Comparação entre o status sorológico de potros congenitamente infectado e/ou não por Neospora no primeiro ano de vida / Comparison between the serologic status of congenitally infected foals and/or not with Neospora in the first year of life

Protozoários do gênero Neospora adquiriram grande importância ao serem incriminados como causa de aborto em bovinos, ingressando assim, no grupo de patógenos de relevância em medicina veterinária. Atualmente são conhecidas duas espécies potencialmente patogênicas, a saber, N. hughesi e N. caninum. A primeira espécie é relacionada a distúrbios neurológicos em potros e a segunda concorre como possível causa de aborto também em equinos. São conhecidas duas formas de transmissão deste Apicomplexa, a vertical ou transplacentária e a horizontal. Sabidamente fatores referentes ao parasita e ao hospedeiro interferem na eficiência tanto da infecção como na confecção de uma resposta imune efetiva, que culmine com a produção de anticorpos específicos ao imunógeno desafiante. Neste sentido o presente trabalho buscou verificar se as imunoglobulinas produzidas pelo concepto ainda em sua vida intrauterina, mediante desafio endógeno, persistem em seu organismo no seu primeiro ano de vida. Para tal, utilizou-se como forma de diagnóstico a pesquisa de anticorpos via Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Foi realizado acompanhamento sorológico de potros congenitamente infectado e livres de Neospora spp. ao nascimento e aos 12 meses de idade. Constatou-se que 40% dos potros congenitamente infectados apresentavam IgG contra Neospora spp. aos 12 meses e, entre os potros soronegativos ao nascimento 28% produziram IgG específico ao final de seu primeiro ano de vida. Estes resultados apontam que a presença de imunoglobulinas específicas antiNeospora spp. ao final do primeiro ano de vida dos potros, independe do status sorológico materno, indicando que a via de infecção horizontal é importante para equinos.

Protozoa of the genus Neospora acquired great importance to be incriminated as a major cause of abortion in cattle in some regions of the planet, thus joining in relevant pathogens group in veterinary medicine. Currently known are two potentially pathogenic species, namely N. hughesi and N. caninum. The first kind is related to neurological disorders in foals and the second competes as a possible cause of abortion also in horses. Two are known forms of transmission of this Apicomplexa, vertical or placenta and the horizontal. Known factors related to the parasite and the host interfere with the efficiency of both the infection and the manufacture of an effective immune response, culminating in the production of specific antibodies to challenging immunogen. In this sense, the present study was to ascertain whether the immunoglobulins produced by the fetus still in its intrauterine life through endogenous challenge, persist in your body in its first year of life. Therefore, we used as a means of diagnosis for antibodies via Immunofluorescence Assay (IFA). Was conducted serological monitoring of congenitally infected foals and free of Neospora spp. birth until they fulfilled: 12 months of age. It was found that 40% of congenitally infected foals had IgG against Neospora spp. at 12 months, and among seronegative foals at birth 28% produced specific IgG to the end of their first year of life. These results indicate that thepresence of specific anti-Neospora spp. immunoglobulins. the end of the first year of foals, independent of maternal HIV status, indicating that the horizontal infection pathway is important for horses.

Comparação entre o status sorológico de potros congenitamente infectado e/ou não por Neospora no primeiro ano de vida / Comparison between the serologic status of congenitally infected foals and/or not with Neospora in the first year of life

Protozoários do gênero Neospora adquiriram grande importância ao serem incriminados como causa de aborto em bovinos, ingressando assim, no grupo de patógenos de relevância em medicina veterinária. Atualmente são conhecidas duas espécies potencialmente patogênicas, a saber, N. hughesi e N. caninum. A primeira espécie é relacionada a distúrbios neurológicos em potros e a segunda concorre como possível causa de aborto também em equinos. São conhecidas duas formas de transmissão deste Apicomplexa, a vertical ou transplacentária e a horizontal. Sabidamente fatores referentes ao parasita e ao hospedeiro interferem na eficiência tanto da infecção como na confecção de uma resposta imune efetiva, que culmine com a produção de anticorpos específicos ao imunógeno desafiante. Neste sentido o presente trabalho buscou verificar se as imunoglobulinas produzidas pelo concepto ainda em sua vida intrauterina, mediante desafio endógeno, persistem em seu organismo no seu primeiro ano de vida. Para tal, utilizou-se como forma de diagnóstico a pesquisa de anticorpos via Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Foi realizado acompanhamento sorológico de potros congenitamente infectado e livres de Neospora spp. ao nascimento e aos 12 meses de idade. Constatou-se que 40% dos potros congenitamente infectados apresentavam IgG contra Neospora spp. aos 12 meses e, entre os potros soronegativos ao nascimento 28% produziram IgG específico ao final de seu primeiro ano de vida. Estes resultados apontam que a presença de imunoglobulinas específicas antiNeospora spp. ao final do primeiro ano de vida dos potros, independe do status sorológico materno, indicando que a via de infecção horizontal é importante para equinos.(AU)

Protozoa of the genus Neospora acquired great importance to be incriminated as a major cause of abortion in cattle in some regions of the planet, thus joining in relevant pathogens group in veterinary medicine. Currently known are two potentially pathogenic species, namely N. hughesi and N. caninum. The first kind is related to neurological disorders in foals and the second competes as a possible cause of abortion also in horses. Two are known forms of transmission of this Apicomplexa, vertical or placenta and the horizontal. Known factors related to the parasite and the host interfere with the efficiency of both the infection and the manufacture of an effective immune response, culminating in the production of specific antibodies to challenging immunogen. In this sense, the present study was to ascertain whether the immunoglobulins produced by the fetus still in its intrauterine life through endogenous challenge, persist in your body in its first year of life. Therefore, we used as a means of diagnosis for antibodies via Immunofluorescence Assay (IFA). Was conducted serological monitoring of congenitally infected foals and free of Neospora spp. birth until they fulfilled: 12 months of age. It was found that 40% of congenitally infected foals had IgG against Neospora spp. at 12 months, and among seronegative foals at birth 28% produced specific IgG to the end of their first year of life. These results indicate that thepresence of specific anti-Neospora spp. immunoglobulins. the end of the first year of foals, independent of maternal HIV status, indicating that the horizontal infection pathway is important for horses.(AU)

Prevalence of antibodies against Neospora spp. and Sarcocystis neurona in donkeys from northeastern Brazil / Prevalência de anticorpos contra Neospora spp e Sarcocystis neurona em jumentos do nordeste do Brazil

Sarcocystis neurona and Neospora hughesi are coccidian protozoa that can cause neurological illness in horses in America. In this study we report seroprevalence of Neospora spp. andS. neurona in sera of 333 donkeys from the northeastern region of Brazil. Antibodies to Neospora spp. were detected in 2% (7 donkeys) of 333 sera tested by the indirect fluorescent antibody test (IFAT) with a cut-off dilution of 1:40. Antibodies to S. neurona were found in 3% (10 donkeys) of the samples tested by IFAT (cut-off 50) and 21% (69 donkeys) by the direct agglutination test (SAT 50). The SAT and IFAT results for S. neurona showed a poor concordance (value of Kappa=0.051). This is the first report ofNeospora spp. antibodies in Brazilian donkeys and the first detection of antibodies against S. neurona in this animal species.(AU)

Sarcocystis neurona e Neospora hughesi são protozoários coccídios que infectam equídeos e são responsáveis por doenças neurológicas nessas espécies. Neste estudo, a soroprevalência de infecção porS. neurona e Neospora spp. foi determinada em amostras de 333 soros de jumentos da Região Nordeste do Brasil. Anticorpos contra Neospora spp. foram detectados em 2% (7 jumentos) dos 333 animais examinados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte de 40. Anticorpos contra S. neurona foram detectados em 3% (10 jumentos) das amostras pela RIFI (ponto de corte de 50) e em 21% (69 jumentos) pela técnica de aglutinação direta (SAT - ponto de corte de 50). SAT e RIFI, para diagnóstico de S. neurona, apresentaram uma baixa concordância (Kappa = 0,051). Essa é a primeira observação de anticorpos anti-N. caninum em jumentos brasileiros e a primeira detecção de anticorpos contra S. neurona nessa espécie.(AU)

Prevalence of antibodies against Neospora spp. and Sarcocystis neurona in donkeys from northeastern Brazil

Abstract Sarcocystis neurona and Neospora hughesi are coccidian protozoa that can cause neurological illness in horses in America. In this study we report seroprevalence of Neospora spp. andS. neurona in sera of 333 donkeys from the northeastern region of Brazil. Antibodies to Neospora spp. were detected in 2% (7 donkeys) of 333 sera tested by the indirect fluorescent antibody test (IFAT) with a cut-off dilution of 1:40. Antibodies to S. neurona were found in 3% (10 donkeys) of the samples tested by IFAT (cut-off 50) and 21% (69 donkeys) by the direct agglutination test (SAT 50). The SAT and IFAT results for S. neurona showed a poor concordance (value of Kappa=0.051). This is the first report ofNeospora spp. antibodies in Brazilian donkeys and the first detection of antibodies against S. neurona in this animal species.

Resumo Sarcocystis neurona e Neospora hughesi são protozoários coccídios que infectam equídeos e são responsáveis por doenças neurológicas nessas espécies. Neste estudo, a soroprevalência de infecção porS. neurona e Neospora spp. foi determinada em amostras de 333 soros de jumentos da Região Nordeste do Brasil. Anticorpos contra Neospora spp. foram detectados em 2% (7 jumentos) dos 333 animais examinados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte de 40. Anticorpos contra S. neurona foram detectados em 3% (10 jumentos) das amostras pela RIFI (ponto de corte de 50) e em 21% (69 jumentos) pela técnica de aglutinação direta (SAT - ponto de corte de 50). SAT e RIFI, para diagnóstico de S. neurona, apresentaram uma baixa concordância (Kappa = 0,051). Essa é a primeira observação de anticorpos anti-N. caninum em jumentos brasileiros e a primeira detecção de anticorpos contra S. neurona nessa espécie.

Molecular phylogeny of Toxoplasmatinae: comparison between inferences based on mitochondrial and apicoplast genetic sequences

Abstract Phylogenies within Toxoplasmatinae have been widely investigated with different molecular markers. Here, we studied molecular phylogenies of the Toxoplasmatinae subfamily based on apicoplast and mitochondrial genes. Partial sequences of apicoplast genes coding for caseinolytic protease (clpC) and beta subunit of RNA polymerase (rpoB), and mitochondrial gene coding for cytochrome B (cytB) were analyzed. Laboratory-adapted strains of the closely related parasites Sarcocystis falcatula and Sarcocystis neurona were investigated, along with Neospora caninum, Neospora hughesi, Toxoplasma gondii (strains RH, CTG and PTG), Besnoitia akodoni, Hammondia hammondiand two genetically divergent lineages of Hammondia heydorni. The molecular analysis based on organellar genes did not clearly differentiate between N. caninum and N. hughesi, but the two lineages of H. heydorni were confirmed. Slight differences between the strains of S. falcatula and S. neurona were encountered in all markers. In conclusion, congruent phylogenies were inferred from the three different genes and they might be used for screening undescribed sarcocystid parasites in order to ascertain their phylogenetic relationships with organisms of the family Sarcocystidae. The evolutionary studies based on organelar genes confirm that the genusHammondia is paraphyletic. The primers used for amplification of clpC and rpoB were able to amplify genetic sequences of organisms of the genus Sarcocystisand organisms of the subfamily Toxoplasmatinae as well.

Resumo A filogenia da subfamília Toxoplasmatinae tem sido amplamente investigada com diversos marcadores moleculares. Neste estudo, a filogenia molecular da subfamília Toxoplasmatinae foi analisada através de genes de apicoplasto e mitocondriais. Foram analisadas sequências parciais de genes de apicoplasto codificadores da protease caseinolítica (clpC), e da subunidade beta da RNA polimerase (rpoB) e de gene mitocondrial codificador de citocromo B (cytB). Foram investigadas cepas adaptadas em laboratório de Sarcocystis neurona eSarcocystis falcatula, parasitos estreitamente relacionados, além de Neospora caninum, Neospora hughesi, Toxoplasma gondii (cepas RH, CTG e PTG),Besnoitia akodoni, Hammondia hammondi e duas linhagens geneticamente divergentes de Hammondia heydorni. A análise molecular, baseada em genes de organelas, não diferenciou claramenteN. caninum de N. hughesi, porém foi possível confirmar as duas linhagens de H. heydorni. Foram encontradas pequenas diferenças entre as cepas adaptadas em laboratório deS. falcatula e S. neurona em todos os marcadores moleculares avaliados. Concluindo, filogenias congruentes foram reconstruídas com os três diferentes genes que podem ser úteis em triagem de parasitos sarcocistídeos não identificados, para identificar sua relação com organismos da família Sarcocystidae. Os estudos evolutivos com genes organelares confirmam que o gênero Hammondia é parafilético. Osprimers utilizados para amplificação declpC e rpoB foram capazes de amplificar sequências genéticas de organismos do gênero Sarcocystis e da subfamília Toxoplasmatinae.

Molecular phylogeny of Toxoplasmatinae: comparison between inferences based on mitochondrial and apicoplast genetic sequences / Filogenia molecular de Toxoplasmatinae: comparação entre inferências baseadas em sequências genéticas mitocondriais e de apicoplasto

Phylogenies within Toxoplasmatinae have been widely investigated with different molecular markers. Here, we studied molecular phylogenies of the Toxoplasmatinae subfamily based on apicoplast and mitochondrial genes. Partial sequences of apicoplast genes coding for caseinolytic protease (clpC) and beta subunit of RNA polymerase (rpoB), and mitochondrial gene coding for cytochrome B (cytB) were analyzed. Laboratory-adapted strains of the closely related parasites Sarcocystis falcatula and Sarcocystis neurona were investigated, along with Neospora caninum, Neospora hughesi, Toxoplasma gondii (strains RH, CTG and PTG), Besnoitia akodoni, Hammondia hammondiand two genetically divergent lineages of Hammondia heydorni. The molecular analysis based on organellar genes did not clearly differentiate between N. caninum and N. hughesi, but the two lineages of H. heydorni were confirmed. Slight differences between the strains of S. falcatula and S. neurona were encountered in all markers. In conclusion, congruent phylogenies were inferred from the three different genes and they might be used for screening undescribed sarcocystid parasites in order to ascertain their phylogenetic relationships with organisms of the family Sarcocystidae. The evolutionary studies based on organelar genes confirm that the genusHammondia is paraphyletic. The primers used for amplification of clpC and rpoB were able to amplify genetic sequences of organisms of the genus Sarcocystisand organisms of the subfamily Toxoplasmatinae as well.(AU)

A filogenia da subfamília Toxoplasmatinae tem sido amplamente investigada com diversos marcadores moleculares. Neste estudo, a filogenia molecular da subfamília Toxoplasmatinae foi analisada através de genes de apicoplasto e mitocondriais. Foram analisadas sequências parciais de genes de apicoplasto codificadores da protease caseinolítica (clpC), e da subunidade beta da RNA polimerase (rpoB) e de gene mitocondrial codificador de citocromo B (cytB). Foram investigadas cepas adaptadas em laboratório de Sarcocystis neurona eSarcocystis falcatula, parasitos estreitamente relacionados, além de Neospora caninum, Neospora hughesi, Toxoplasma gondii (cepas RH, CTG e PTG),Besnoitia akodoni, Hammondia hammondi e duas linhagens geneticamente divergentes de Hammondia heydorni. A análise molecular, baseada em genes de organelas, não diferenciou claramenteN. caninum de N. hughesi, porém foi possível confirmar as duas linhagens de H. heydorni. Foram encontradas pequenas diferenças entre as cepas adaptadas em laboratório deS. falcatula e S. neurona em todos os marcadores moleculares avaliados. Concluindo, filogenias congruentes foram reconstruídas com os três diferentes genes que podem ser úteis em triagem de parasitos sarcocistídeos não identificados, para identificar sua relação com organismos da família Sarcocystidae. Os estudos evolutivos com genes organelares confirmam que o gênero Hammondia é parafilético. Osprimers utilizados para amplificação declpC e rpoB foram capazes de amplificar sequências genéticas de organismos do gênero Sarcocystis e da subfamília Toxoplasmatinae.(AU)

Brazilian donkeys (Equus asinus) have a low exposure to Neospora spp.

Donkeys (Equus asinus) are closely related to horses and are known to be infected by several equine pathogens. Neospora caninum and Neospora hughesi are protozoan parasites that infect horses, but they were not confirmed in donkeys up to this date. The aim of this study was to evaluate the exposure of donkeys (Equus asinus) to Neospora spp. using tachyzoites of N. caninum as antigen and employing two common serologic methods, IFAT and immunoblot. Sera from 500 donkeys were obtained from 30 municipalities in Bahia state and tested by IFAT. Two of 500 sera were positive for Neospora spp. by IFAT with antibody titers of 100, and recognized a 37kDa antigen in immunoblot. Approximately 22% of the samples showed strong apical reactions and/or incomplete fluorescence, what may cause confusion in the interpretation of IFAT. We concluded that Neospora spp. are possibly of minor importance for Brazilian donkeys. Future studies are necessary to prove that Neospora spp. can naturally infect donkeys.

Asininos (Equus asinus) são próximos filogeneticamente a equinos e podem ser infectados por vários patógenos de cavalos. Neospora caninum e Neospora hughesi são parasitos protozoários que infectam equinos, porém não foram confirmados em asininos até o momento. O objetivo deste estudo foi avaliar a exposição de asininos (Equus asinus) a Neospora spp., usando-se taquizoítos de N. caninum como antígeno e empregando-se duas técnicas sorológicas comuns para esta finalidade, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e immunoblot. Soros de 500 asininos, obtidos em 30 municípios no Estado da Bahia, foram testados por meio da RIFI. Dois dos 500 soros foram positivos para Neospora spp. pela RIFI com títulos de anticorpos de 100, e reconheceram um antígeno de 37kDa no immunoblot. Aproximadamente, 22% das amostras apresentaram fortes reações apicais e/ou fluorescência incompleta, o que pode causar confusão na interpretação da RIFI. Conclui-se que Neospora spp. são, possivelmente, de pouca importância para asininos brasileiros. Estudos posteriores são necessários para provar que Neospora spp. podem causar infecção natural em asininos.

Brazilian donkeys (Equus asinus) have a low exposure to Neospora spp / Asininos (Equus asinus) brasileiros têm uma baixa exposição à Neospora spp

Donkeys (Equus asinus) are closely related to horses and are known to be infected by several equine pathogens. Neospora caninum and Neospora hughesi are protozoan parasites that infect horses, but they were not confirmed in donkeys up to this date. The aim of this study was to evaluate the exposure of donkeys (Equus asinus) to Neospora spp. using tachyzoites of N. caninum as antigen and employing two common serologic methods, IFAT and immunoblot. Sera from 500 donkeys were obtained from 30 municipalities in Bahia state and tested by IFAT. Two of 500 sera were positive for Neospora spp. by IFAT with antibody titers of 100, and recognized a 37kDa antigen in immunoblot. Approximately 22% of the samples showed strong apical reactions and/or incomplete fluorescence, what may cause confusion in the interpretation of IFAT. We concluded that Neospora spp. are possibly of minor importance for Brazilian donkeys. Future studies are necessary to prove that Neospora spp. can naturally infect donkeys.(AU)

Asininos (Equus asinus) são próximos filogeneticamente a equinos e podem ser infectados por vários patógenos de cavalos. Neospora caninum e Neospora hughesi são parasitos protozoários que infectam equinos, porém não foram confirmados em asininos até o momento. O objetivo deste estudo foi avaliar a exposição de asininos (Equus asinus) a Neospora spp., usando-se taquizoítos de N. caninum como antígeno e empregando-se duas técnicas sorológicas comuns para esta finalidade, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e immunoblot. Soros de 500 asininos, obtidos em 30 municípios no Estado da Bahia, foram testados por meio da RIFI. Dois dos 500 soros foram positivos para Neospora spp. pela RIFI com títulos de anticorpos de 100, e reconheceram um antígeno de 37kDa no immunoblot. Aproximadamente, 22% das amostras apresentaram fortes reações apicais e/ou fluorescência incompleta, o que pode causar confusão na interpretação da RIFI. Conclui-se que Neospora spp. são, possivelmente, de pouca importância para asininos brasileiros. Estudos posteriores são necessários para provar que Neospora spp. podem causar infecção natural em asininos.(AU)

Verificação da transmissão vertical de Neospora spp. em equinos / Verification of vertical transmission of Neospora spp. in horses.

O gênero protozoário Neospora é reconhecido como causador de desordens reprodutivas e abortos em bovinos. Entre os equinos pouco se sabe sobre os efeitos da infecção por estes protozoários. Atualmente é admitido que os efeitos da infecção por Neospora hughesi em equinos possam ocorrer no sistema nervoso central e, os efeitos provocados pela infecção por Neospora caninum recaiam sobre o sistema reprodutor de éguas. O presente trabalho verificou a presença de imunoglobulinas da classe G no soro sanguíneo de uma população de éguas de cria e, em seus respectivos potros antes da ingestão do colostro. Para execução deste trabalho foi empregada técnica de imunofluorescência indireta (RIFI), utilizando como antígeno taquizoítos de Neospora caninum, a diluição inicial dos soros das éguas foi de 1:50 e a diluição do soro dos potros empregada foi de 1:16. Foram assistidos 78 partos e todos os potros tiveram seu soro sanguíneo coletado imediatamente após o nascimento. A pesquisa de anticorpos contra Neospora spp. apontou que 50 (64%) éguas e 32 (41%) potros foram positivos. Das 50 éguas que apresentaram anticorpos contra Neospora spp. 24 geraram potros positivos. Entre as 28 éguas que não reagiram, oito deram a luz a potros positivos. De posse dos resultados encontrados podemos concluir que ocorreu a transmissão vertical de Neospora spp. nos equinos pesquisados.(AU)

The genre protozoan Neospora is recognized as causing reproductive disorders and miscarriages in cattle. Among the horses little is known about the effects of infection by these protozoa. It is currently accepted that the effects of infection by Neospora hughesi in horses may occur in the central nervous system, and effects of Neospora caninum infection occur in the reproductive system of mares. The present study examined the presence of class immunoglobulin G in blood serum of a population of brood mares and their foals before colostrum ingestion. For this assignment was employed indirect immunofluorescence assay (IFA) using as antigen tachyzoites of Neospora caninum, the initial dilution employed in sera of the mares was 1:50 and dilution in the serum of foals was 1:16. Were assisted 78 deliveries and all foals had their blood serum collected immediately after birth. The presence of antibodies against Neospora spp. found in mares was 50 (64%) and 32 (41%) foals were positive. Of the 50 mares that had antibodies to Neospora spp. 24 generated positive foals. Among the 28 mares unreacted eight gave birth to foals positive. Having the results we can conclude that vertical transmission occurred Neospora spp. researched in horses.(AU)

Caracterização patológica e parasitológica de casos de mieloencefalite protozoária equina na região sul do Brasil

A mieloencefalite protozoária equina (MEP) é uma doença neurológica que acomete equinos no continente americano. MEP é frequentemente causada por Sarcocystis neurona e ocasionalmente por Neospora hughesi. A maior parte do conhecimento atual sobre MEP é proveniente de estudos conduzidos na América do Norte, enquanto dados referentes à MEP na América do Sul são escassos. O objetivo deste estudo é descrever os aspectos epidemiológicos, patológicos, imuno-histoquímicos e moleculares de casos de MEP em equinos submetidos à necropsia entre os anos de 2010 e 2017 na região sul do Brasil. No período estudado, 13 casos histologicamente compatíveis com MEP foram diagnosticados, representando 2,64% do total de diagnósticos em equinos e 34,21% das doenças inflamatórias afetando o sistema nervoso central (SNC) nesta espécie. MEP correspondeu à segunda condição inflamatória do SNC mais comum em equinos, apenas atrás da infecção pelo vírus da raiva. A idade mediana dos equinos afetados foi de oito anos, a maioria dos animais acometidos eram machos (10/13), e a doença foi observada ao longo de todo o ano. Lesões macroscópicas, caracterizadas por áreas multifocais de coloração avermelhada foram detectadas na medula espinhal em cinco equinos. Lesões microscópicas apresentaram-se de forma multifocal em todos os casos, e foram mais frequentemente observadas em segmentos da medula espinhal e no rombencéfalo. As lesões encontravam-se restritas a medula espinhal e ao encéfalo em três e dois casos, respectivamente. Protozoários intralesionais consistentes com S. neurona foram observados em secções histológicas em cinco equinos, e imunomarcação positiva para S. neurona foi observada em onze casos (11/13). Através de técnicas moleculares, cinco casos positivos para o ITS-1 e para o 18S rRNA foram detectados. Após o sequenciamento obtiveram-se fragmentos de qualidade de duas amostras referentes ao gene 18S rRNA e quatro referentes ao ITS-1. No presente estudo, o agente associado com casos de MEP detectado por imuno-histoquímica e técnicas moleculares foi Sarcocystis spp. Portanto, MEP deve ser incluída entre os diagnósticos diferenciais de doenças neurológicas em equinos na região sul do Brasil, mesmo em casos em que parasitas não são prontamente observados na avaliação histológica.

Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) is a neurologic disease affecting horses in the American continent. EPM it is often caused by Sarcocystis neurona, and occasionally by Neospora hughesi infection. Most current knowledge regarding EPM comes from studies conducted in North America, while in South America these data are scant. The aim of this study is to describe the epidemiological, pathological, immunohistochemical and molecular findings of EPM cases in horses necropsied in Southern Brazil from 2010 to 2017. In the studied period, 13 cases compatible with EPM were diagnosed, representing 2.64% of the overall postmortem diagnosis in horses, and 34.21% of the central nervous system (CNS) inflammatory conditions in the species. EPM corresponded to the second most common cause of CNS inflammatory disease in horses, only after rabies virus infection. Median age of affected horses was of eight years, males were overrepresented (10/13), and the disease was observed all year round. Gross lesions were detected in the spinal cord in five horses (5/13), and these were characterized by multifocal red areas. Microscopic lesions were multifocal in all cases, and these were more frequently observed in the spinal cord segments and in the rhombencephalon. Lesions were restricted to the spinal cord and to the brain in three and two cases, respectively. Intralesional protozoans consistent with S. neurona were seen in histopathological sections in five horses, and positive immunostaining for S. neurona was observed in eleven cases (11/13). Through molecular techniques, five positive cases for the ITS-1 and 18S rRNA genes were detected. After sequencing, two quality samples of 18S rRNA gene and four of the ITS-1 were obtained. In the present study, the only agent associated with EPM cases detected by immunohistochemistry, and molecular analysis was Sarcocystis spp. Therefore, EPM should be included among the differential diagnosis of neurological disease in horses in Southern Brazil, even in the cases where parasites are not readily seen in the histological examination

Perfil proteômico do líquido cefalorraquidiano após transplantes intratecal de células estromais mesenquimais multipotentes em equinos

Estudos com células estromais mesenquimais multipotentes (MSCs) estão em crescente progresso devido às suas propriedades imunomoduladoras, antiinflamatórias, antiapoptóticas e de regeneração tecidual, tornando essa modalidade de terapia celular promissora no tratamento de diversas doenças. Devido à limitada capacidade regenerativa do sistema nervoso central (CNS), causando sequelas funcionais, as MSCs estão sendo investigadas como uma alternativa terapêutica para condições neurológicas inflamatórias, vasculares, traumáticas e degenerativas em diversas espécies animais. A Mieloencefalite protozoária equina (EPM) causada por ambos os protozoários do filo Apicomplexa, Sarcocystis neurona e Neospora hughesi, permanece como uma importante doença neurológica dos equinos nas Américas, embora a maioria dos casos seja devida à infecção por S. neurona. A aplicação da proteômica com sua gama de ferramentas na clínica de equinos pode contribuir significativamente para o entendimento de processos patológicos e facilitar a descoberta de novos alvos terapêuticos ou marcadores diagnósticos. Neste contexto, os objetivos deste estudo foram avaliar o perfil proteômico do líquido cefalorraquidiano (CSF) antes e após múltiplos transplantes intratecal de MSCs em equinos hígidos e o perfil proteômico do CSF de equinos cronicamente afetados pela EPM. Doze cavalos adultos clinicamente saudáveis foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: grupo DPBS (DPBS ou control; n = 4) onde a solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco's (DPBS) foi administrada pela via intratecal; grupo AD-G (AD-G; n = 4), no qual foram realizados transplantes intratecal com MSCs alogênicas de tecido adiposo; e grupo BM-G (BM-G; n = 4), no qual foram realizados transplantes intratecal com MSCs alogênicas de medula óssea. Todos os grupos experimentais receberam três tratamentos seriados (DPBS ou MSCs) com intervalo de 30 dias entre eles. As amostras de CSF foram coletadas dos grupos experimentais imediatamente antes do primeiro tratamento (denominado momento M0 ou Before) e 30 dias após o terceiro tratamento (denominado momento M90 ou After). Ao mesmo tempo, os CSF de 16 equinos clinicamente saudáveis e de 9 equinos cronicamente afetados por EPM foram coletados da subaracnóide, denominados grupo Control (Control; n = 16) e grupo EPM (EPM; n = 9) respectivamente. Cada uma das amostras de CSF do grupo Control e do grupo EPM foram individualmente ressuspendidas e agrupadas em pool, totalizando dois pool representativos de cada um dos grupos experimentais e denominados igualmente (Control e EPM) para avaliar o perfil proteômico dos mesmos. De modo similar, os três grupos que receberam transplantes e coletas de CSF nos dois distintos momentos, foram agrupados em seis pool representativos para cada grupo e momento. Considerando a plataforma proteômica utilizada, os três grupos foram pareadamente comparados: DPBS After vs. Before, AD-G After vs. Before e BM-G After vs. Before, sendo encontradas 208, 211 e 131 proteínas em cada comparação, respectivamente. Do mesmo modo, na comparação pareada do CSF dos grupos EPM e Control, EPM vs. Control, 201 proteínas foram identificadas e 33 proteínas observadas exclusivamente no CSF do grupo EPM. Ademais, também foi observada na comparação pareada dos grupos DPBS, BM-G e EPM, a presença dos três tipos de enolases interagindo entre si (ENO 1, ENO 2 e ENO 3), sendo em DPBS e BM-G como exclusivas do momento After e no grupo EPM como exclusivas dele. Neste contexto, este estudo ao avaliar os perfis proteômico do CSF antes e após múltiplos transplantes intratecal de MSCs em equinos hígidos e do CSF de equinos cronicamente afetados pela EPM permitiu identificar as enolases como potenciais marcadores de lesão neural e/ou de EPM. Novos estudos devem ser realizados para confirmar estes achados e avançar no conhecimento dos efeitos da terapia celular com MSCs pela via intratecal, para o tratamento de lesões neurológicas em equinos.

Multipotent mesenchymal stromal cell (MSCs) studies are under increasing progress because of their immunomodulatory, anti-inflammatory, antiapoptotic and tissue regeneration properties, making this modality of cell therapy promising in the treatment of various diseases. Due to the limited regenerative capacity of the central nervous system (CNS), causing functional sequelae, MSCs are being investigated as a therapeutic alternative for inflammatory, vascular, traumatic and degenerative neurological conditions in various animal species. Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) caused by both protozoa of the Apicomplexa phylum, Sarcocystis neurona and Neospora hughesi, remains an important neurological disease in horses in the Americas, although most cases are due to S. neurona infection. The application of proteomics with its range of tools in the equine clinic can contribute significantly to the understanding of pathological processes and facilitate the discovery of new therapeutic targets or diagnostic markers. In this context, the objectives of this study were to evaluate the proteomic profiling of cerebrospinal fluid (CSF) before and after multiple intrathecal transplantations of MSCs in healthy horses and the CSF proteomic profiling of horses chronically affected by EPM. Twelve clinically healthy adult horses were randomly divided into three experimental groups: DPBS (DPBS or control; n = 4), in which intrathecal "transplants" with Dulbecco's phosphate buffered saline (DPBS) were performed; group AD-G (AD-Gs; n = 4), in which intrathecal transplants were performed with allogeneic adipose tissue MSCs; and BM-G group (BM-G; n = 4), in which intrathecal transplants were performed with allogeneic bone marrow MSCs. All experimental groups received three serial treatments (DPBS or MSCs) with a 30-day interval between them. CSF samples were collected from the experimental groups immediately before the first treatment (called the M0 or Before) and 30 days after the third treatment (called the M90 or After). At the same time, CSF of 16 healthy horses and 9 horses chronically affected by EPM were collected from the subarachnoid, Control group (Control; n = 16) and EPM group (EPM; n = 9) respectively. Each of the CSF samples from the Control group and from the EPM group were individually resuspended and pooled, totalizing two representative pools of each one the experimental groups and also named (Control and EPM) to evaluate their proteomic profilings. Similarly, the three groups that received transplants and CSF collections at two different times were grouped into six representative pools for each group and time. Considering the proteomic platform used, the three groups were similarly compared: DPBS After vs. Before, AD-G After vs. Before and BM-G After vs. Before, being found 208, 211 and 131 proteins in each comparison, respectively. Likewise, in the paired comparison of the CSF of the EPM and Control groups, EPM vs. Control, 201 proteins were identified, and 33 proteins were observed exclusively in the CSF of the EPM group. In addition, the presence of the three types of enolases interacting with each other (ENO 1, ENO 2 and ENO 3) was also observed in the comparison of the DPBS, BM-G and EPM groups, being exclusives in DPBS and BM-G at time After and in the EPM group as its exclusively. In this context, this study, when evaluating the proteomic profilings of CSF before and after multiple intrathecal transplantations of MSCs in healthy horses and CSF of horses chronically affected by EPM, allowed the identification of enolases as potential markers of neural and / or EPM injury. Further studies should be performed to confirm these findings and to advance the knowledge of the effects of intrathecal cell therapy with MSCs for the treatment of neurological lesions in horses.

DADOS EPIDEMIOLÓGICOS SOBRE A INFECÇÃO POR Sarcocystis spp., Neospora spp. E Toxoplasma gondii EM EQUÍDEOS DO PANTANAL BRASILEIRO

Sarcocystis neurona é agente etiológico da Mieloencefalite protozoária equina (MPE), doença grave, geralmente fatal e caracterizada por quadros neurológicos. O hospedeiro definitivo do parasito é o gambá (Didelphys virginiana, na América do Norte e D. albiventris, na América do Sul). Espécies do gênero Neospora são associadas a abortamento, doenças neonatais e também neurológicas. O hospedeiro definitivo para N. caninum são os canídeos domésticos e selvagens e este agente tem sido responsável pela maioria dos casos de abortamento em bovinos, já N. hughesi ainda tem seu hospedeiro definitivo indefinido e tem sido implicado também como possível agente causador da MPE. Toxoplasma gondii, parasita de distribuição mundial e causador da Toxoplasmose, uma zoonose de importância médica e veterinária tem como hospedeiros definitivos os felídeos domésticos e selvagens e praticamente todas as espécies de sangue quente podem desempenhar o papel de hospedeiros intermediários. Embora alguns dados da epidemiologia para esses protozoários sejam conhecidos, como as vias de transmissão, hospedeiros e vias de eliminação, informações particulares a regiões distintas como a do Pantanal mato-grossense são desconhecidas. Considerando a importância destas infecções o presente estudo objetivou avaliar a presença de anticorpos anti-S. neurona, Neospora spp. e Toxoplasma gondii e detectar qual a importância da transmissão vertical como forma de manutenção das infecções para equídeos da região, fornecendo subsídios para a melhor compreensão dessas enfermidades nesta espécie.

Sarcocystis neurona a causative agent of equine protozoal myeloencephalitis (EPM) is a serious neurologic disease of horses. The opossum are definitive hosts for S. neurona (Didelphys virginiana, the North American and D. albiventris, in South American). Neosporosis is caused for N. caninum and N. hughesi in horses also cause abortion, reprodutive problems. The definitive hosts for N. caninum are dogs and coyotes and the definitive hosts for N. hughesi is unknown. Toxoplasma gondii, parasite of worldwide distribuition and cause of toxoplasmosis, zoonosis of medical and veterinary importance. Domestic and wild felids are the definitive hosts and humans and virtually all warm-blooded species may be intermediate hosts. The horse breeding is an essential segment of agribusiness in Mato Grosso State and the important in the Pantanal because they are indispensable for live-stock management and provide a practical means of transport. Protozoa from the family Sarcocystidae are acquired through the ingestion of contaminated food and water, which can cause neurological and reproductive disorders in horses, causing damage to breeders. Although some epidemiological data for these protozoa are known, such as transmission routes and hosts, particular information to distinct regions such as the Pantanal of Mato Grosso are unknown. The objectives of the present study were to evaluate the presence of antibodies against Sarcocystis neurona, Neospora spp. and Toxoplasma gondii, their main forms of maintenance in equidae of the region, giving subsidies for a better understanding of these diseases in this species.

PREVALÊNCIA DE ANTICORPOS IGG ANTI-NEOSPORA spp. EM EQUINOS NO RECÔNCAVO DA BAHIA

A neosporose é uma parasitose descrita pela primeira vez em meados da década de 80, é causada por um protozoário intracelular obrigatório. O Neospora sp. é um importante agente relatado como responsável por causar abortamentos, especialmente, em bovinos, estimando-se grandes prejuízos econômicos na pecuária. Duas espécies já foram descritas nesse gênero, o N. caninum que afeta uma ampla variedade de mamíferos e o N. hughesi isolado apenas de equinos O conhecimento dos fatores considerados como de risco para o desenvolvimento da neosporose são cruciais para a compreensão da distribuição desse parasito. Uma vez que a prevalência de anticorpos IgG anti-Neospora spp. tem sido verificada mundialmente, de forma que equinos soropositivos já foram detectados em todos os continentes. O objetivo desse trabalho foi determinar a prevalência de anticorpos anti-Neospora spp. e relacionar os fatores de risco associados com a doença no Recôncavo da Bahia. Foram utilizadas amostras séricas de 234 equinos hígidos e sem histórico de alterações reprodutivas e neurológicas que foram submetidas à reação de imunofluorescência indireta (RIFI), os títulos variaram de 1:50 até 1:800. No ponto de corte de 1:50, foram detectados anticorpos IgG anti-Neospora sp. em 106 animais representando uma soropositividade de 45,30%. As amostras foram testadas em diluições dobradas até não mais apresentar reação. Verificou-se uma soropositividade no titulo de 1:100 de 38,03% (89/234); 21,79% (51/234) na titulação de 1:200; 4,70% (11/234) em 1:400 e apenas 0,42% (1/234) apresentou titulo de 1:800. Não foi verificada correlação positiva entre as variáveis estudadas e a soropositividade. Entretanto o estudo demonstrou que probabilidade de ocorrência da neosporose é mais significativa em animais abaixo de cinco anos de idade assim também em animais sem raça definida. Contudo, de acordo como os resultados encontrados nesse estudo verificou-se uma elevada prevalência de anticorpos IgG anti-Neospora spp. na região do recôncavo da Bahia.

Neosporosis is a parasitic disease first described in the mid-80, which is caused by an obligate intracellular protozoan parasite. Neospora sp. is an important agent reported as responsible for abortions, especially in cattle, causing great economic losses in livestock. Two species have been described in this genus, N. caninum that affects a wide variety of mammals and N. hughesi isolated only in horses. Knowing the risk factors for the development of neosporosis are crucial to the study of this disease. The prevalence of anti-Neospora spp IgG antibodies was verified worldwide, indicating that seropositive horses have been found on all continents. The objective of this study was to determine the prevalence of antibodies IgG anti-Neospora spp. and list the risk factors associated with the disease in the Recôncavo da Bahia. Serum samples from 234 healthy horses withought history of reproductive and neurological changes were submitted to indirect immunofluorescence test (IFAT), where titles ranged from 1:50 to 1: 800. In the cutoff 1:50 antibodies IgG anti-Neospora spp were detected in 106 (45.30%) animals. Serum samples were tested in folded dilutions up to no more reaction. There was a seropositivity of 38.03% (89/234) in titer of 1: 100; 21.79% (51/234) in the titer of 1: 200; 4.70% (11/234) in 1: 400 and 0.42% (1/234) in the 1: 800. There was no positive correlation between the study variables and seropositivity. However there was a probability of occurrence of neosporosis in animals younger than five years old as well as those cross breed. However, according to the results found in this study there was a high prevalence of antibodies IgG anti-Neospora spp. in the Recôncavo da Bahia.

Occurrence of antibodies anti-Neospora spp. in cart horses and Crioula breed horses from Rio Grande do Sul state / Ocorrência de anticorpos anti-Neospora spp. em cavalos de carroça e equinos da raça Crioula no estado do Rio Grande do Sul

O objetivo deste estudo foi avaliar a frequência de detecção de anticorpos contra Neospora spp. em cavalos de carroça e em cavalos da raça Crioula. Para tal, 214 amostras de soro foram coletadas e analisadas pela técnica de imunofluorescência indireta, das quais 91 eram de cavalos de carroça e 123 de cavalos da raça Crioula, todas provenientes da região central do Rio Grande do Sul. As frequências de anticorpos detectadas foram: 15,9% (34/214) na população total estudada, 15,4% (14/91) nos cavalos de carroça e 16,3% (20/123) nos cavalos da raça Crioula. Estes resultados sugerem que a infecção por Neospora spp. está presente igualmente nas duas populaç ões. Assim, devido à importância e ao padrão da patogênese da neosporose em equinos, Neospora spp. deve ser incluído no diagnóstico de problemas reprodutivos em éguas e em casos de problemas neurológicos em equinos.(AU)

DETECÇÃO DA INFECÇÃO POR Neospora spp. EM EQUÍDEOS

Em equídeos, a neosporose é causada pelos coccídeos Neospora caninum e N. hughesi. O primeiro está associado a abortamentos e doença neonatal, e N. hughesi, a ocorrência da Mieloencefalite Protozoária Equina (MPE) em muares e equinos, sendo identificada apenas nestas espécies animais. A diferenciação sorológica entre N. caninum e N. hughesi ainda não é possível devido à reatividade cruzada entre anticorpos contra esses parasitos. Apesar de já relatada a exposição de asininos a Neospora spp., o seu papel como possível hospedeiro não foi elucidado. Objetivou-se no estudo corrente determinar a frequência de infecção, por reatividade sorológica e detecção molecular, de Neospora spp. em equídeos e isolar in vitro cepa(s) de Neospora spp. a partir de tecido de equinos e asininos soropositivos. A reação de imunofluorescência indireta para Neospora spp. foi realizada em 142 amostras sorológicas de equinos e 150 soros de asininos, com ponto de corte de 1:50. Amostras de cérebro de equinos e asininos foram testadas por meio da reação de polimerase em cadeia (PCR) nested específica para o Espaço Transcrito Interno 1 (ITS1) do DNA ribossômico da subfamília Toxoplasmatinae, com os primers JS4/CT2b e CT1/CT2. Realizou-se ainda a partir destas amostras, a tentativa de isolamento in vivo e in vitro de Neospora spp. Verificou-se a presença de anticorpos anti-Neospora spp. em 4,9% (7/142) dos equinos e 12,0% (18/150) dos asininos, com títulos que variaram entre 1:50 e 1:200. Não foi verificada a presença de DNA de coccídeos da subfamília Toxoplasmatinae nos tecidos analisados por PCR. Dos oito bioensaios realizados (três a partir de tecidos de equinos e cinco a partir de tecido de asininos), não foi obtido êxito.

In equids, neosporosis is caused by the protozoan coccidia Neospora caninum and N. hughesi.The former is associated with abortions and neonatal disease, and N. hughesi causes Equine Protozoal Myeloencephalitis (EPM) in mules and horses, which was identified only in these species. The serological differentiation between N. caninum and N. hughesi is not possible due to cross-reactivity between antibodies against these parasites. The exposure of donkeys to Neospora spp. was already related, but its role as a possible host has not been elucitaded. The objective of this study was to determine the serological and molecular frequencies of Neospora spp. in equids and to in vitro isolate Neospora spp. from seropositive equines and donkeys tissues. Serology for Neospora spp. was performed on serum samples from 142 horses and 150 donkeys by Indirect Immunofluorescence, with a 1:50 cutoff. Brain tissues from horses and donkeys were tested by a nested polymerase chain reaction (nested PCR), specific for the Toxoplasmatinae Internal Transcribed Spacer 1 (ITS1) of the ribosomal DNA (rDNA), with primers JS4/CT2b and CT1/CT2. Was carried out from these samples, the attempt to isolate in vivo and in vitro Neospora spp. Antibodies to Neospora spp. were found in 4.9% (7/142) of horses and 12.0% (18/150) of donkeys, with titles ranging from 1:50 to 1: 200. Molecular analysis of nervous tissue samples were negative. For the isolation of Neospora spp. eight experiments were performed in immunosuppressed mice (three tissue from horses and five tissue donkeys), but was not successful.

Mieloencefalite protozoária equina / Equine protozoal myeloencephalitis / Mieloencefalitis Protozoaria Equina

Dentre as enfermidades neurológicas que acometem os equinos, a mieloencefalite protozoária equina (EPM) encontra-se em posição de destaque. Levando em consideração a importância da EPM no contexto das doenças neurológicas, esta revisão aborda entre outros, os aspectos epidemiológicos, clínicos, diagnósticos e terapêuticos da EPM, causadas tanto pelo Sarcocystis neurona quanto pelo Neospora caninum e Neospora hughesi, cujo objetivo é contribuir para a atualização dos profissionais envolvidos na área de clínica médica de equinos.(AU)

Among the neurological disorders that affect the horses, the equine protozoal myeloencephalitis (EPM) is the most important. Considering the importance of EPM in the context of neurological diseases, this review covers among others, the epidemiological, clinical, diagnoses and treatment of EPM, caused by Sarcocystis neurona as by Neospora caninum and Neospora hughesi and this study aims at contributing for the update of the veterinarians involved with equine internal medicine.(AU)

Entre las enfermedades neurológicas que afectan a los caballos, mieloencefalitis protozoaria equina (EPM) se encuentra en una posición de preeminencia. Teniendo en cuenta la importancia de la EPM en el contexto de las enfermedades neurológicas, esta revisión se centra, entre otros, los aspectos epidemiológicos, clínicos, diagnósticos y aspectos terapéuticos de EPM, causadas por Sarcocystis neurona así como Neospora caninum y Neospora hughesi, cuyo objetivo es ayudar a la actualización de profesionales involucrados en la clínica médica para caballos. (AU)

SOROEPIDEMIOLOGIA DE Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii E Neospora spp. EM CAVALOS MANGALARGA MARCHADOR CRIADOS NO SUL DE MINAS, BRASIL

Os objetos de estudo desta pesquisa foram a mieloencefalite protozoária equina (MPE), causada por Sarcocystis neurona, a toxoplasmose, zoonose causada por Toxoplasma gondii, e a neosporose, causada por Neospora caninum e N. hughesi. Esses protozoários são adquiridos pela ingestão de alimentos e água contaminados, causando distúrbios neurológicos e reprodutivos, predominando infecções subclínicas, trazendo prejuízos aos criadores. Tendo em vista que o Sul de Minas se destaca na equideocultura nacional por ser o berço do cavalo Mangalarga Marchador, sendo economicamente estratégico para a criação da raça, este teve como objetivo determinar a prevalência de anticorpos contra esses parasitos em cavalos dessa raça criados na região e verificar os fatores de risco associados à positividade. Foram analisados 506 equinos clinicamente sadios, provenientes de 53 propriedades localizadas no Sul de Minas Gerais. As amostras de soros foram submetidas à reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte de 1:80, 1:64 e 1:50, respectivamente, para S. neurona, T. gondii e Neospora spp. As soroprevalências encontradas entre equinos para esses três parasitos foram respectivamente, 26%, 19,9% e 23,9%. Nas propriedades, essas prevalências foram de 88,3%, 71,6% e 85%. Esses resultados indicam que o Sul de Minas é área enzoótica para os três protozoários em equinos Mangalarga Marchador, predominando a infecção subclínica ou crônica, assintomática. A transmissão horizontal parece ser o principal modo de transmissão desses parasitos, e diferentes fatores de risco estão associados com a soropositividade em equinos. Novas pesquisas são necessárias não só para estabelecer os fatores que aumentam o risco de transmissão desses agentes, bem como para determinar qual espécie de Neospora infecta os equinos.

The study subjects were the equine protozoal myeloencephalitis (MPE), caused by Sarcocystis neurona, toxoplasmosis, zoonosis caused by Toxoplasma gondii, and neosporosis, caused by Neospora caninum and N. hughesi. These protozoa are acquired by ingesting contaminated food and water, causing neurological and reproductive disorders, predominantly subclinical infections, causing losses to farmers. Once the southern Minas stands out in national equidculture for being the birthplace of Mangalarga Marchador horse, being economically strategic for the creation of the breed, the study aimed to determine the prevalence of antibodies against these parasites in horses of this breed created in the region and check the risk factors associated with positivity. 506 clinically healthy horses were analyzed, from 53 properties located in southern Minas Gerais. Serum samples were subjected to indirect immunofluorescence assay (IFA) with cutoff of 1:80, 1:64 and 1:50 respectively for S. neurona, T. gondii and Neospora spp. The seroprevalence found among horses for these three parasites were respectively 26%, 19.9% and 23.9%. In the properties, these prevalences were 88.3%, 71.6% and 85%. These results indicate that the southern Minas is an enzootic area for the three protozoa in Mangalarga Marchador horses, predominantly subclinical, chronic or asymptomatic infection. The horizontal transmission seems to be the main mode of transmission of these parasites and different risk factors are associated with seropositivity in horses. Further research is needed to establish which factors increase the risk of transmission of these agents, as well as determine which species of Neospora that infects horses.

Verificação da transmissão transplacentária e horizontal de Neospora spp. em equinos no sul do Brasil

A soroprevalência de Neospora spp. em equinos já foi relatada em diferentes áreas do mundo. Duas são as espécies conhecidas de protozoários do gênero Neospora capazes de infectar equinos. A primeira, N. hughesi, é incriminada como causadora de enfermidade neurológica enquanto que distúrbios reprodutivos são associados à infecção por N. caninum, segunda espécie reconhecidamente infectante para cavalos. O objetivo deste trabalho foi verificar a transmissão transplacentária e horizontal de Neospora spp. em equinos, naturalmente infectados. A técnica empregada para pesquisa de imunoglobulinas da classe G (IgG) anti-Neospora, foi a reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Para sensibilizar as lâminas foram utilizados taquizoítos de N. caninum (Cepa NC-1). Para as éguas foi utilizado um ponto de corte de 1:50 como triagem, enquanto os potros foram considerados positivos quando reagentes na diluição de 1:16 imediatamente após o nascimento e 1:50 para potros aos 12 meses. As coletas de sangue dos potros foram realizadas antes da ingestão de colostro e aos doze meses de idade e, das éguas em média dois meses antes do parto. Entre as 78 éguas coletadas, 50 apresentavam anticorpos contra Neospora spp. na diluição 1:50, correspondendo a 64% da população estudada. Dos 78 potros pesquisados, coletados imediatamente após o nascimento, 32 (41%) foram reagentes, destes 24 eram produtos de fêmeas positivas. Para avaliar a transmissão horizontal foram acompanhados potros, congenitamente infectados e não infectados, convivendo no mesmo ambiente, até os 12 meses de idade. Na segunda fase do estudo foram coletados 40 potros, destes, 15 (37,5%) apresentavam IgG contra Neospora spp. antes da ingestão de colostro. Após um ano de vida, seis potros congenitamente infectados ainda apresentavam IgG, 40% do total de nascidos positivos. Dos 25 potros que não apresentavam IgG contra Neospora spp. ao nascimento (62,5%), sete passaram a apresentar níveis detectáveis aos 12 meses de idade, correspondendo a 28%. A frequência elevada de anticorpos contra Neospora spp. encontrada nas éguas de cria desta pesquisa, justifica a necessidade da realização de mais estudos para identificar possíveis interferências neurológicas e reprodutivas em equinos.

The seroprevalence of Neospora spp. in horses has been reported in different areas of the world. There are two known species of protozoa of the genus Neospora able to infect horses. The first, N. hughesi is incriminated as causing neurological disease and reproductive disorders are associated with infection by N. caninum, second infecting species known for horses. The objective of this project was to verify the placenta and horizontal transmission of Neospora spp. in horses naturally infected. The technique for immunoglobulin G class Search (IgG) anti-Neospora, was the indirect immunofluorescence assay (IFA). The antigens were used tachyzoites of N. caninum (NC-1 strain). For mares we used a 1:50 cutoff point for screening, while the foals were considered positive when reagents in the 1:16 dilution immediately after birth and 1:50 for foals to 12 months. Blood samples were taken before the foals colostrum intake and the twelve months of age and mares two average a month before delivery. Among the 78 mares collected 50 had antibodies against Neospora spp. at 1:50 dilution, corresponding to 64% of the study population. Of the 78 surveyed foals, collected immediately after birth, 32 (41%) were positive, 24 of these were products of positive females. To evaluate the horizontal transmission followed foals, congenitally infected and uninfected, living in the same environment, up to 12 months old. In the second phase of the study were collected 40 foals, of which 15 (37.5%) had IgG against Neospora spp. before colostrum feeding. After a year of life, six congenitally infected foals still had IgG, 40% of positive births. Of the 25 colts who did not have IgG against Neospora spp. birth (62.5%), seven of them exhibit detectable levels at 12 months of age, corresponding to 28%. The high frequency of antibodies against Neospora spp. found in Mares creates this research it justifies the need for further studies to identify possible neurological and reproductive interference in horses.

Neosporose equina: ocorrência de anticorpos anti-Neospora spp. e associação entre status sorológico de éguas e de suas crias / Equine neosporosis: occurrence of antibodies against Neospora spp. and association between the serological status of the mares and of their offspring

Os protozoários Neospora caninum e N. hughesi infectam os equinos e podem provocar diferentes sinais clínicos associados a problemas reprodutivos ou a distúrbios neurológicos, respectivamente. A patogenia da neosporose é pouco conhecida nos equinos, bem como as fontes de infecção horizontal de N. hughesi. Além disso, há dúvidas quanto ao papel da transmissão vertical de Neospora spp. na sua manutenção em populações equinas. Neste estudo avaliaram-se: (1) a ocorrência da infecção por Neospora spp. na população de éguas em idade reprodutiva em um haras de cavalos da raça Crioula; e (2) a possível associação entre o status sorológico destas éguas com o de suas crias, como meio de investigar, indiretamente, a relevância da transmissão transplacentária na ocorrência da infecção por Neospora spp. nestes animais. A associação entre o status sorológico das éguas e o de suas crias foi altamente significativa. Os animais descendentes de éguas soropositivas tiveram maior ocorrência de anticorpos anti-Neospora spp. do que os descendentes de éguas soronegativas, embora expostos aos mesmos fatores de risco ambientais. A associação entre parentesco em primeiro grau e status sorológico indica a influência da infecção vertical (transplacentária) na ocorrência de Neospora spp. na população equina estudada.(AU)

Neospora caninum and N. hughesi are protozoa which can infect horses and can cause reproductive and neurological diseases, respectively. The pathogenesis of neosporosis in horses is poorly understood, as well as the sources of horizontal infection of N. hughesi. Furthermore, there are doubts about the role of the vertical transmission of Neospora spp. in maintenance of these parasites in equine populations. In this study, we evaluated: (1) the occurrence of infections by Neospora spp. in a population of mares (in reproductive age) on a farm of Crioula breed horses; and (2) the possible association between the serological status of mares and of their offspring, aiming to investigate, indirectly, the relevance of transplacental transmission for the occurrence of Neospora spp. in these horses. We found a highly significant association between the serological status of mares and their offspring. Although had been exposed to the same environmental risk factors, the descendants of seropositive mares had a higher percentage of seropositivity against Neospora spp. compared to the descendants of seronegative mares. The association between kinship and serological status indicates an influence of vertical (transplacental) infection raising the occurrence of Neospora spp. in the studied equine population.(AU)

Filogenia molecular de protozoários pertencentes à sub-família Toxoplasmatinae pela análise de genes mitocondriais e de apicoplasto / Molecular phylogeny in protozoan of the subfamily toxoplasmatinae based on genes of mitocôndria and apicoplasto

Os membros da sub-família Toxoplasmatinae conhecidos são Hammondia hammondi, Toxoplasma gondii, Neospora hughesi, Neospora caninum, Hammondia heydorni e Besnoitia spp. Os cães (e provavelmente outras espécies de canídeos) são hospedeiros definitivos de N. caninum e H. heydorni. Os oocistos destas espécies de coccídios são morfologicamente indistinguíveis de forma que o diagnóstico coprológico diferencial entre os dois agentes é virtualmente impossível, se utilizadas metodologias convencionais de diagnóstico. Situação análoga é verificada com os gatos (e outras espécies de felídeos) com relação à infecção por T. gondii e H. hammondi. O objetivo deste trabalho foi propor a reconstrução filogenética de protozoários pertencentes à sub-família Toxoplasmatinae pela análise de seqüências de nucleotídeos de genes mitocondriais e de apicoplasto. Foram empregadas seqüências gênicas de CytB mitocondrial e de dois genes de apicoplasto, o gene codificador da subunidade beta de RNA polimerase DNA dependente (RpoB) e o gene codificador de proteína caseinolitica (ClpC). Pelas análises filogenéticas e de variabilidade nucleotídica e de aminoácidos, verifica-se que a espécie H. heydorni é eqüidistante de todas as outras espécies de toxoplasmatineos. Os posicionamentos relativos dos gêneros Toxoplasma, Neospora e Hammondia nas árvores filogenéticas não foram congruentes em todas as reconstruções, pois dependendo dos táxons que são empregados como grupos externos, as topologias das reconstruções variam e os clados formados são estatisticamente pouco suportados. Assim, a reconstrução de topologias produzindo com ramos curtos que derivam nós de baixo suporte estatístico, somado à eqüidistância evolutiva entre os táxons avaliados (Neospora spp., H. heydorny e T. gondii) permite supor que uma politomia consistente explicaria a evolução para estes organismos, ou seja, a resolução para o posicionamento relativo entre estes táxons poderia ser resultado de evolução radiada. Os genes de organelas mostraram-se mais conservados em relação aos genes nucleares. Embora os genes de apicoplasto possam ser mais conservados que genes nucleares, eles parecem ter relações entre substituições não sinônimas e substituições sinônimas consideravelmente superiores àquelas de genes nucleares e mitocondriais, o que pode indicar que os produtos gênicos estejam sendo submetidos a pressão seletiva positiva. No caso dos genes mitocondriais e nucleares, é possível supor que os mesmos estejam submetidos à pressão seletiva negativa, indicando que as substituições tendem a ser deletérias aos organismos e por isso as mudanças nos produtos gênicos devam ser menos freqüentemente registradas. Ainda, a variabilidade em sítios não sinônimos é consideravelmente superior para seqüências de apicoplasto em relação às demais, particularmente no caso das seqüências RpoB. Também em termos de variabilidade em sítios não sinônimos, percebe-se que as seqüências de genes de apicoplasto de H. heydorni são tão distintas das de T. gondii quanto de N. caninum. Nas análises realizadas com genes de apicoplasto, é marcante a divergência entre as duas linhagens de H. heydorni. Vale ressaltar que as diferenças genotípicas entre as duas linhagens de H. heydorni são maiores que as diferenças entre as duas espécies reconhecidas de Neospora, indicando que as duas linhagens de H. heydorni poderiam ser classificadas como duas espécies distintas, se apenas critérios de evolução molecular fossem considerados

The known members of the sub-family Toxoplasmatinae are Hammondia hammondi, Toxoplasma gondii, Neospora hughesi, Neospora caninum, Hammondia heydorni and Besnoitia spp. Dogs (and probably other species of dogs) are definitive hosts of N. caninum and H. heydorni. The oocysts of coccidia of these species are morphologically indistinguishable and the coprological differential diagnosis between the two agents is virtually impossible if used conventional methods of diagnosis. Similar situation is observed with the cats (and other species of felids) with respect to T. gondii and H. hammondi. The objective of this study was to propose a phylogenetic reconstruction of protozoa belonging to the subfamily Toxoplasmatinae by analyzing nucleotide sequences of mitochondrial genes and apicoplast. We used gene sequences of cytochrome b and two apicoplast genes, the gene encoding the beta subunit of DNA dependent RNA polymerase (RpoB) and the gene encoding caseinolitic protein (ClpC). From the phylogenetic analysis and the analysis of nucleotide and amino acids variability, was shown that the species H. heydorni is equidistant from all other species of toxoplasmatineos. The relative positions of the genera Toxoplasma, Neospora and Hammondia in the phylogenetic trees were not congruent in all reconstructions, because the topologies of the reconstructions varies according to the taxons that are used as outgroups and clades are poorly supported statistically. Thus, reconstructions of topologies with short branches that derive to poorly statistical supported nodes, coupled with the evolutionary equidistance between taxa the assessed (Neospora spp. H. heydorni. and T. gondii) suggests that a consistent polytomous evolution would explain the evolution within this group of organisms, namely the the relative placement of these taxa could be the result of a radiated evolution. The genes of organelles were more conserved than nuclear genes. Although the apicoplast genes may be more conserved than nuclear genes, they have the ratio between non-synonymous substitutions and synonymous substitutions considerably higher than those of nuclear and mitochondrial genes, which may indicate that the gene products are being subjected to positive selective pressure. In the case of nuclear and mitochondrial genes, it is possible to assume that they are subject to negative selective pressure, indicating that the substitutions are likely to be harmful to organisms and therefore changes in gene products to be less frequently recorded. Still, the variability in non-synonymous sites is considerably higher for sequences of apicoplast in relation to others loci, particularly in the case of RpoB sequences. Also in terms of variability in non-synonymous sites, it is observed that the sequences of apicoplast genes of H. heydorni are as different from those of T. gondii as the N. caninum. The analyzes of apicoplast genes revealed a striking divergence between the two strains of H. heydorni. It is noteworthy that the genotypic differences between the two strains of H. heydorni are greater than the differences between the two species of Neospora, indicating that the two strains of H. heydorni could be classified as two distinct species; if solely criteria of molecular evolution were considered