary between breeds. Some recent studies of the superovulatory treatments using follicle-stimulating hormone (FSH) have addressed the time to start a regimen, total dose of the exogenous hormone, and the number of injections. Moreover, even though the ovarian activity is strongly affected by the season, annual fluctuations in superovulatory responses are still controversial and incompletely understood. Lastly, several studies have shown that the efficacy of recurrent superovulatory treatments can either decline, remain constant or even increase. This review aims to discuss the main findings surrounding superovulation in small ruminants and published in recent five years.

Estratégias para aumentar a produção de embriões em bovinos / Strategies to increase embryo production in cattle

As biotecnologias para produção de embriões in vivo e in vitro são de grande importância para acelerar o ganho genético dos rebanhos de corte e de leite. No entanto, o sucesso desses processos depende diretamente da quantidade e da qualidade dos oócitos da doadora de embrião. Diversos fatores influenciam a produção de embriões como a população folicular, a idade da doadora, o estresse térmico, o status metabólico e o status reprodutivo. Na atualidade, vários estudos têm sido desenvolvidos para elaborar estratégias que contornem estes desafios e aumentem a eficiência das técnicas de produção de embriões. Dentre os tratamentos estabelecidos para melhorar a produção de embriões das doadoras destacam-se a utilização de FSH, rBST, propilenoglicol e células tronco mesenquimais.(AU)

Biotechnologies for producing in vivo and in vitro embryos are very important to accelerate the genetic gain of beef and dairy herds. However, the success of these processes depend directly on the quantity and quality of the donors oocytes. Many factors influence the embryo production, such as follicle population, age, heat stress, metabolic status and reproductive status. Recently, many studies have been conducted to elaborate strategies that can overcome these issues and increase the efficiency of the embryo production techniques. Among the treatments developed to improve the embryo production, the use of FSH, rBST, propylene glycol and mesenchymal stem cells stand out.(AU)

Estratégias para aumentar a produção de embriões em bovinos / Strategies to increase embryo production in cattle

As biotecnologias para produção de embriões in vivo e in vitro são de grande importância para acelerar o ganho genético dos rebanhos de corte e de leite. No entanto, o sucesso desses processos depende diretamente da quantidade e da qualidade dos oócitos da doadora de embrião. Diversos fatores influenciam a produção de embriões como a população folicular, a idade da doadora, o estresse térmico, o status metabólico e o status reprodutivo. Na atualidade, vários estudos têm sido desenvolvidos para elaborar estratégias que contornem estes desafios e aumentem a eficiência das técnicas de produção de embriões. Dentre os tratamentos estabelecidos para melhorar a produção de embriões das doadoras destacam-se a utilização de FSH, rBST, propilenoglicol e células tronco mesenquimais.

Biotechnologies for producing in vivo and in vitro embryos are very important to accelerate the genetic gain of beef and dairy herds. However, the success of these processes depend directly on the quantity and quality of the donors oocytes. Many factors influence the embryo production, such as follicle population, age, heat stress, metabolic status and reproductive status. Recently, many studies have been conducted to elaborate strategies that can overcome these issues and increase the efficiency of the embryo production techniques. Among the treatments developed to improve the embryo production, the use of FSH, rBST, propylene glycol and mesenchymal stem cells stand out.

Chronic renal failure in equine due to ascending pyelonephritis predisposed by cauda equina syndrome: case report / Insuficiência renal crônica em equino devido à pielonefrite ascendente predisposta por síndrome da cauda equina: relato de caso

Descreve-se o caso de uma égua, da raça Campeiro, utilizada como doadora de embriões, que apresentava quadros de cistite recorrente e incontinência urinária. Os sinais clínicos evoluíram para emagrecimento progressivo, anorexia, apatia e isolamento do plantel. Ao exame físico, foi identificada hipotonia da cauda, hipoalgesia da região perineal, flacidez retal e vesical, compatíveis com sinais relacionados à síndrome da cauda equina. Exames complementares laboratoriais, exame ultrassonográfico e necropsia confirmaram o diagnóstico de insuficiência renal crônica (IRC), a qual foi atribuida à pielonefrite ascendente. O exame de urocultura demonstrou crescimento de bactérias do gêneroStreptococcus sp. Este é um caso raro em equinos em que a disfunção de neurônio motor inferior propiciou o desenvolvimento de processo infeccioso no trato urinário, progredindo para um quadro crônico renal incompatível com a vida.(AU)

Descreve-se o caso de uma égua, da raça Campeiro, utilizada como doadora de embriões, que apresentava quadros de cistite recorrente e incontinência urinária. Os sinais clínicos evoluíram para emagrecimento progressivo, anorexia, apatia e isolamento do plantel. Ao exame físico, foi identificada hipotonia da cauda, hipoalgesia da região perineal, flacidez retal e vesical, compatíveis com sinais relacionados à síndrome da cauda equina. Exames complementares laboratoriais, exame ultrassonográfico e necropsia confirmaram o diagnóstico de insuficiência renal crônica (IRC), a qual foi atribuida à pielonefrite ascendente. O exame de urocultura demonstrou crescimento de bactérias do gênero Streptococcus sp. Este é um caso raro em equinos em que a disfunção de neurônio motor inferior propiciou o desenvolvimento de processo infeccioso no trato urinário, progredindo para um quadro crônico renal incompatível com a vida.(AU)

Chronic renal failure in equine due to ascending pyelonephritis predisposed by cauda equina syndrome: case report / Insuficiência renal crônica em equino devido à pielonefrite ascendente predisposta por síndrome da cauda equina: relato de caso

Descreve-se o caso de uma égua, da raça Campeiro, utilizada como doadora de embriões, que apresentava quadros de cistite recorrente e incontinência urinária. Os sinais clínicos evoluíram para emagrecimento progressivo, anorexia, apatia e isolamento do plantel. Ao exame físico, foi identificada hipotonia da cauda, hipoalgesia da região perineal, flacidez retal e vesical, compatíveis com sinais relacionados à síndrome da cauda equina. Exames complementares laboratoriais, exame ultrassonográfico e necropsia confirmaram o diagnóstico de insuficiência renal crônica (IRC), a qual foi atribuida à pielonefrite ascendente. O exame de urocultura demonstrou crescimento de bactérias do gêneroStreptococcus sp. Este é um caso raro em equinos em que a disfunção de neurônio motor inferior propiciou o desenvolvimento de processo infeccioso no trato urinário, progredindo para um quadro crônico renal incompatível com a vida.(AU)

This report describes the case of a mare, of the Campeiro breed, used as an embryo donor, which had recurrent cystitis and urinary incontinence crisis. Clinical signs evolved to progressive weight loss, anorexia, apathy, and isolation from the group. Physical examination showed tail hypotonia, perineal hypalgesia, rectal and bladder sagging compatible with signs related to cauda equina syndrome. Complementary laboratory and sonographic assessment, and necropsy confirmed the diagnosis of chronic renal failure (CRF), which was attributed to the ascending pyelonephritis. The examination of urine culture showed growth of bacteria of the genus Streptococcus sp. This is a rare case in the equine species where the lower motor neuron dysfunction led the development of infectious process in the urinary tract, progressing to renal chronic condition incompatible with life.(AU)

Impairment on nuclear maturation rate in oocytes from cows naturally infected by bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) / Comprometimento na taxa de maturação nuclear em ovócitos de vacas naturalmente infectadas pelo herpesvírus bovino 1 (BoHV-1)

Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) is an important bovine pathogen that is responsible for causing respiratory diseases and reproductive failures. The presence of BoHV-1 in an in vitro embryo production system affects fertilization, maturation, and embryonic development. The objective of this study was to evaluate the developmental capacity of oocytes from naturally infected cows with no reproductive history. Moreover, this study investigated the presence of viral DNA in cumulus oophorus complexes (COCs). Experimental groups were differentiated by titrating the antibodies detected through seroneutralization assays, establishing three groups: seronegative animals (titer lower than 2), low titer (2 to 8), and animals with a titer above or equal to 16. COCs were obtained from 15 donors during 22 sessions of ultrasound-guided follicular aspiration. DNA was extracted from a pool of COCs obtained from all aspirations from the same donor as well as from whole blood and nested PCR reactions were performed. Only COCs with a compact layer of cumulus cells, an intact zona pellucida, and homogeneous cytoplasm were selected for in vitro culture and evaluation of nuclear maturation rate. After culturing for 24 hours, the oocytes were fixed and stained to evaluate the meiotic cell cycle stage. Oocytes that showed a chromosomal configuration in metaphase II were considered to have reached nuclear maturation. Compared with the other groups, the oocyte nuclear maturation rate in animals with a titer greater than or equal to 16 (50%) was compromised (P<0.05). However, the viral titer did not influence the maturation rate of bovine oocytes in animals exhibiting low titration (62.2%) when compared with the control group (76.7%). Viral DNA was not observed in the blood samples but was detected in the COC pool from three seropositive donors. In view of the results obtained, we conclude that natural infections by the BoHV-1 virus can compromise the nuclear maturation rate in cows, depending on the titration levels of antibodies against the virus. Moreover, viral DNA could be present in COCs, contradicting the hypothesis that seropositive animals with no history of clinical symptomatology pose a negligible risk of transmitting BoHV-1 by COCs.(AU)

Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) é um importante patógeno bovino, responsável por causar doenças respiratórias e falhas reprodutivas. A presença do BoHV-1 em sistema de produção in vitro de embriões afeta a fertilização, a maturação e o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de desenvolvimento de ovócitos oriundos de vacas infectadas naturalmente sem histórico reprodutivo. Além disso, este estudo investigou a presença do DNA viral em Complexos Cumulus Ooforus (COCs). Os tratamentos foram definidos a partir do título de anticorpos detectados pelos ensaios de soroneutralização, sendo estabelecidos três grupos: animais soronegativos (título menor do que 2), título baixo (2 a 8) e animais com título maior ou igual a 16. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras durante 22 sessões de aspiração folicular guiada por ultrassom. A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total para a realização das reações de Nested-PCR. Para avaliação da taxa de maturação nuclear, foram selecionados para o cultivo in vitro somente os COCs com camada compacta de células do cumulus, zona pelúcida íntegra e citoplasma homogêneo. Após 24 horas de cultivo, os ovócitos foram fixados e corados em lâmina para a avaliação do estádio do ciclo celular meiótico. Os ovócitos que apresentaram configuração cromossômica em metáfase II foram considerados como tendo alcançado a maturação nuclear. Verificou-se comprometimento na taxa de maturação nuclear ovocitária (P<0.05) nos animais de título maior ou igual a 16 (50%). No entanto, não houve influência do título viral na taxa de maturação de ovócitos bovinos em animais que apresentaram titulação baixa (62,2%) quando comparados com o grupo controle (76,7%). O DNA viral não foi identificado nas amostras de sangue, mas foi detectado no pool de COCs de três doadoras soropositivas. Diante dos resultados encontrados conclui-se que vacas infectadas naturalmente pelo vírus BoHV-1 apresentam comprometimento na taxa de maturação nuclear, dependendo do grau de titulação de anticorpos contra o vírus. Ademais, o DNA viral pode estar presente em COCs contrariando a hipótese de que animais sorologicamente positivos e sem histórico de sintomatologia clínica oferecem risco negligível de transmissão do BoHV-1 por COCs.(AU)

Impairment on nuclear maturation rate in oocytes from cows naturally infected by bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) / Comprometimento na taxa de maturação nuclear em ovócitos de vacas naturalmente infectadas pelo herpesvírus bovino 1 (BoHV-1)

Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) is an important bovine pathogen that is responsible for causing respiratory diseases and reproductive failures. The presence of BoHV-1 in an in vitro embryo production system affects fertilization, maturation, and embryonic development. The objective of this study was to evaluate the developmental capacity of oocytes from naturally infected cows with no reproductive history. Moreover, this study investigated the presence of viral DNA in cumulus oophorus complexes (COCs). Experimental groups were differentiated by titrating the antibodies detected through seroneutralization assays, establishing three groups: seronegative animals (titer lower than 2), low titer (2 to 8), and animals with a titer above or equal to 16. COCs were obtained from 15 donors during 22 sessions of ultrasound-guided follicular aspiration. DNA was extracted from a pool of COCs obtained from all aspirations from the same donor as well as from whole blood and nested PCR reactions were performed. Only COCs with a compact layer of cumulus cells, an intact zona pellucida, and homogeneous cytoplasm were selected for in vitro culture and evaluation of nuclear maturation rate. After culturing for 24 hours, the oocytes were fixed and stained to evaluate the meiotic cell cycle stage. Oocytes that showed a chromosomal configuration in metaphase II were considered to have reached nuclear maturation. Compared with the other groups, the oocyte nuclear maturation rate in animals with a titer greater than or equal to 16 (50%) was compromised (P<0.05). However, the viral titer did not influence the maturation rate of bovine oocytes in animals exhibiting low titration (62.2%) when compared with the control group (76.7%). Viral DNA was not observed in the blood samples but was detected in the COC pool from three seropositive donors. In view of the results obtained, we conclude that natural infections by the BoHV-1 virus can compromise the nuclear maturation rate in cows, depending on the titration levels of antibodies against the virus. Moreover, viral DNA could be present in COCs, contradicting the hypothesis that seropositive animals with no history of clinical symptomatology pose a negligible risk of transmitting BoHV-1 by COCs.(AU)

Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) é um importante patógeno bovino, responsável por causar doenças respiratórias e falhas reprodutivas. A presença do BoHV-1 em sistema de produção in vitro de embriões afeta a fertilização, a maturação e o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de desenvolvimento de ovócitos oriundos de vacas infectadas naturalmente sem histórico reprodutivo. Além disso, este estudo investigou a presença do DNA viral em Complexos Cumulus Ooforus (COCs). Os tratamentos foram definidos a partir do título de anticorpos detectados pelos ensaios de soroneutralização, sendo estabelecidos três grupos: animais soronegativos (título menor do que 2), título baixo (2 a 8) e animais com título maior ou igual a 16. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras durante 22 sessões de aspiração folicular guiada por ultrassom. A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total para a realização das reações de Nested-PCR. Para avaliação da taxa de maturação nuclear, foram selecionados para o cultivo in vitro somente os COCs com camada compacta de células do cumulus, zona pelúcida íntegra e citoplasma homogêneo. Após 24 horas de cultivo, os ovócitos foram fixados e corados em lâmina para a avaliação do estádio do ciclo celular meiótico. Os ovócitos que apresentaram configuração cromossômica em metáfase II foram considerados como tendo alcançado a maturação nuclear. Verificou-se comprometimento na taxa de maturação nuclear ovocitária (P<0.05) nos animais de título maior ou igual a 16 (50%). No entanto, não houve influência do título viral na taxa de maturação de ovócitos bovinos em animais que apresentaram titulação baixa (62,2%) quando comparados com o grupo controle (76,7%). O DNA viral não foi identificado nas amostras de sangue, mas foi detectado no pool de COCs de três doadoras soropositivas. Diante dos resultados encontrados conclui-se que vacas infectadas naturalmente pelo vírus BoHV-1 apresentam comprometimento na taxa de maturação nuclear, dependendo do grau de titulação de anticorpos contra o vírus. Ademais, o DNA viral pode estar presente em COCs contrariando a hipótese de que animais sorologicamente positivos e sem histórico de sintomatologia clínica oferecem risco negligível de transmissão do BoHV-1 por COCs.(AU)

Produção in vitro de embrião (PIVE) na espécie bubalina / In vitro embryo production of water buffalo (Bubalus bubalis)

Nos últimos anos a biotécnica de produção in vitro de embrião (PIVE) em bubalino passou porimportantes modificações, possibilitando a sua aplicação ao nível comercial. Entretanto, a taxa de produção deembrião por doadora ainda é muito baixa, refletindo diretamente no custo da prenhez, o qual é cerca de 3-4 vezesmais elevado que aquele observado em bovino zebuíno. Essa baixa taxa de embrião ocorre em função de váriosfatores, dentre os mais importantes podemos citar os fatores intrínsecos relacionados aos animais, como a baixaquantidade e qualidade dos oócitos obtidos por doadora; mas também a fatores extrínsecos, como a falta demeios de cultivo específicos para o oócito/embrião da espécie, as deficiências nas condições de manejo(nutricional e sanitário). Portanto, para a aplicação comercial mais abrangente, é necessário baixar o custo daprenhez, bem como, disponibilizar animais de comprovada produtividade (teste de progênie) para utilização emprogramas de PIVE e que do ponto de vista custo / benefício compense a utilização dessa técnica.(AU)

In recent years, the biotechnology of in vitro embryo production (IVP) in buffalo has undergone a greatimprovement, allowing its application at the commercial level. However, the rate of embryo production perdonor is still very low, reflecting directly on the cost of pregnancy that is about 3-4 times higher than zebu cattle.This low embryo rate occurs due to several factors. Among the most important are the intrinsic factors related tothe animals such as the low quantity and quality of the oocytes obtained by the donor, but also to extrinsicfactors such as the lack of specific culture media for the oocyte/embryo, and deficiencies in the managementconditions, that could be nutritional or sanitary. Therefore, for the expansion in commercial application, it isnecessary to reduce the cost of pregnancy, as well as to provide animals of proven productivity (progeny test) foruse in PIVE programs and that from the cost / benefit point of view compensate the use of a high cost techniquesuch as PIVE.(AU)

Produção in vitro de embrião (PIVE) na espécie bubalina / In vitro embryo production of water buffalo (Bubalus bubalis)

Nos últimos anos a biotécnica de produção in vitro de embrião (PIVE) em bubalino passou porimportantes modificações, possibilitando a sua aplicação ao nível comercial. Entretanto, a taxa de produção deembrião por doadora ainda é muito baixa, refletindo diretamente no custo da prenhez, o qual é cerca de 3-4 vezesmais elevado que aquele observado em bovino zebuíno. Essa baixa taxa de embrião ocorre em função de váriosfatores, dentre os mais importantes podemos citar os fatores intrínsecos relacionados aos animais, como a baixaquantidade e qualidade dos oócitos obtidos por doadora; mas também a fatores extrínsecos, como a falta demeios de cultivo específicos para o oócito/embrião da espécie, as deficiências nas condições de manejo(nutricional e sanitário). Portanto, para a aplicação comercial mais abrangente, é necessário baixar o custo daprenhez, bem como, disponibilizar animais de comprovada produtividade (teste de progênie) para utilização emprogramas de PIVE e que do ponto de vista custo / benefício compense a utilização dessa técnica.

In recent years, the biotechnology of in vitro embryo production (IVP) in buffalo has undergone a greatimprovement, allowing its application at the commercial level. However, the rate of embryo production perdonor is still very low, reflecting directly on the cost of pregnancy that is about 3-4 times higher than zebu cattle.This low embryo rate occurs due to several factors. Among the most important are the intrinsic factors related tothe animals such as the low quantity and quality of the oocytes obtained by the donor, but also to extrinsicfactors such as the lack of specific culture media for the oocyte/embryo, and deficiencies in the managementconditions, that could be nutritional or sanitary. Therefore, for the expansion in commercial application, it isnecessary to reduce the cost of pregnancy, as well as to provide animals of proven productivity (progeny test) foruse in PIVE programs and that from the cost / benefit point of view compensate the use of a high cost techniquesuch as PIVE.

Avaliação da produção in vitro de embriões em um programa comercial e morfometrias de órgãos genitais de doadoras Gir Leiteiro

Avaliou-se a eficiência da produção in vitro de embriões Girolando F1(Bos primogenitus taurus x Bos primogenitus indicus) e o número de oócitos aspirados de fêmeas Gir Leiteiro (Bos primogenitus indicus) classificadas como baixa, intermediária ou alta doadora de oócitos. Total de 473 registros de aspirações foliculares guiadas por ultrassom para produção in vitro de embriões de 255 doadoras. Analisou-se a probabilidade de clivagem e a probabilidade de obtenção de embrião de acordo com o número de oócitos recuperados por doadora, o número de embriões obtidos quando as fêmeas foram divididas em quartis de baixo (<15, BMTOA), intermediário (entre 15 e 33, sendo agrupados os dois quartis intermediários, I-MTOA) ou alto (>34, A-MTOA) número de oócitos aspirados. As variáveis quantitativas foram submetidas aos testes de Kolmogorov-Smirnov e de Bartlett para verificação de normalidade dos erros e homogeneidade de variâncias, respectivamente. O total de oócitos recuperados foi 11.815 em 468 procedimentos de OPU analisados, sendo a média do número de oócitos recuperados por doadora de 25,1±13,4. As médias do número oócitos recuperados para os animais foram 10,86±0,30, 23,47±0,32 e 44,84±1,03 para os grupos B-MTOA, I-MTOA e A-MTOA, respectivamente. A análise de regressão logística mostrou aumento na probabilidade de se obter embriões de acordo com o aumento do número de oócitos recuperados. Na segunda etapa foram coletados órgãos genitais de 26 fêmeas para avaliação morfométrica de ovários, tuba uterina e útero. Os animais foram divididos em classes de idades (<56, de 56 a 90 e >91 meses), status (anestro, ciclando, gestante), contagem de folículos antrais (CFA; <15, de 15 a 33 folículos e >34 folículos) e total de oócitos aspirados (TOA; <15, de 15 a 33 ócitos e >34 oócitos). As classes foram analisadas considerando as seguintes variáveis: idade, largura do ovário direito, espessura do ovário direito, comprimento do ovário direito, volume do ovário direito, peso do ovário direito, número de folículos contados no ovário direito, largura do ovário esquerdo, espessura do ovário esquerdo, comprimento do ovário esquerdo, volume do ovário esquerdo, número de folículos contados no ovário esquerdo, total de folículos contados nos dois ovários, comprimento e peso da tuba uterina direita, comprimento e peso da tuba uterina esquerda, comprimento dos cornos uterinos direito e esquerdo, número de aspirações, média do total de oócitos aspirados, média do total de oócitos viáveis, média do número de embriões produzidos, total de embriões viáveis/OPU, total de embriões transferidos/OPU, número total de embriões obtidos\doadora, número total de prenhez obtida após transferência dos embriões. Para os parâmetros quantitativos, os valores obtidos foram testados quanto a normalidade dos dados pelo teste de Lilliefors e a homocedasticidade das variâncias pelos testes de Cochran e Bartlett. Foi realizada correlação simples de Pearson para as varíaveis quantitativas. O comprimento do ovário direito foi maior para animais com idade superior, enquanto o comprimento do ovário esquerdo foi significativamente maior apenas para animais com maior idade com relação a animais de idade intermediária. Houve moderada correlação negativa entre o número de folículos presentes nos ovários e a idades dos animais.

Evaluation of the efficiency of the in vitro production of Girolando F1 embryos (Bos primogenitus taurus x Bos primogenitus indicus) and the number of aspirated oocytes of Gir Leiteiro (Bos primogenitus indicus) females classified as low, intermediate or high oocyte gilding. Total of 473 records of follicular aspiration guided by ultrassom for in vitro production of embryos from 255 donors. Analysis of the probability of cleavage and the probability of obtaining embryo according to the number of oocytes recovered per doadora, or the number of embryos obtained when the females are divided into quartis of lower (<15, L-OR), intermediate (between 15 and 33, being grouped two intermediate quartis, I-OR) or high (> 34, H-OR) number of aspirated oocytes. Thus, several quantitative forms are submitted to the Kolmogorov-Smirnov and Bartlett tests to verify normality of two errors and homogeneity of variances, respectively. The total number of oocytes recovered was 11,815 in 468 OPU procedures analyzed, with the average number of oocytes recovered per donor being 25.1±13.4. The means of the number of oocytes recovered for the animal were 10.86±0.30, 23.47±0.32 and 44.84±1.03 for the L-OR, I-OR and H-OR groups, respectively. A logistic regression analysis showed an increase in the probability of obtaining embryos according to the increase in the number of recovered oocytes. In the second stage, the genital organs of 26 females were collected for the morphometric evaluation of the ovaries, uterine tube and uterus. The animals were divided into classes of age (<56, from 56 to 90 and >91 months), status (anestrus, cycling, pregnant), antral follicle count (AFC; <15, from 15 to 33 follicles and >34 follicles) e total aspirated oocytes (TAO; <15, from 15 to 33 ocytes e> 34 oocytes). The classes were analyzed considering the following variables: age, right ovary width, right ovary thickness, right ovary length, right ovary volume, right ovary weight, number of follicles counted in the right ovary, left ovary width, thickness of left ovary, length of left ovary, volume of left ovary, number of follicles counted in left ovary, total follicles counted in both ovaries, length and weight of right fallopian tube, length and weight of left fallopian tube, length of uterine horns right and left, number of aspirations, average total aspirated oocytes, average total viable oocytes, average number of produced embryos, total viable embryos/OPU, total transferred embryos/OPU, total number of embryos obtained/donor, total number of pregnancies obtained after embryo transfer. For the quantitative parameters, the values obtained were tested for data normality using the Lilliefors test and the homoscedasticity of the variances using the Cochran and Bartlett tests. Simple Pearson correlation was performed for quantitative variables. Length of right ovarian was higher for older animals, while length of left ovarian was significantly higher only for older animals than for animals of intermediate age. There was a moderate negative correlation between the number of follicles present in the ovaries and the age of the animals.

AVALIAÇÃO DAS TAXAS DE PRENHEZ EM ÉGUAS RECEPTORAS CÍCLICAS SUBMETIDAS A DIFERENTES PROTOCOLOS HORMONAIS

A transferência de embrião (TE) se tornou a biotecnologia mais difundida na reprodução equina, sendo utilizada em larga escala pelos haras e centrais de reprodução para obtenção de mais produtos por ano. A sincronização do ciclo estral entre a receptora e a doadora é um ponto crítico dentro da técnica, tornando necessário a disponibilidade de no mínimo três éguas receptoras para cada doadora, para que pelo menos uma esteja apta a receber o embrião no dia da transferência. A combinação de estrógenos e progestágenos é utilizada em éguas receptoras de embrião acíclicas, em fase de transição ou quando há escassa disponibilidade de éguas receptoras, tornando necessária uma sincronia estreita entre a doadora e a receptora. O objetivo desse estudo foi comparar três protocolos hormonais, utilizando-se 17 beta estradiol e altrenogest, e avaliar as taxas de prenhez em éguas receptoras cíclicas. Foram analisados 24 ciclos de éguas da raça Mangalarga Marchador, divididos em três grupos contendo oito ciclos em cada. No qual, todas as éguas receberam 15 mg de dinoprost trometamina no primeiro dia de tratamento, G1 recebeu 17 beta estradiol no dia 1 (20mg), dia 2 (10mg) e 300 mg de altenogest no dia 3, G2 recebeu 17 beta estradiol no dia 1 (10mg), dia 2 (10mg), dia 3 (20mg), dia 4 (10mg) e 300 mg Altrenogest no dia 5, G3 recebeu 17 beta estradiol dia 1 (10mg), dia 2 (20mg) e 300 mg Altrenogest no dia 3. Quatro dias após o tratamento com Altrenogest, era realizada a transferência de embrião, sendo administradas 1500mg/animal de progesterona longa ação neste dia. Após sete dias da transferência, foi realizado o diagnóstico de gestação e nova aplicação de progesterona na dose 1500mg/animal nas éguas gestantes, sendo esta realizada semanalmente até os 120 dias de gestação. Todos os grupos responderam as aplicações de estrógeno, sendo alcançado alto grau de edema em todas as éguas gestantes. Foi observado maior grau de edema uterino (p<0,05), nas éguas com diagnóstico de gestação negativos, no dia 3 de tratamento no G1 e G3 e no dia 4 no G2. Não houve diferença estatística nas taxas de gestação nos três grupos estudados. Sendo assim, os três protocolos estão aptos a serem utilizados na rotina prática do médico veterinário de reprodução equina

Embryo transfer (ET) has become the most widespread biotechnology in equine reproduction, being used on a large scale by stud farms and breeding centers to obtain more products per year. The synchronization of the estrous cycle between the recipient and the donor is a critical point within the technique, making it necessary to have at least three recipient mares for each donor, so that at least one is able to receive the embryo on the day of transfer. The combination of estrogens and progestogens is used in acyclic embryo recipient mares, in transition or when there is little availability of recipient mares, making a close synchrony between donor and recipient necessary. The aim of this study was to compare three hormonal protocols, using 17 beta estradiol and altrenogest, and to evaluate pregnancy rates in cyclic recipient mares. Twenty-four cycles of Mangalarga Marchador mares were analyzed, divided into three groups containing eight cycles in each. In which, all mares received 15 mg of dinoprost trometamina on the first day of treatment, G1 include 17 beta estradiol on day 1 (20mg), day 2 (10mg) and 300 mg of altenogest on day 3, G2 1 (1omg), day 2 (10mg), day 3 (20mg), day 4 (10mg) and 300 mg Altrenogest on day 5, G3 Introduction 17 beta estradiol day 1 (10mg), day 2 (20mg) and 300 mg Altrenogest on day 3. Four days after treatment with Altrenogest, as recipients were able to receive the embryo, 1500mg / animal of long-acting progesterone was administered on the day the ET was performed. After seven days of ET, a diagnosis of pregnancy and a new application of progesterone in pregnant mares was carried out, which was carried out weekly until the 120 days of pregnancy. All groups registered as estrogen applications, with a high degree of edema being achieved in all pregnant mares. A higher degree of uterine edema (p <0.05) was observed in mares diagnosed with negative pregnancy, on day 3 of treatment in G1 and G3 and on day 4 in G2. There was no statistical difference in pregnancy rates in the three groups studied. Thus, the three protocols are able to be used in the practical routine of the equine breeding veterinarian.

Fatores ligados à doadora que influenciam na produção de embriões in vitro (PIVE) / Factors associated to the donor influencing the production of embryos in vitro (PIVE)

A produtividade dos rebanhos bovinos, seja de corte ou de leite, tem sido ampliada consideravelmenteatravés do aperfeiçoamento das biotécnicas de manejo reprodutivo. Entre estas, a produção in vitro (PIVE) deembriões tem sido utilizada com o objetivo de se produzir um maior número de descendentes por fêmea doadora,aumentando a vida útil desta. No entanto, apesar dos enormes avanços nos últimos anos, esta biotécnica aindaapresenta grandes limitações, pois diversos fatores podem interferir nos resultados finais, tornando viável ou nãosua implementação a nível comercial. O objetivo deste trabalho de revisão é apontar algumas fontes de variaçãoligadas à doadora na produção in vitro de embriões bovinos.(AU)

Productivity of livestock cattle, either beef or milk, has been expanded greatly through the improving ofreproductive biotechnologies. Among these, in vitro production (EIVP) of embryos have been used in order togenerate a larger number of offspring per female, extending the life cycle of them. However, despite the greateradvances in most recent years, this biotech still has major limitations, because many factors may interfere on thefinal results, making feasible or not their implementation on a commercial level. The aim of this review ishighlight some sources of variation for in vitro production of embryos in cattle.(AU)