Comparison of efficiency between two artificial insemination methods using fresh semen in domestic cat (Felis Catus) / Comparação da eficiência entre dois métodos de inseminação artificial utilizando sêmen fresco em gata doméstica (Felis Catus)

This study aimed to compare domestic cats' pregnancy rates using fresh semen for the bilateral intrauterine insemination (BIUI) method and the novel uterine body insemination (UBI) method. Queens received a single injection of equine chorionic gonadotropin (eCG) (200 IU; IM) to induce ovarian follicular development and, after 83 h, an injection of human chorionic gonadotropin (hCG) (100 IU; IM) for final oocyte maturation and ovulation induction. Thirty-four hours after hCG administration, 3 × 106fresh spermatozoa were used for insemination by the BIUI (n = 8 queens) or by the UBI (n = 7 queens) techniques,respectively. Pregnancy rates were 75.00% (6/8) by BIUI and 42.85% (3/7) by the UBI method. Themean litter size was 3.0 ± 0.86 for the BIUI, and 2.0 ± 1.0 for the UBI method. Spontaneous abortion occurred on day 35 of pregnancy in one queen following the UBI method. Our findings showed that the BIUI of queens with fresh semen resulted in higher pregnancy rates than the novel UBI method; also, acceptable pregnancy rates were achieved following BIUI with fresh semen in the domestic cat.(AU)

O objetivo deste estudo foi comparar as taxas de prenhez em gatas domésticas usando sêmen fresco para o método de inseminação intrauterina bilateral (BIUI) e o novo método de inseminação do corpo uterino (UBI). As gatas receberam uma única injeção de gonadotrofina coriônica equina (eCG) (200 UI; IM) para induzir o desenvolvimento folicular ovariano e, após 83 h, uma injeção de gonadotrofina coriônica humana (hCG) (100 UI; IM) para maturação final do oócito e ovulação indução. Trinta e quatro horas após a administração de hCG, 3 × 106 espermatozoides frescos foram utilizados para inseminação pelas técnicas de BIUI (n = 8 gatas) ou UBI (n = 7 gatas), respectivamente. As taxas de gravidez foram de 75,00% (6/8) pela BIUI e 42,85% (3/7) pelo método UBI. O tamanho médio da ninhada foi de 3,0 ± 0,86 para o método BIUI e 2,0 ± 1,0 para o método UBI. Aborto espontâneo ocorreu no dia 35 de gestação em uma gata seguindo o método UBI. Nossos achados mostraram que a BIUI de gatas com sêmen fresco resultou em maiores taxas de prenhez do que o novo método UBI; também, taxas de prenhez aceitáveis foram alcançadas após BIUI com sêmen fresco no gato doméstico.(AU)

Low versus high antral follicle count on the fertility of timed AI Nelore heifers / Baixa versus alta contagem de folículos antrais na fertilidade de novilhas Nelore inseminadas em tempo-fixo

This study aimed to determine the effect of antral follicle count (AFC), and pubertal status on the fertility of beef heifers. In this study, 230 Nelore heifers, 20±2 months of age, were subjected to an estradiol progesterone-based timed artificial insemination (TAI) program. On Day 0 of the TAI protocol, the heifers were examined by transrectal ultrasound to record videos of the ovaries. Later, in the darkroom of the laboratory of images, the videos were analyzed for AFC (≥ 3 mm) of each ovary. Females who failed the first TAI were resynchronized with the same hormonal protocol. The pregnancy status was evaluated by ultrasonography 30 days after each FTAI. The general mean of the AFC was 22.0 follicles. Thus, the heifers were divided into 2 groups according to AFC: Low AFC (˂ 22 follicles, n = 114), and High AFC (≥ 22 follicles, n = 116). No differences (P > 0.05) in the pregnancy per AI (P/AI) were observed between the Low and High AFC groups, and between pubertal and prepubertal categories. The P/AI was not different between heifers that displayed or did not estrus (P = 0.2). However, considering the estrus response of each AFC group, High AFC heifers that displayed estrus had greater P/AI (P = 0.01) than High AFC heifers that did not display estrus. In summary, AFC and pubertal status did not affect the fertility of Nelore heifers. In contrast, the P/AI of heifers that did not display estrus was lower than heifers observed in estrus only in the High AFC group.(AU)

Esse estudo teve como objetivo determinar o efeito da contagem de folículos antrais (CFA) e da maturidade sexual na fertilidade de novilhas de corte. Neste estudo, 230 novilhas Nelore, com 20 ± 2 meses de idade, foram submetidas a um protocolo de inseminação em tempo-fixo (IATF) a base de estradiol e progesterona. No Dia 0 do protocolo de IATF as novilhas foram examinadas por ultrassonografia transretal e vídeos dos ovários foram gravados para posterior CFA (≥ 3 mm) realizada na sala escura do laboratório de imagens. Trinta dias após a ultrassonografia, as fêmeas que falharam na primeira IATF foram ressincronizadas com o mesmo protocolo hormonal. A prenhez foi avaliada por ultrassonografia 30 dias após cada IATF. A média geral da CFA foi de 22 folículos; assim, as novilhas foram divididas em 2 grupos de acordo com a CFA: CFA baixa (˂ 22 folículos, n=114) e CFA alta (≥ 22 folículos, n=116). A prenhez por IA (P/IA) foi semelhante (P > 0,05) entre os grupos CFA baixa e alta e entre novilhas púberes e pré-púberes. A P/IA não foi diferente entre as novilhas que apresentaram ou não cio (P = 0,2). No entanto, novilhas com CFA alta que apresentaram cio tiveram maior P/IA (P = 0,01) do que novilhas com CFA alta que não apresentaram cio. Em conclusão, a CFA e a maturidade sexual não afetaram a fertilidade de novilhas. Por outro lado, a P/IA das novilhas que apresentaram cio foi maior do que das novilhas não observadas em cio apenas no grupo CFA alta.(AU)

Effects of continuous light and light intensity on the growth performance and gonadal development of Nile tilapia

Continuous illumination has been known to exert positive effects by stimulating growth and delaying unwanted maturation in seasonal-temperate farmed fish species like salmonids. However, in tropical fish like Nile tilapia (Oreochromis niloticus), some studies exist showing inconsistent results and even fewer data is available regarding the effects of light intensity. To clarify some of the inconsistent results in literature and evaluate the effect of different light intensity levels on growth and sexual maturation in Nile tilapia (Oreochromis niloticus), we reared twenty days post-hatch Nile tilapia larvae under continuous illumination at three different light intensities and compared against a control photoperiod (12L:12D) up to 118 days post-hatch. A total of 600 fry were used using 75 fry per experimental unit in a previously tested experimental aquarium setup. Fish exposed to high and medium intensity continuous illumination treatments were significantly heavier (13-20%) and longer (6-8%) than fish exposed to the control photoperiod. Importantly, however, the degree of growth enhancement did not vary significantly according to the light intensity used. Feed intake was also higher in all continuous illumination treatments than in the control photoperiod, suggesting that growth benefits might be due to an increase in feed intake, which is not affected by the light intensities used. Gonadal development on the other hand, presented differences between sexes with a delay in spermatogenesis, while an advancement towards ovarian maturation occurred compared with the control fish. These results suggest that continuous illumination can influence both growth and gonadal development in Nile tilapia with no apparent differences between the light intensities tested in this study.

Efeito da somatotropina bovina recombinante (rbST) na produção in vivo e na maturação in vitro de oócitos bovinos da raça Sindi / Effect of recombinant bovine somatotropin (rbST) on the in vivo production and in vitro maturation of bovine oocytes of the Sindi breed

A fim de avaliar o efeito de diferentes doses da rbST sobre a dinâmica folicular, a produção e a maturação in vitro de oócitos, 20 vacas Sindi, divididas em três grupos, receberam um dispositivo de progesterona intravaginal, estradiol e PGF2α, além de 2mL de solução salina (grupo controle), 250 (grupo rbST 250) ou 500mg de rbST (grupo rbST 500). Cinco dias depois, realizou-se a ovum pick up, e os complexos cumulus-oócitos (CCOs) recuperados foram selecionados, classificados e maturados in vitro. Os dados de contagem foram comparados pelo procedimento glht (General Linear Hypothesis Test), e os dados em porcentagem foram submetidos ao qui-quadrado, no programa estatístico R, onde as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. Não houve diferença (P>0,05) entre os grupos quanto à quantidade de folículos e à taxa de maturação. Os grupos rbST 250 e rbST 500 foram significativamente superiores (P<0,05) ao grupo controle em relação ao número de folículos grandes (0,42±0,20 vs. 0). O grupo rbST 500 apresentou maior (P<0,05) porcentagem de oócitos viáveis (91,52%) do que os grupos controle (67,85%) e rbST 250 (53,33%). A rbST aumenta o número de folículos grandes, e 500mg de rbST aumentam a porcentagem de oócitos viáveis em vacas Sindi.(AU)

In order to evaluate the effect of different doses of rbST on the follicular dynamics, production, and in vitro maturation of oocytes, 20 Sindhi cows were divided into three groups, receiving an intravaginal progesterone device, estradiol and PGF2α, and 2mL of solution saline (Control Group), 250 (rbST 250 Group) or 500mg rbST (rbST 500 Group). Five days later, the ovum pick up was performed, and the cumulus-oocyte (CCO) complexes recovered were selected, classified, and matured in vitro. The counting data were compared by the glht (General Linear Hypothesis Test) procedure, and the percentage data were submitted to Qui- square, in the statistical program R, where differences were considered significant when P< 0.05. There was no difference (P> 0.05) between the groups regarding follicle quantity and maturation rate. The rbST 250 and rbST 500 groups were significantly higher (P< 0.05) than the Control group in relation to the number of large follicles (0.42±0.20 versus 0). The rbST 500 group presented higher (P< 0.05) percentage of viable oocytes (91.52%) than the Control (67.85%) and rbST 250 (53.33%) groups. rbST increases the number of large follicles and 500mg rbST increases the percentage of viable oocytes in Sindhi cows.(AU)

Efeito da somatotropina bovina recombinante (rbST) na produção in vivo e na maturação in vitro de oócitos bovinos da raça Sindi / Effect of recombinant bovine somatotropin (rbST) on the in vivo production and in vitro maturation of bovine oocytes of the Sindi breed

A fim de avaliar o efeito de diferentes doses da rbST sobre a dinâmica folicular, a produção e a maturação in vitro de oócitos, 20 vacas Sindi, divididas em três grupos, receberam um dispositivo de progesterona intravaginal, estradiol e PGF2α, além de 2mL de solução salina (grupo controle), 250 (grupo rbST 250) ou 500mg de rbST (grupo rbST 500). Cinco dias depois, realizou-se a ovum pick up, e os complexos cumulus-oócitos (CCOs) recuperados foram selecionados, classificados e maturados in vitro. Os dados de contagem foram comparados pelo procedimento glht (General Linear Hypothesis Test), e os dados em porcentagem foram submetidos ao qui-quadrado, no programa estatístico R, onde as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. Não houve diferença (P>0,05) entre os grupos quanto à quantidade de folículos e à taxa de maturação. Os grupos rbST 250 e rbST 500 foram significativamente superiores (P<0,05) ao grupo controle em relação ao número de folículos grandes (0,42±0,20 vs. 0). O grupo rbST 500 apresentou maior (P<0,05) porcentagem de oócitos viáveis (91,52%) do que os grupos controle (67,85%) e rbST 250 (53,33%). A rbST aumenta o número de folículos grandes, e 500mg de rbST aumentam a porcentagem de oócitos viáveis em vacas Sindi.(AU)

In order to evaluate the effect of different doses of rbST on the follicular dynamics, production, and in vitro maturation of oocytes, 20 Sindhi cows were divided into three groups, receiving an intravaginal progesterone device, estradiol and PGF2α, and 2mL of solution saline (Control Group), 250 (rbST 250 Group) or 500mg rbST (rbST 500 Group). Five days later, the ovum pick up was performed, and the cumulus-oocyte (CCO) complexes recovered were selected, classified, and matured in vitro. The counting data were compared by the glht (General Linear Hypothesis Test) procedure, and the percentage data were submitted to Qui- square, in the statistical program R, where differences were considered significant when P< 0.05. There was no difference (P> 0.05) between the groups regarding follicle quantity and maturation rate. The rbST 250 and rbST 500 groups were significantly higher (P< 0.05) than the Control group in relation to the number of large follicles (0.42±0.20 versus 0). The rbST 500 group presented higher (P< 0.05) percentage of viable oocytes (91.52%) than the Control (67.85%) and rbST 250 (53.33%) groups. rbST increases the number of large follicles and 500mg rbST increases the percentage of viable oocytes in Sindhi cows.(AU)

Reproductive biology, morphology, and morphometry of ovaries and oviducts of Trachemys scripta elegans in Brazilian Cerrado / Biologia reprodutiva, morfologia e morfometriade ovários e ovidutos de Trachemys scripta elegans no Cerrado Brasileiro

Although Trachemys scripta elegans is an exotic species popular as a pet in Brazil, studies on reproductive biology and capacity are non-existent in the Brazilian Cerrado. This study analyzed ovarian and oviduct characteristics and the egg production capacity of T. scripta elegans grown in this biome. The findings will associate with the size of the specimens and the sexual maturity, aiming at comparisons with native and exotic populations, as well as interspecific and contributing to the understanding of its impact on the invaded ecosystems and the establishment of eradication programs. Thus, 39 females had evaluated the body biometry and the morphology and morphometry of the ovaries and oviducts. G2 (N=20): with Class I (>5-10mm) follicles, with Class I and Class II (>10-fold) follicles, 25mm) and G3 (N=9) with Class I, Class II and Class III (>25mm) follicles. Analysis of variance, Scott-Knott's test, and Pearson's correlation analysis showed that there was no significant difference between the groups in body biometry; in the mean gonadosomatic index and gonadal morphometry, only the width of the oviducts in the right antimer and the mass and width in the left antimer were higher in G3, the only one that presented eggs. There was positive and harmonic development between body mass, carapace, and plastron, and gonadal growth occurred concomitantly with body growth, indicating a higher reproductive potential and a positive relationship between the size of the litter and the female litter. The gonadosomatic index proved to be an excellent reproductive indicator, and the ovarian evaluation was a better indicator of sexual maturity than the maximum carapace length.(AU)

Embora Trachemys scripta elegans seja uma espécie exótica popular como animal de estimação no Brasil, estudos sobre biologia e capacidade reprodutivas são inexistentes no Cerrado brasileiro. Este estudo analisou características ovarianas e do oviduto e a capacidade de produção de ovos em T. scripta elegans criadas neste bioma, correlacionando estes achados ao tamanho dos espécimes e a maturidade sexual, visando comparações com populações nativas e exóticas, bem como interespecíficas e contribuir para a compreensão de seu impacto nos ecossistemas invadidos e com o estabelecimento de programas de erradicação. Assim, 39 fêmeas tiveram avaliadas a biometria corporal e a morfologia e morfometria dos ovários e ovidutos. De acordo com o tamanho dos folículos ovarianos as fêmeas foram separadas em G1 (N= 10): com folículos Classe I (>5-10 mm), G2 (N= 20): com folículos Classe I e Classe II (>10-25 mm) e G3 (N= 9) com folículos Classe I, Classe II e Classe III (>25 mm). À análise de variância, teste de Scott-Knott e à análise de correlação de Pearson verificou-se que não houve diferença significativa entre os grupos na biometria corporal; no índice gonadossomático médio e na morfometria gonadal, apenas a largura dos ovidutos no antímero direito e a massa e a largura no antímero esquerdo foram maiores no G3, o único que apresentou ovos. Houve desenvolvimento positivo e harmônico entre massa corporal, carapaça e plastrão e o crescimento gonadal ocorreu concomitante ao crescimento corporal, indicando maior potencial reprodutivo e relação positiva entre o tamanho da ninhada de ovos e o da fêmea. O índice gonadossomático mostrou-se um bom indicador reprodutivo e a avaliação ovariana um melhor indicador da maturidade sexual que o comprimento máximo da carapaça. (AU)

Reproductive biology, morphology, and morphometry of ovaries and oviducts of Trachemys scripta elegans in Brazilian Cerrado / Biologia reprodutiva, morfologia e morfometriade ovários e ovidutos de Trachemys scripta elegans no Cerrado Brasileiro

Although Trachemys scripta elegans is an exotic species popular as a pet in Brazil, studies on reproductive biology and capacity are non-existent in the Brazilian Cerrado. This study analyzed ovarian and oviduct characteristics and the egg production capacity of T. scripta elegans grown in this biome. The findings will associate with the size of the specimens and the sexual maturity, aiming at comparisons with native and exotic populations, as well as interspecific and contributing to the understanding of its impact on the invaded ecosystems and the establishment of eradication programs. Thus, 39 females had evaluated the body biometry and the morphology and morphometry of the ovaries and oviducts. G2 (N=20): with Class I (>5-10mm) follicles, with Class I and Class II (>10-fold) follicles, 25mm) and G3 (N=9) with Class I, Class II and Class III (>25mm) follicles. Analysis of variance, Scott-Knott's test, and Pearson's correlation analysis showed that there was no significant difference between the groups in body biometry; in the mean gonadosomatic index and gonadal morphometry, only the width of the oviducts in the right antimer and the mass and width in the left antimer were higher in G3, the only one that presented eggs. There was positive and harmonic development between body mass, carapace, and plastron, and gonadal growth occurred concomitantly with body growth, indicating a higher reproductive potential and a positive relationship between the size of the litter and the female litter. The gonadosomatic index proved to be an excellent reproductive indicator, and the ovarian evaluation was a better indicator of sexual maturity than the maximum carapace length. Ovaries were irregular structures, without delimitation between the cortical and medullary regions and filled with vitelogenic follicles of different diameters, atresic follicles, and corpora lutea, which reflected the ovarian complexity of the species and the presence of follicular hierarchy. In the scarce stroma, two germinative beds were observed per ovary and the presence of gaps very close to the follicles and associated with the blood vessels. Analysis of gonadal tissue revealed three types of oocytes according to cytoplasmic characteristics: homogeneous, vesicular or vesicular in the cortex with apparent granules. Oviducts were functional and separated, joining only in the final portion to form the cloaca and subdivided into infundibulum, tuba, isthmus, uterus, and vagina. The structure of the uterine tube was composed of serosa, muscular and mucous, which was full of glands. The presence of eggs in the oviducts indicated that the specimens can reproduce in the Brazilian Cerrado. This study provides necessary and relevant information on the reproductive biology and capacity of T. scripta elegans in the Brazilian Cerrado and can contribute to the understanding of its impact on the invaded ecosystems and the establishment of eradication programs. The extraction of females with capacity can reduce the annual reproductive yield of the species and decrease its effect on local biodiversity.(AU)

Embora Trachemys scripta elegans seja uma espécie exótica popular como animal de estimação no Brasil, estudos sobre biologia e capacidade reprodutivas são inexistentes no Cerrado brasileiro. Este estudo analisou características ovarianas e do oviduto e a capacidade de produção de ovos em T. scripta elegans criadas neste bioma, correlacionando estes achados ao tamanho dos espécimes e a maturidade sexual, visando comparações com populações nativas e exóticas, bem como interespecíficas e contribuir para a compreensão de seu impacto nos ecossistemas invadidos e com o estabelecimento de programas de erradicação. Assim, 39 fêmeas tiveram avaliadas a biometria corporal e a morfologia e morfometria dos ovários e ovidutos. De acordo com o tamanho dos folículos ovarianos as fêmeas foram separadas em G1 (N= 10): com folículos Classe I (>5-10 mm), G2 (N= 20): com folículos Classe I e Classe II (>10-25 mm) e G3 (N= 9) com folículos Classe I, Classe II e Classe III (>25 mm). À análise de variância, teste de Scott-Knott e à análise de correlação de Pearson verificou-se que não houve diferença significativa entre os grupos na biometria corporal; no índice gonadossomático médio e na morfometria gonadal, apenas a largura dos ovidutos no antímero direito e a massa e a largura no antímero esquerdo foram maiores no G3, o único que apresentou ovos. Houve desenvolvimento positivo e harmônico entre massa corporal, carapaça e plastrão e o crescimento gonadal ocorreu concomitante ao crescimento corporal, indicando maior potencial reprodutivo e relação positiva entre o tamanho da ninhada de ovos e o da fêmea. O índice gonadossomático mostrou-se um bom indicador reprodutivo e a avaliação ovariana um melhor indicador da maturidade sexual que o comprimento máximo da carapaça. Ovários foram estruturas irregulares, sem delimitação entre a região cortical e medular e repletos de folículos vitelogênicos de diferentes diâmetros, folículos atrésicos e corpos lúteos, que refletiram a complexidade ovariana da espécie e a presença de hierarquia folicular. No estroma escasso foram observados dois leitos germinativos por ovário e a presença de lacunas muito próximas aos folículos e associadas aos vasos sanguíneos. A análise do tecido gonadal revelou três tipos de oócitos de acordo com as características do citoplasma: homogêneo, vesicular ou vesicular no córtex com grânulos aparentes. Ovidutos eram funcionais e separados, unindo-se apenas na porção final para formar a cloaca e subdividiam-se em infundíbulo, tuba uterina, istmo, útero e vagina. A estrutura da tuba uterina era constituída de serosa, muscular e mucosa, a qual era repleta de glândulas. A presença de ovos nos ovidutos indicou que os espécimes podem se reproduzir no cerrado brasileiro. Este estudo fornece informações básicas e relevantes da biologia e capacidade reprodutivas de T. scripta elegans no Cerrado brasileiro e pode contribuir com a compreensão de seu impacto nos ecossistemas invadidos e com o estabelecimento de programas de erradicação, uma vez que a extração de fêmeas com capacidade reprodutiva pode contribuir com a diminuição do rendimento reprodutivo anual da espécie e diminuir seu efeito sobre a biodiversidade local.(AU)

In vitro embryos production of oocytes selected based on follicular size and by brilliant cresyl blue staining / Produção in vitro de embriões de oócitos selecionados baseados no tamanho folicular e por coloração com azul cresil brilhante

We evaluated the competence of bovine oocytes via morphological selection associated with follicular diameter and by brilliant cresyl blue (BCB) staining, in order to improve oocyte selection and the efficiency of in vitro embryo production. Follicles with small (20,05) BCB+ rates, but both differed (p0,05) in MII rate in the mixed (respectively 86.7 ± 3.4 and 75.8 ± 2.2), large (respectively 89.4 ± 2.6 and 79.7 ± 2.3) and small (respectively 76.7 ± 2.9 and 67.2 ± 2.5) diameter groups. Comparing BCB (+ and -) oocytes, we observed (p>0,05) no change in the percentage of embryos in the large group (respectively 67.3 ± 3.3 and 53.5 ± 5.8) and in the small group (respectively 43.8 ± 5.3 and 33.9 ± 2.2), but there was a difference (p<0.05) in the mixed group (respectively 57.8 ± 3.9 and 39.6 ± 7.5). Furthermore, when we compared between follicular groups, the BCB+/large-diameter group (61.1 ± 3.9%) had a significant higher percentage of embryos (p<0.05) than the small-diameter BCB+ (43.8 ± 5.3) groups. To conclude, selection procedures that use follicle size and/or BCB staining may be used as an additional tool to improve the in vitro production of embryos.

Avaliou-se a competência de oócitos bovinos através da seleção morfológica associada ao diâmetro folicular e pela coloração azul cresil brilhante (BCB), a fim de melhorar a seleção de oócitos e a eficiência da produção in vitro de embriões. Folículos com diâmetro pequeno (20,05), mas ambos diferiram (p0,05) na taxa de MII nos grupos mistos (respectivamente 86,7 ± 3,4 e 75,8 ± 2,2), grande (respectivamente 89,4 ± 2,6 e 79,7 ± 2,3) e pequeno (respectivamente 76,7 ± 2,9 e 67,2 ± 2,5). Comparando os oócitos BCB (+ e -), não observamos alteração (p>0,05) na porcentagem de embriões no grupo grande (respectivamente 67,3 ± 3,3 e 53,5 ± 5,8) e no grupo pequeno (respectivamente 43,8 ± 5,3 e 33,9 ± 2,2), mas há houve diferença (p<0,05) no grupo misto (respectivamente 57,8 ± 3,9 e 39,6 ± 7,5). Além disso, quando comparamos os grupos foliculares, o grupo BCB+/grande (61,1 ± 3,9%) apresentou uma porcentagem significativamente maior de embriões (p<0,05) do que o grupo BCB+/pequeno (43,8 ± 5,3). Para concluir, os procedimentos de seleção que usam tamanho do folículo e/ou coloração com BCB podem ser usados como uma ferramenta adicional para melhorar a produção in vitro de embriões.

Astyanax altiparanae ovarian maturation after spawning in water recycling systems / Maturação ovariana de Astyanax altiparanae após desova em sistema de recirculação de água

In this study, we evaluated the possibility of obtaining successive Astyanax altiparanae spawns under laboratory conditions. In order to do so, 104 specimens were randomly distributed into four boxes (10 females and 16 males each) and kept in a recirculation system at an average temperature of 29.24 ± 0.42 °C, under natural photoperiod, for 30 days. On the onset of the experiment, males and females were induced for reproduction with a 6 mg kg-1 carp pituitary extract dose. After that, ovary (for gonadosomatic index and stereological assessment) and blood samples (for steroid evaluation) were collected from eight females (two per box) at the following moments: immediately after hormonal induction (day 0) and on days 1, 6, 16 and 30 after spawning. On day 6, spawned females presented complete mature ovaries similar to those on day 0 and, in this period, we did not observe postovulatory complexes, indicating that their resorption happened very fast. Concomitantly, the steroid levels increased gradually up to day 6, which corroborated an intense vitellogenic activity in this period. This study has demonstrated that A. altiparanae females are suitable for induced spawning within six days after spawning, when kept at 29.24 ± 0.42 °C, in a system maintained with recirculated water.(AU)

Neste estudo, avaliamos a possibilidade de obtenção de desovas sucessivas de Astyanax altiparanae mantidos em biotério. Para isso, 104 indivíduos foram distribuídos aleatoriamente em quatro caixas (10 fêmeas e 16 machos em cada) e mantidos a uma temperatura média de 29,24 ± 0,42 °C, sob fotoperíodo natural, por 30 dias. No início do experimento, machos e fêmeas foram induzidos à reprodução com uma dose de extrato de hipófise de carpa (6 mg kg-1). Posteriormente, amostras de ovário (para cálculo do índice gonadosomático e avaliação estereológica) e de sangue (para avaliação de esteroides) foram coletadas de oito fêmeas (duas por caixa) nos seguintes períodos: imediatamente após a indução hormonal (dia 0) e 1, 6, 16 e 30 dias após a desova. No dia 6, as fêmeas desovadas já apresentavam ovários maduros completos similares aos descritos no dia 0. No dia 6 não foram mais observados complexos pós-ovulatórios, indicando que a sua reabsorção foi relativamente rápida. Concomitantemente, os níveis de esteroides aumentaram gradativamente até o dia 6, corroborando uma atividade vitelogênica intensa neste período. Neste estudo demonstramos que fêmeas de A. altiparanae apresentam-se aptas para indução hormonal seis dias após a reprodução, quando mantida a 29,24 ± 0,42 °C, em um sistema mantido com água recirculada.(AU)

Reproductive biology of Poecilia sphenops Valenciennes, 1846 (Cyprinidontiformes: Poeciliidae) at the Emiliano Zapata Reservoir in Morelos, Mexico

Poecilia sphenops es una especie nativa registrada recientemente en la cuenca del Balsas y el río Amacuzac en Morelos (México), en el cual es abundante y ampliamente distribuida. En este estudio se analizaron algunos aspectos de la biología reproductiva de Poecilia sphenops de la presa Emiliano Zapata, ubicada en el centro de México. Los especímenes fueron recolectados de Enero a diciembre de 2006, utilizando una red de 20 m de largo con una luz de malla de 5 mm. Se recolectaron un total de 581 especímenes: 407 hembras (70.0%), 83 machos (14.3%) y 91 individuos indiferenciados (15.7%). El tamaño de los peces osciló de 2 a 96 mm de longitud total y de 0.01 a 13.07 g de peso corporal. La proporción sexual de las hembras con respecto a los machos (4.9:1) se desvió significativamente de la unidad (2= 214.2, p 0.05). La variación mensual de los índices gonadosomático, hepatosomático y del desarrollo de los estadios de los ovarios, mostraron que la época de desove de P. sphenops se llevó a cabo entre julio y octubre, durante la época de lluvias. Otro pico de reproducción fue registrado en Febrero. La talla más grande registrada para los machos y para las hembras fue de 96 mm y 83 mm, respectivamente.(AU)

Poecilia sphenops is a native species recently recorded in the Balsas basin and the Amacuzac River in Morelos (Mexico), in which it is abundant and widely distributed. This study analyzed some aspects of the reproductive biology of Poecilia sphenops from the Emiliano Zapata Reservoir, in Central Mexico. Specimens were collected using a 20 m-long seine with a 5 mm mesh size, from January to December 2006. A total of 581 specimens were collected: 407 females (70.0%), 83 males (14.3%) and 91 individuals with no differentiated sex (15.7%). Fish ranged from 20 to 96 mm in total length and 0.01 to 13.07 g in body weight. The female to male sex ratio (4.9:1) deviated significantly from the unity (2= 214.2, p 0.05). Monthly variations in gonadosomatic (GSI) and hepatosomatic (HSI) indexes and ovarian development stages showed that P. sphenops spawning season occurred between July and October, concurring with the rainy season. Another reproduction peak was registered in February. The largest length registered for males and females was 96 mm and 83 mm, respectively.(AU)

Gossypol promotes the degeneration of chicken ovarian follicles in vitro

Gossypol, a phenolic compound produced by the pigment glands of cotton, is known to affect male reproduction. In females, exposure to gossypol has been associated with interference with the estrous cycle and embryo development. In laying hens fed cottonseed, gossypol was found to reduce egg production and weight and to cause discoloration of the egg yolk and/or albumen. It is probable that gossypol directly affects ovarian follicles, but this has not been confirmed experimentally yet. Thus, the aim of the present study was to determine if gossypol affected cultivated ovarian follicles of the chicken. Ovarian follicles of adult female chickens were cultivated with different concentrations of gossypol (0, 5, 10 and 20 g/mL) and classified according to the stage of development as primordial, transitional, primary, secondary or antral, and as viable or atretic. The percentages of viable and atretic follicles in the ovaries cultivated for 24 hours in the presence of gossypol were significantly different from those of the controls for all types of follicles except for secondary follicles, but in all types after cultivation for 7 days. The percentage of viable follicles was higher than that of atretic follicles in ovaries cultivated without gossypol. In contrast, ovaries cultivated with gossypol showed a predominance of atretic follicles. Gossypol increased the proportion of atretic follicles at all stages of development in cultivated chicken ovaries. Thus, gossypol may affect ovarian follicular viability and maturation, which might interfere with female fertility.

Gossypol promotes the degeneration of chicken ovarian follicles in vitro

Gossypol, a phenolic compound produced by the pigment glands of cotton, is known to affect male reproduction. In females, exposure to gossypol has been associated with interference with the estrous cycle and embryo development. In laying hens fed cottonseed, gossypol was found to reduce egg production and weight and to cause discoloration of the egg yolk and/or albumen. It is probable that gossypol directly affects ovarian follicles, but this has not been confirmed experimentally yet. Thus, the aim of the present study was to determine if gossypol affected cultivated ovarian follicles of the chicken. Ovarian follicles of adult female chickens were cultivated with different concentrations of gossypol (0, 5, 10 and 20 g/mL) and classified according to the stage of development as primordial, transitional, primary, secondary or antral, and as viable or atretic. The percentages of viable and atretic follicles in the ovaries cultivated for 24 hours in the presence of gossypol were significantly different from those of the controls for all types of follicles except for secondary follicles, but in all types after cultivation for 7 days. The percentage of viable follicles was higher than that of atretic follicles in ovaries cultivated without gossypol. In contrast, ovaries cultivated with gossypol showed a predominance of atretic follicles. Gossypol increased the proportion of atretic follicles at all stages of development in cultivated chicken ovaries. Thus, gossypol may affect ovarian follicular viability and maturation, which might interfere with female fertility.(AU)

Ovum pick-up technique in recently weaned ewe lambs subjected to ovarian stimulation

Background: The purpose of this study was to evaluate the effectiveness and possible complications of the laparoscopic ovum pick-up (LOPU) technique and to optimize ovarian stimulation in recently weaned ewe lambs.Materials, Methods & Results: Thirty-six healthy lambs, aging 4-8 weeks, were used in this study and divided into six different groups of six animals. Intravaginal implants of medroxyprogesterone were used for follicular wave induction, and parenteral equine chorionic gonadotropin (eCG) and follicle stimulating hormone (FSH) were administered for ovarian stimulation. Ewes from group GCN did not receive any treatment. In group GCI, the animals received only intravaginal implants. For other groups, ovarian stimulation was carried out as follows: in Group G80U, ewes were treated with a single dose of 80 mg of FSHp; in Group G80M, ewes received 4 administrations of 20 mg FSH, in Group G160U, they were treated with a single dose of 160 mg FSH; and in Group G160M they received 4 administrations of 40 mg FSH). Quantitative and qualitative assessment of retrieved oocytes were carried out after LOPU. In vitro maturation (IVM) of oocytes was also quantitative and qualitatively analyzed. Surgical procedure was divided into 6 stages and overall and stage surgical times were assessed. Post-operative pain and plasma fibrinogen were also assessed. The mean overall surgical time...(AU)

Ovum pick-up technique in recently weaned ewe lambs subjected to ovarian stimulation

Background: The purpose of this study was to evaluate the effectiveness and possible complications of the laparoscopic ovum pick-up (LOPU) technique and to optimize ovarian stimulation in recently weaned ewe lambs.Materials, Methods & Results: Thirty-six healthy lambs, aging 4-8 weeks, were used in this study and divided into six different groups of six animals. Intravaginal implants of medroxyprogesterone were used for follicular wave induction, and parenteral equine chorionic gonadotropin (eCG) and follicle stimulating hormone (FSH) were administered for ovarian stimulation. Ewes from group GCN did not receive any treatment. In group GCI, the animals received only intravaginal implants. For other groups, ovarian stimulation was carried out as follows: in Group G80U, ewes were treated with a single dose of 80 mg of FSHp; in Group G80M, ewes received 4 administrations of 20 mg FSH, in Group G160U, they were treated with a single dose of 160 mg FSH; and in Group G160M they received 4 administrations of 40 mg FSH). Quantitative and qualitative assessment of retrieved oocytes were carried out after LOPU. In vitro maturation (IVM) of oocytes was also quantitative and qualitatively analyzed. Surgical procedure was divided into 6 stages and overall and stage surgical times were assessed. Post-operative pain and plasma fibrinogen were also assessed. The mean overall surgical time...

Indução à maturação final e ovulação de lambari (Astyanax altiparanae) com análogos do hormônio liberador de gonadotropinas (GnRH)

A presente tese foi dividida em três capítulos, no primeiro é apresentada uma revisão bibliográfica dos temas relacionados à tese, os outros dois capítulos são manuscritos gerados a partir dos experimentos realizados durante o doutorado. No manuscrito I (capítulo II) avaliamos o desempenho reprodutivo de fêmeas de lambari (Astyanax altiparanae) usando diferentes protocolos de reprodução em cativeiro, como a administração de análogo do hormônio liberador de gonadotrofina de salmão (sGnRHa) e extrato de pituitária de carpa (CPE), bem como sem o uso de terapia hormonal. Foram realizados dois experimentos consecutivos com machos e fêmeas maduros de lambari (seis meses de idade) usando dose única (Exp. 1) ou fracionada (10% + 90% - intervalo de 12h) (Exp. 2). No Exp. 1, seis doses de sGnRHa (variando de 1 a 160 g kg -1 ) foram aplicadas em três repetições (cinco fêmeas e 10 machos cada); no Exp. 2, três doses de sGnRHa (10, 100 e 1000 g kg -1 ) foram aplicadas em quatro repetições (cinco fêmeas e 10 machos cada). Em ambos os experimentos, 6 mg de CPE kg -1 e solução salina foram usados como controles positivo e negativo, respectivamente. A quantificação de 17-20-dihidroxi-4- pregnen-3-ona (17,20-P) e níveis plasmáticos de prostaglandina F2 e avaliações histológicas ovarianas foram introduzidas no Exp. 2 separando fêmeas desovadas e não desovadas. Usando uma única dose, a taxa de desova foi baixa e semelhante entre todos os grupos (de 0 a 20%). Usando doses fracionadas, a taxa de desova de CPE (60%) foi maior do que todos os outros grupos (de 10 a 25%), com exceção da dose mais alta de sGnRHa (40%). A desova e elevação dos níveis de 17,20-P ocorreram em algumas fêmeas do controle negativo (Exp. 2). Portanto, a terapia com doses fracionadas de CPE melhorou a ovulação de lambari, mas não foi condicional para a obtenção da ovulação. Apenas as fêmeas não desovadas induzidas com doses fracionadas de CPE, mas não com sGnRHa e nem no controle negativo, atingiram a maturação final. Além disso, a desova nos grupos com sGnRHa ocorreu em uma extensão semelhante à do controle negativo e os grupos tratados com sGnRHa não mostraram qualquer resposta dose-dependente considerando todas variáveis avaliadas. Portanto, é possível que a desova nos grupos sGnRHa se deva apenas ao agrupamento de peixes, semelhante ao controle negativo. Em conclusão, a dose fracionada de CPE foi o único tratamento que provocou maturação final em todas as fêmeas tratadas e um aumento significativo no desempenho reprodutivo em comparação com todos os outros tratamentos. No manuscrito II (capítulo III) avaliamos o efeito do análogo do hormônio liberador do hormônio luteinizante (LHRHa) com e sem domperidona no desempenho reprodutivo de lambari e na liberação de 17,20-P e PGF 2 , bem como avaliação histológica das estruturas ovarianas em dois experimentos independentes e consecutivos. No primeiro experimento cinco doses de LHRHa (20, 60, 180, 540 e 1620 g kg -1 ) foram testadas com três repetições cada, enquanto no segundo experimento a dose de 180 g kg -1 foi testada em combinação com 20 mg kg -1 de domperidona (D) com quatro repetições. Em ambos os experimentos utilizamos solução salina 0,9% como controle negativo e 6 mg de CPE kg -1 como controle positivo e as fêmeas de todos os grupos receberam duas injeções (10% + 90% - intervalo de 12h). As doses testadas de LHRHa não apresentram resultados superiores aos do controle negativo. Associando o LHRHa com D não foram obtidos resultados superiores ao LHRHa sem associação, sugerindo que a dopamina parece não apresentar um papel no controle neuroendócrino da reprodução dessa espécie ou que este antidopaminérgico não é o mais indicado para o lambari. O grupo tratado com CPE foi o único com melhor desempenho que o controle negativo, indicando que o CPE foi a melhor terapia hormonal para induzir a desova em lambari (entre os testados por nós). Houve uma diminuição nas taxas de fertilização e eclosão que coincidiram com as duas doses mais altas de LHRH (540 e 1620 g kg -1 ), sugerindo que essas doses podem ter causado uma superestimulação da hipófise na produção de LH, a qual pode ter afetado a qualidade dos ovos.

The present thesis was divided into three chapters, in the first one a review of the themes related to the thesis is presented, the other two chapters are manuscripts prepared from the experiments carried out during the doctorate. In the manuscript I (chapter II) we evaluated lambari (Astyanax altiparanae) reproductive performance using different protocols of reproduction in captivity, such as the administration of analogue of salmon gonadotropin- releasing hormone (sGnRHa) and carp pituitary extract (CPE) as well as without the use of hormonal therapy. We performed two consecutive experiments with mature lambari males and females (six months old) using single (Exp. 1) or fractioned doses (10% + 90% - 12h interval) (Exp. 2). In Exp. 1, six sGnRHa doses (ranging from 1 to 160 g kg -1 ) were applied in three replicates (five females and 10 males each); in Exp. 2, three sGnRHa doses (10, 100 and 1000 g kg -1 ) were applied in four replicates (five females and 10 males each). In both experiments 6 mg of CPE kg -1 and saline solution were used as positive and negative controls, respectively. Quantification of 17-20-dihydroxy-4-pregnen-3-one (17,20-P) and prostaglandin F 2 plasma levels and ovarian histological evaluations were introduced in Exp. 2 via the separation of spawned and unspawned females. Using a single dose, the spawning rate was low and similar between all groups (from 0 to 20%). Using fractioned doses, the spawning rate of CPE (60%) was higher than all other groups (from 10 to 25%), with the exception of the highest sGnRHa dose (40%). Spawning and elevation of 17,20-P levels occurred in some females of the negative control (Exp. 2). Therefore, only CPE fractioned doses therapy improved lambari ovulation but were not conditional for obtaining ovulation. Only unspawned females treated with fractioned CPE doses, but neither sGnRHa nor negative control, attained final oocyte maturation.In addition, spawning in sGnRHa groups occurred in a similar extent as in negative control and sGnRHa-treated groups did not show any dose dependent response considering all variables measured. Therefore, it was possible that spawning in sGnRHa groups were just due to grouping of fish, similar to negative control. In conclusion, the fractioned dose of CPE was the only treatment that provoked final oocyte maturation in all treated females and a significant enhance in reproductive performance comparing to all other treatments. In the manuscript II (chapter III) we evaluated the effect of luteinizing hormone-releasing hormone ethylamide analogue (LHRHa) with and without domperidone on reproductive performance of lambari and the quantification of plasma levels of 17,20-P and PGF 2 , as well as histological evaluation of ovarian structures in two independent and consecutive experiments. In the first, five doses of LHRHa (20, 60, 180, 540 and 1620 g kg -1 ) were tested with three replicates each, while in the second the dose of 180 g kg -1 was tested in combination with 20 mg kg -1 domperidone (D) with four replicates. In both experiments, we used 0.9% saline as a negative control and 6 mg CPE kg -1 as a positive control and the females of all groups received two injections (10%; and 90% after 12 h). The doses we tested of LHRHa did not show results superior to those of the negative control. When associating LHRHa with D, we did not obtain results superior to LHRHa without association, suggesting that dopamine does not seem to play a role in the neuroendocrine control of the reproduction of this species or that this antidopaminergic is not the most suitable for lambari. The group treated with CPE was the only one with better performance than the negative control, indicating that CPE was the best hormonal therapy to induce spawning in lambari (among those tested by us). There was a decrease in fertilization and hatching rates that coincided with the two highest doses of LHRH (540 and 1620 g kg -1 ), suggesting that these doses may have caused an overstimulation of the pituitary in the production of LH, which may have affected egg quality.

Desenvolvimento folicular e desempenho produtivo no início do ciclo de postura em duas raças de poedeiras / Follicular development and productive performance at the onset of production in two egg-laying breeds

Avaliaram-se as características reprodutivas de duas raças puras de poedeiras semipesadas. Foram utilizadas 800 fêmeas, 400 da raça Plymouth Rock White (PRW) e 400 da raça Plymouth Rock Barred (PRB) no período compreendido entre a 16ª e a 24ª semanas de idade, quando todas as aves tiveram o mesmo manejo e receberam água e ração ad libitum. Semanalmente, foram mensurados os parâmetros peso corporal, consumo alimentar, taxa de postura, conversão alimentar, peso dos ovos, peso de oviduto e número de folículos ovarianos. Foi utilizado um delineamento inteiramente casualizado (DIC) com dois tratamentos (PRW e PRB) e cinco repetições de oitenta aves cada, sendo que os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste "T" de Student a 5% de significância. Observou-se que na 24ª semana de idade as aves da raça PRW apresentaram uma maior taxa de postura (P=0,006) e melhor conversão alimentar (P=0,020), comparado às aves da raça PRB. As aves PRB apresentaram maior peso corporal, comparado ao peso das PRW, entretanto, o peso do oviduto em relação ao peso corporal na 24ª semana e o número de folículos grandes amarelos na 20ª semana de idade foram maiores nas aves da raça PRW, comparado com as aves da raça PRB (P=0,029). Aves poedeiras da raça PRW são mais eficientes nos parâmetros produtivos e apresentam o desenvolvimento do aparelho reprodutivo mais precoce em relação às aves da PRB.(AU)

It was evaluated the reproductive traits of two pure breed laying hens. There were used 800 females, 400 White Plymouth Rock (PRW) and 400 Barred Plymouth Rock pullets, from 16 to 24 week of age. Pullets were managed in the same manner and received water and feed ad libitum. Body weight, feed intake, hen-day egg production, feed conversion, egg weight, oviduct weight and number of ovarian follicles were weekly measured. It was used a completely randomized design with two breeds (PRW and PRB) and five replicates of 80 pullets. The data were submitted to ANOVA and means compared by Student's T test 5% of significance. At 24 weeks of age the PRW pullets had a higher egg production (P=0.006) and better feed conversion (P=0.020) than the PRBs. The PRBs presented higher body weight than the PRWs, however, the number of large yellow follicles at 20 weeks, and the relative oviduct weight at 24 weeks of age were greater in the PRW pullets (P=0.029). The PRW pullets were more efficient in the production parameters and were more precocious in the development of the reproductive tract than PRB pullets.(AU)

CULTIVO IN VITRO DE OÓCITOS MAMÍFEROS: EFEITO DA TEMPERATURA DE TRANSPORTE DE OVÁRIO, DO SISTEMA DE CULTIVO FOLICULAR E DE INIBIDORES DA RETOMADA DA MEIOSE

Os objetivos da presente tese foram: 1) Determinar o efeito da temperatura de transporte (4 vs 33 ºC) sobre a morfologia, crescimento folicular, viabilidade, maturação oocitaria, e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) de folículos pré-antrais e antrais iniciais caprinos isolados e cultivados por 18 dias (Fase I); 2) Avaliar as taxas de sobrevivência e ativação de folículos primordiais caprinos após 7 dias de cultivo in vitro em um sistema tridimensional na ausência (folículos primordiais isolados inclusos em Alginato - 0,8%) ou na presença de tecido ovariano (Fase II); 3) Avaliar as taxas de sobrevivência, ativação e crescimento folicular após 7 dias de cultivo in vitro de fragmentos ovarianos babuínos (Fase III) inclusos em diferentes matrizes (Alginato - 1% ou polyethyleneglycol-vinyl sulfone (PEG-VS) - 5%); 4) Investigar o efeito de diferentes concentrações de Cilostamida (10 e 20 M) e tempos de exposição (6 e 12 horas) durante a MIV de oócitos bovinos e caprinos (Fase IV). Na Fase I, os ovários caprinos foram transportados individualmente em MEM-HEPES a 4 ou 33 °C. Posteriormente, os folículos foram cultivados in vitro por 18 dias e os complexos cumulus-oócito (CCO) maturados por 32 horas. Na Fase II, os folículos primordiais caprinos inclusos em Alginato (10 folículos/gota), ou envoltos em tecido ovariano (in situ) encapsulado ou não em Alginato, foram cultivados por 7 dias. Na Fase III, os folículos babuínos previamente criopreservados foram cultivados por 10 dias incluso em tecido ovariano (in situ), na presença ou ausência de matrizes extracelulares (PEG-VS vs Alginato) e de FSH. Por fim, na Fase IV, CCOs caprinos e bovinos foram cultivados por 30 horas, iniciando com a adição da Cilostamida (10 ou 20 M) e/ou parede folicular por 6 ou 12 horas durante a pré-maturação in vitro (PMIV) antes da MIV (24 ou 18h). O melhor resultado para produção de oócitos totalmente crescidos e retomada meiótica foi obtido utilizando baixa (4 °C) para folículos pré-antrais e alta (33 °C) para folículos antrais iniciais (Fase I). Folículos primordiais caprinos isolados e encapsulados em Alginato apresentaram maiores percentuais de ativação folicular quando comparado aos demais tratamentos (Fase II). Na Fase III, a adição de FSH ao meio de cultivo no tratamento com matrizes (PEG-VS e Alginato) promoveu uma melhora na sobrevivência dos folículos pré-antrais babuínos inclusos em tecido ovariano após 10 dias cultivo in vitro. Na Fase IV, a combinação da concentração/tempo de exposição à Cilostamida durante a PMIV retardou a progressão meiótica apenas na espécie bovina após 6 e 12 horas de cultivo. Como conclusão, a temperatura de transporte afetou diferencialmente o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais e folículos antrais iniciais caprinos (Fase I); cultivo de folículos primordiais caprinos isolados e inclusos em Alginato permitiu uma melhor taxa de ativação folicular (Fase II). Em babuínos, utilização de matrizes extracelulares na presença de FSH melhorou a sobrevivência folicular após 10 dias de cultivo in vitro (Fase III). Por fim, na Fase IV, a Cilostamida retardou de forma concentração dependente a retomada da meiose somente na espécie bovina.

The objectives of this thesis were: 1) To determine the effect of transport temperature (4 vs 33ºC) on morphology, follicular growth, viability and oocyte maturation, and production of reactive oxygen species (ROS) of preantral and early antral follicles goats for 18 days in vitro culture (Phase I); 2) to evaluate follicular survival and activation rates after 7 days of in vitro culture in a three-dimensional system in the absence (isolated primordial follicles and included in Alginate - 0.8%) or in the presence of ovarian tissue (Phase II); 3) To investigate the survival, activation and follicular growth after 7 days of in vitro culture of ovarian fragments of baboons (Phase III) included in different matrices (Alginate - 1% or poly(ethylene glycol)-vinyl sulfone (PEG) - 5%); 4) Investigate the effect of different concentrations of Cilostamida (10 and 20 M) and exposure times (6 and 12 hours) during IVF of bovine and goat oocytes (Phase IV). In Phase I, goat ovaries were individually transported in MEM-HEPES at 4 or 33 ° C. Subsequently, the follicles were cultured in vitro for 18 days and cumulus-oocyte (CCO) complexes matured for 32 hours. In Phase II, the primordial goat follicles included in Alginate (10 follicles / drop), or wrapped in ovarian tissue (in situ) encapsulated or not in Alginate, were cultured for 7 days. In Phase III, pre-cryopreserved baboon follicles were cultured for 10 days in ovarian tissue (in situ), in the presence or absence of extracellular matrices (PEG-VS vs. Alginate) and FSH. Finally, in the Phase IV, the goat and cattle COCs were cultured for 30 hours, starting with in vitro pre-maturation (IVPM) for 6 or 12 hours before IVM (24 or 18h). The best result for the production of fully-grown oocytes and meiotic resumption was obtained using low (4 ° C) for preantral follicles and high (33 ° C) for initial antral follicles (Phase I). Phase II results showed that caprine primordial follicles isolated and encapsulated in Alginate presented satisfactory rates of survival and higher percentages of follicular activation when compared to the other treatments. In the Phase III, treatments containing medium supplemented with FSH associated and extracellular matrices (Alginate and PEG-VS) promoted an improvement in the survival of baboon preantral follicles included in the ovarian tissue after 10 days in vitro culture. In the Phase IV, the combination of concentration/exposure time to cilostamide during IVPM delayed the meiotic progression only in the bovine species after 6 and 12 hours of culture. In conclusion, the transport temperature differentially affected the in vitro development of preantral follicles and initial antral follicles (Phase I); the in vitro culture of isolated goat primordial follicles enclosed in Alginate allowed a better rate of follicular activation (Phase II); In baboons, the use of extracellular matrices in the presence of FSH improved follicular survival after 10 days of in vitro culture (Phase III). Finally, in the Phase IV, the cilostamide delayed in a concentration/dependent manner the meiotic resumption in bovine species only.

ASPECTOS REPRODUTIVOS DE CAMARÃO PENEÍDOS CAPTURADOS EM LUCENA, LITORAL NORTE DA PARAÍBA, BRASIL

Este estudo descreve o desenvolvimento das células reprodutivas e estágios de desenvolvimento ovariano, bem como identifica os componentes não germinativos, dos camarões Litopenaeus schmitti e Farfantepenaeus subtilis capturados no litoral norte da Paraíba, Brasil. Além disso, o estudo investiga a dinâmica reprodutiva do camarão Litopenaeus schmitti na área de estudo. Foram extraídos ovários de femeas de L. schmitti (n=176) e F. subtilis (n=162), os quais foram submetidos à análise histológica. Para o estudo de dinâmica reprodutiva, espécimes de Litopenaeus schmitti foram coletados mensalmente de dezembro de 2016 a novembro de 2017 através da pesca artesanal utilizando rede de arrasto de praia no Município de Lucena-PB. As análises macroscópicas determinaram quatro estágios de desenvolvimento da gônada a partir da coloração e grau de turgidez do ovário fresco. As observações microscópicas permitiram observar seis estágios de desenvolvimento celular: oogônias, ovócitos pré-vitelogênico, ovócito em vitelogênese inicial, ovócito em vitelogênese avançada, ovócito maturo e ovócito atrésico. A partir disto, foram definidos cinco estágios de desenvolvimento gonadal: imaturo, em desenvolvimento inicial, em desenvolvimento avançado, maturo e desovado. Identificamos também componentes não germinativos: células foliculares, vasos sanguíneos e parede gonadal. Além das células germinativas, as células foliculares se mostraram estruturas fundamentais para a descrição e distinção dos estágios de desenvolvimento gonadal. Quanto à dinâmica reprodutiva do camarão-branco L. schmitti, foram coletados 1.710 animais, onde a proporção de machos (43,51%) foi significativamente menor do que das fêmeas (56,49%), correspondendo a proporção sexual de 1:1,3. O comprimento médio de primeira maturação ovariana foi estimado em 2,20 cm de comprimento do cefalotórax. O índice gonadossomático (IGS), juntamente com a distribuição dos estádios maturacionais, sugerem que as fêmeas apresentam ciclo reprodutivo de setembro até junho, com maior atividade reprodutiva nos meses de novembro e fevereiro. A temperatura, salinidade e pluviosidade parecem ser fatores que influenciam na atividade reprodutiva na região de Lucena, litoral norte da Paraíba, Brasil.

This study describes the development of reproductive cells and ovarian development stages of the shrimp species Litopenaeus schmitti and Farfantepenaeus subtilis caught on the northern coast of Paraiba, Brazil. In addition, the study investigates the reproductive dynamics of the shrimp Litopenaeus schmitti along the study area. Female ovaries were extracted from L. schmitti (n = 176) and F. subtilis (n = 162), which were submitted to histological analysis. To characterize Litopenaeus schmitti reproductive dynamics, specimens were collected monthly from December 2016 to November 2017 through artisanal fishing using a beach seine net in Lucena-PB. Based on the color and degree of turgidity of the fresh ovary, the macroscopic observation allowed to classify four ovarian development stages. The microscopic observations allowed to identify six stages of cellular development: oogonia, pre-vitellogenic oocytes, initial vitellogenesis oocytes, advanced vitellogenesis oocytes, mature oocytes and atretic oocytes. From this, five stages of gonadal development were defined: immature, early development, advanced development, mature and spawned. We also identified non-germinative components: follicular cells, blood vessels and gonadal wall. In addition to germ cells, follicular cells were fundamental structures for the description and distinction of stages of gonadal development. In total, 1.710 specimens of L. schmitti were collected, where the quantity of males (43.51%) was significantly lower than the quantity of females 56.49%), corresponding to sexual ratio of 1: 1.3. The mean length of first ovarian maturation was estimated in 2.20cm of cephalothorax. The gonadosomatic index (IGS) coupled with the maturational stages distribution suggest that females present a reproductive cycle from September to June, with higher reproductive activity in November and February. Temperature, salinity and rainfall appear to be factors that influence reproductive activity in the region of Lucena, north coast of Paraíba, Brazil.

EFICIÊNCIA DO FSH NO CULTIVO in vitro BIDIMENSIONAL EM ÁGAR DE FOLÍCULOS OVARIANOS PRÉ-ANTRAIS DA ESPÉCIE BOVINA

Com o objetivo de aumentar o ganho genético e melhorar a qualidade do rebanho brasileiro, faz-se necessário o uso de biotécnicas da reprodução. Cerca de 99,9% dos folículos que compõe a reserva folicular ovariana não chegam ao seu estágio de maturação final, estes sofrem um processo denominado atresia, havendo grande perda folicular. Com o objetivo de garantir um melhor aproveitamento dos folículos pré-antrais, o cultivo in vitro destes folículos permite seu desenvolvimento, crescimento e possivelmente seu posterior uso. Uma vez otimizado, esta técnica permitie a obtenção da ovulação in vitro, além da produção de embriões a partir desses oócitos ovulados. O meio de cultivo tem grande influencia na ativação e desenvolvimento folicular, assim como o sistema de cultivo aplicado. O hormônio folículo estimulante (FSH) tem papel importante no crescimento e maturação folicular, agindo nas células da granulosa dos folículos que compõe a reserva folicular. Assim como o sistema bidimensional, promove um ambiente semelhante ao ovário, mimetizando sua arquitetura. Dessa forma, o objetivo do presente estudo, ao combinar um sistema de cultivo bidimensional e a suplementação com FSH, haja um desenvolvimento folicular superior ao material cultivado em apenas meio base. Foram utilizados ovários de vacas cíclicas (n= 6), retirados os tecidos circundantes e os ligamentos, e separados os pares de cada animal. Em seguida, foram feitos fragmentos de 3X3X3 mm no córtex ovariano. Para cada par de ovário, foi selecionado um fragmento aleatório e imediatamente foi fixado em Bouin representando assim, o grupo controle não cultivado, D0. Os fragmentos restantes (n= 8 fragmentos, de cada animal) foram transportados até o laboratório e cultivados individualmente nos diferentes tratamentos em alíquotas de 1 mL de meio de cultivo em placas de cultivo de 24 poços em estufa a 38,5ºC, numa atmosfera de 5 % de CO2 em ar e umidade saturada. O meio de cultivo controle constituiu de MEM, 0,23 mM de piruvato, 2 mM glutamina, 2 mM hipoxantina, 1,25 mg/mL de albumina sérica bovina (BSA Gibco BRL, Rockville, MD, USA), 20 UI/mL de penicilina e 200 mg/mL de estreptomicina. Para os tratamentos, o meio MEM+ foi suplementado com diferentes concentrações (50, 100 ou 200 ng/mL) de FSH (Folltropin®, Bioniche Canadá Inc, Ontário, Canadá). Oito fragmentos, do córtex ovariano de cada animal, foram cultivados nos meios testado por seis (D6) ou doze (D12) dias. A cada intervalo de dois dias, o meio de cultivo foi substituído por meio fresco. Os folículos pré-antrais foram classificados de acordo com o estágio de desenvolvimento (primordial, primário, secundário) e quanto à morfologia (normal ou degenerado). Os dados analisados foram submetidos à ANOVA e teste de Tukey (p0,05). No estudo realizado, foi possível observar uma diferença significativa na proporção de folículos ovarianos primordiais e em desenvolvimento, sugerindo assim a provável ocorrência de uma ativação destes folículos cultivados in vitro. A concentração que melhor apresenta condições para o desenvolvimento folicular e garantiu a manutenção da integridade folicular foi 50 g/ml de FSH em 12 dias de cultivo.

With the objective of increasing the genetic gain and improving the quality of the Brazilian herd, it is necessary to use biotechniques of the reproduction. Approximately 99.9% of the factories that make up the ovarian follicular reserve not reaching their final stage of maturation, they undergo a process called atresia, with great follicular loss. In order to guarantee a better utilization of the preantral follicles, the in vitro culture of these follicles allows its development, growth and possibly its later use. Once optimized, this technique allows in vitro ovulation to be obtained, in addition to the production of embryos from ovulated oocytes. The culture medium has great influence on follicular activation and development, as the culture system applied. The follicle stimulating hormone (FSH) plays an important role in follicular growth and maturation, acting on the granulosa cells of the plants that make up a follicular reserve. Just like the two-dimensional system, you promote an environment at your fingertips, mimicking your architecture. Thus, the objective of the present study, when combining a two-dimensional culture system and FSH supplementation, has a higher follicular development than the material grown in only the base medium. Ovaries from cyclic cows (n = 6) were used, the surrounding tissues and ligaments were removed, and pairs separated from each animal. In., Fragments of 3X3X3 mm were made in the ovarian cortex. For each ovary pair, a random fragment was selected and related to Bouin, thus representing the uncultured control group, D0. The remaining fragments (n = 8 fragments, from each animal) were transported to the laboratory and individually cultured in the different treatments in 1 ml aliquots of culture medium in 24-well culture plates in an oven at 38.5 ° C in an atmosphere of 5% CO2 in air and saturated humidity. The control culture medium comprised of MEM, 0.23 mM pyruvate, 2 mM glutamine, 2 mM hypoxanthine, 1.25 mg / mL bovine serum albumin (BSA Gibco BRL, Rockville, MD, USA), 20 IU / ml penicillin and 200 mg / ml streptomycin. For the treatments, the MEM + medium was supplemented with different concentrations (50, 100 or 200 ng / mL) of FSH (Folltropin®, Bioniche Canada Inc, Ontario, Canada). Eight fragments of the ovarian cortex of each animal were cultured on media tested for six (D6) or twelve (D12) days. At each interval of two days, the culture medium was replaced with fresh medium. Primates, primary, secondary and morphology (normal or degenerate). The analyzed data were submitted to ANOVA and Tukey test (p0.05). No study was carried out, it was seen in a very important way in the proportion of primordial and developing ovarian leaflets, thus suggesting a probable occurrence of an activation of these leaflets grown in vitro. The concentration that best presents conditions for the follicular development and guaranteed the maintenance of the follicular integrity to 50 g / ml of FSH in 12 days of culture

Efeito da somatotropina bovina recombinante (RBST) sobre a produção e maturação in vitro de oócitos bovinos da raça sindi

A somatotropina bovina recombinante (rbST) tem sido utilizada para aumentar o número de folículos ovarianos bovinos, mas não há relatos da ação desse hormônio em vacas Sindi. A fim de avaliar o efeito de diferentes doses da rbST sobre a dinâmica folicular, produção in vivo e maturação in vitro de oócitos, 20 vacas Sindi, alocadas na sede da Embrapa Semiárido em Petrolina-PE, submetidas a um regime intensivo de produção, foram divididas aleatória e homogeneamente em três grupos, recebendo, no Dia Zero (D0), um dispositivo de progesterona intravaginal, e a administração intramuscular (i.m.) de estradiol e PGF2. Também no D0, os animais receberam, na fossa ísquiorretal (s.c.), 2 mL de solução salina (Grupo Controle, n = 6), 250 (Grupo rbST 250, n = 7) ou 500 mg de rbST (Grupo rbST 500, n = 7). Cinco dias depois, o dispositivo foi retirado, e realizou-se a Ovum pick up. Os complexos cumulus-oócitos (CCOs) recuperados foram selecionados e classificados, sendo os de graus I, II e III levados à maturação in vitro, por 24 horas, em estufa, a 38,5ºC, com 5% de CO2. Os dados de contagem foram avaliados via GLM e comparados pelo procedimento glht, e os dados em porcentagem foram submetidos ao Teste de Qui-quadrado. Foi utilizado o programa estatístico R, onde as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. Os grupos rbST 250 e rbST 500 foram maiores (P<0,05) que o grupo controle com relação ao número de folículos de grandes visualizados e aspirados (0,42 ± 0,20 para os dois grupos nos dois parâmetros, contra 0 do grupo Controle). Não houve diferença (P>0,05) entre os grupos quanto ao: número de oócitos recuperados, taxa de maturação, graus de expansão das células do cumulus e retração nuclear. O grupo rbST 500 foi superior (P<0,05) na porcentagem de CCOs de grau II (88,13%), quando comparado aos grupos Controle (53,57%) e rbST 250 (37,77%), que, por sua vez, foram superiores (P<0,05) na porcentagem de oócitos de grau IV (32,14% e 46,44%, respectivamente) quando comparados ao grupo rbST500 (8,47%). O grupo rbST 500 apresentou maior (P<0,05) porcentagem de oócitos viáveis (91,52%) do que os grupos Controle (67,85%) e rbST 250 (53,33%). A rbST aumenta o número de folículos grandes e 500 mg de rbST aumenta a porcentagem de oócitos viáveis em vacas Sindi, contudo, não influencia a maturação oocitária.

Recombinant bovine somatotropin (rbST) has been used to increase the number of bovine ovarian follicles, but there are no reports of action of this hormone in Sindi cows. In order to evaluate the effect of different doses of rbST on the follicular dynamics, in vivo production and in vitro maturation of oocytes, 20 Sindi cows, housed at the headquarters of Embrapa Semiarido in Petrolina-PE, under intensive production randomly and homogeneously divided into three groups, receiving an intravaginal progesterone device on Day Zero (D0) and intramuscular (im) administration of estradiol and PGF2. Also in D0, the animals received 2 ml of saline (Control Group, n = 6), 250 (rbST 250 group, n = 7) or 500 mg rbST (rbST 500 n group) in the ischiorectal fossa (sc). = 7). Five days later, the device was removed, and was performed the Ovum pick up. The accumulated cumulus-oocyte (CCO) complexes were selected and classified, being those of grades I, II and III brought to in vitro maturation for 24 hours in a greenhouse at 38.5ºC with 5% CO2. The counting data were assessed via GLM and compared by the glht procedure, and the percentage data were submitted to the Chi-square test. The statistical program R was used, where the differences were considered significant when P<0.05. The rbST 250 and rbST 500 groups were larger (P<0.05) than the control group in relation to the number of large visualized and aspirated follicles (0.42 ± 0.20 for the two groups in the two parameters, against 0 of the group control). There were no differences (P> 0.05) between the groups regarding: number of oocytes recovered, maturation rate, degrees of cumulus cell expansion and nuclear retraction. The rbST 500 group was higher (P<0.05) in the percentage of grade II COCs (88.13%), when compared to the Control (53.57%) and rbST 250 (37.77%) groups, (32.14% and 46.44%, respectively) when compared to the rbST500 group (8.47%). The rbST 500 group presented higher (P <0.05) percentage of viable oocytes (91.52%) than the Control (67.85%) and rbST 250 (53.33%) groups. RbST increases the number of large follicles and 500 mg rbST increases the percentage of viable oocytes in Sindi cows, however, it does not influence oocyte maturation.