Occurrence of Salmonella spp. in fecal samples from foals with and without diarrhea in the state of São Paulo: microbiological diagnosis, antimicrobial susceptibility profile, and molecular detection / Ocorrência de Salmonella spp. em amostras fecais de potros com e sem diarreia no estado de São Paulo: diagnóstico microbiológico, perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos e detecção molecular

ABSTRACT: The present study investigated Salmonella spp. in the feces of 200 foals up to one year of age (100 with clinical signs of diarrhea and 100 without clinical signs of diarrhea). Bacteriological culture, serotyping, antimicrobial susceptibility, and real-time PCR (qPCR SYBR® Green or a TaqMan®) for detecting the invA gene (with and without a selective pre-enrichment step in tetrathionate broth) were performed. Bacterial culture revealed 15% (n=30) of positive animals (21 animals with diarrhea and nine without diarrhea). Among the 30 isolates, 13 different serovars were identified: S. Infantis, S. Minnesota, S. I.4,5,12:i:-; S. Anatum, S. Cerro, S. Oranienburg, S. Braenderup, S. Give, S. Newport, S. IIIb 61:c:z35, S. 109:-:1.5, S. I.4.12:d:-, S. I.6.8:-:-. Multidrug resistance was found in 43.33% (n=13) of the isolates, with one isolate obtained from animals without diarrhea and 12 isolates from animals with diarrhea. All qPCR techniques used in the study classified more samples as positive for Salmonella spp. than the bacterial culture of feces. In addition, all qPCR techniques detected more positive animals in the diarrhea group than in the diarrhea-free group. The results confirm the utility of the qPCR method without the pre-enrichment step in tetrathionate as a rapid test for Salmonella spp. in carrier animals. In animals with clinical signs of diarrhea, it can be combined with bacterial culture (antimicrobial susceptibility testing and serotyping). The isolation of Salmonella spp. in nine animals without diarrhea confirms the importance of asymptomatic carrier animals in the epidemiology of the disease. The multidrug resistance observed highlights the importance of rational antimicrobial use in horses and adopting biosecurity protocols that are efficacious in controlling the spread of infections between animals and zoonotic transmission in farms.

RESUMO: O presente estudo investigou a ocorrência de Salmonella spp. em fezes de 200 potros com até um ano de idade (100 com sinais clínicos de diarreia e 100 sem sinais clínicos de diarreia), utilizando as técnicas de cultivo bacteriológico e PCR em tempo real (qPCR) pelos métodos de corante fluorescente (SYBR® Green) e sonda específica (Taqman®) para a detecção do gene invA com e sem etapa de pré-enriquecimento seletivo em caldo de tetrationato. O cultivo bacteriológico revelou 15% (n=30) de animais positivos (21 animais com diarreia e nove animais sem diarreia). Dentre esses 30 isolados, 13 sorovares diferentes foram identificados: S. Infantis, S. Minnesota, S. I.4,5,12:i:-; S. Anatum, S. Cerro, S. Oranienburg, S. Braenderup, S. Give, S. Newport, S. IIIb 61:c:z35, S. 109:-:1.5, S. I.4.12:d:-, S. I.6.8:-:-. Multirresistência foi constatada em 43,33% (n=13) dos isolados, sendo um isolado obtido de animal sem diarreia e 12 isolados de animais com diarreia. Todas as técnicas de qPCR empregadas no estudo apresentaram maior número de amostras classificadas como positivas para Salmonella spp. comparadas ao cultivo bacteriológico de fezes. Adicionalmente, em todas as técnicas de qPCR houve maior número de animais detectados como positivos no grupo de animais com diarreia em relação aos animais sem diarreia. Os resultados confirmaram a utilidade do método qPCR sem a etapa de pré-enriquecimento em tetrationato, como um teste rápido para detecção de Salmonella spp. em animais portadores ou em animais com sinais clínicos de diarreia. O cultivo bacteriológico deve ser associado para a realização do teste de sensibilidade aos antimicrobianos e sorotipificação. O isolamento de Salmonella spp. em nove animais sem diarreia, confirma a importância dos animais portadores assintomáticos na epidemiologia da doença. A multirresistência observada evidencia a importância do uso racional de antimicrobianos em equinos e a importância da adoção de protocolos de biossegurança que sejam eficazes para controlar a disseminação de infecções entre animais e a transmissão zoonótica nas fazendas.

Real-time PCR quantification and histopathological findings of Mycoplasma hyopneumoniae infection in the lungs of pigs slaughtered in São Luís, Maranhão, Brazil / Quantificação por PCR em tempo real e achados histopatológicos da infecção por Mycoplasma hyopneumoniae em pulmão de suínos abatidos na cidade de São Luís, Maranhão, Brasil

ABSTRACT: Porcine enzootic pneumonia (PES), mainly caused by the bacteria Mycoplasma hyopneumoniae, is the main cause of respiratory problems in pigs. Infection by M. hyopneumoniae leads to production losses and the predisposition of affected animals to secondary infections, which may result in the condemnation of carcasses and organs due to lung lesions at the time of slaughter. The objective of the research was to evaluate the infection by M. hyopneumoniae in pigs submitted to slaughter in São Luís Island/MA, using molecular and histopathological diagnostic methods. One hundred fifty lung samples were collected from inspected (n=65) and non-inspected (n=85) slaughter pigs on São Luís Island, Maranhão, from July 2019 to August 2021. Of the 150 DNA samples collected, 121 showed an amplified product for Cyt B in the PCR assay. Thus, 121 samples were submitted to qPCR of M. hyopneumoniae, of which 44 (36.36%) showed positive results. The mean amount of bacterial load ranged from 1.20 × 101 to 7.20 × 104, with a mean of 1.73 × 104 copies. Of the reagent samples, 81.81% (36 samples) were obtained from non-inspected slaughter, while 18.18% (8 samples) were obtained from slaughterhouses. In the histopathological analysis, 44 positive qPCR samples were evaluated, of which 28 (63.63%) presented results compatible with the main inflammatory process associated with the presence of M. hyopneumoniae, that is, bronchial-associated lymphoid tissue hyperplasia (BALT). Three samples that showed the highest bacterial load (qPCR: 5.63 × 10³, 2.19 × 104 and 7.23 × 104) showed more evident lesions in this study. The microscopic findings associated with the quantifications indicated a relationship between the amount of bacterial load and the presence of microscopic lesions; higher bacterial load in lung tissue is associated with increased histopathologic staining for BALT hyperplasia. In conclusion, the results point to the circulation of the etiological agent in the sampled animals and the need for preventive measures on pig farms in Maranhão with the involvement of producers, sanitary defense and inspection agencies.

RESUMO: A pneumonia enzoótica suína (PES), causada principalmente pela bactéria Mycoplasma hyopneumoniae, é a principal causa de problemas respiratórios em suínos. A infecção por M. hyopneumoniae leva a perdas produtivas e a predisposição dos animais acometidos a infecções secundárias, o que pode resultar em condenação de carcaças e órgãos por lesões pulmonares no momento do abate. O objetivo da pesquisa foi avaliar a infecção por M. hyopneumoniae em suínos submetidos ao abate na Ilha de São Luís, por meio de métodos diagnósticos moleculares e histopatológicos. Para isso, foram coletadas 150 amostras de pulmão de suínos de abate inspecionado (n=65) e não inspecionado (n=85) na Ilha de São Luís/Maranhão, no período de julho de 2019 a agosto de 2021. Das 150 amostras de DNA coletadas, 121 apresentaram produto amplificado para Cyt B no ensaio de PCR. Assim, 121 amostras foram submetidas à qPCR de M. hyopneumoniae, das quais 44 (36,36%) apresentaram resultados positivos. A quantidade média de carga bacteriana variou de 1,20 × 101 a 7,20 × 104, com média de 1,73 × 104 cópias. Das amostras reagentes, 81,81% (36 amostras) foram obtidas de abate não inspecionado, enquanto 18,18% (8 amostras) foram obtidas em abatedouro. Na análise histopatológica, foram avaliadas 44 amostras positivas para qPCR, das quais 28 (63,63%) apresentaram resultados compatíveis com o principal processo inflamatório associado à presença de M. hyopneumoniae, ou seja, hiperplasia do tecido linfóide associado ao brônquio (BALT). Três amostras que apresentaram maior carga bacteriana (qPCR: 5,63 × 10³, 2,19 × 104 e 7,23 × 104) foram mais evidentes neste estudo. Os achados microscópicos associados às quantificações indicaram uma relação entre a quantidade de carga bacteriana e a presença de lesão microscópica; a maior carga bacteriana no tecido pulmonar está associada a maior alteração histopatológica para hiperplasia BALT. Em conclusão, os resultados obtidos sinalizam para a circulação do agente etiológico nos animais amostrados e a necessidade de medidas preventivas nas criações de suínos do estado do Maranhão com envolvimento dos produtores, órgãos de defesa sanitária e inspeção.

Real-time polymerase chain reaction for detection and enumeration of Staphylococcus aureus and Streptococccus agalactiae using different milk samplings

The objective of the present study was to evaluate the qPCR for detection and enumeration of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae using different milk samplings in comparison to the conventional microbiology. Four dairy herds with a history of subclinical mastitis caused by S. aureus and S. agalactiae were selected. Sampling approach included milk samples from bulk tank (BT), cow level (composite samples, CO), and mammary quarter level (MQ) from 785 lactating cows. Three consecutive monthly milk samplings were carried out, totaling 3347 MQ milk samples, 912 CO, and 12 from BT. All collected milk samples were subjected to conventional microbiology and qPCR for detection and enumeration of S. aureus and S. agalactiae. The qPCR showed 71.5% of diagnostic sensitivity for S. aureus isolated from MQ milk samples, 71.8% for CO, and 50% for BT milk samples compared with conventional microbiology methodology. Taken together, the diagnostic sensitivity for S. agalactiae isolated from MQ milk samples was 90.2, 87.7 for CO, and 90.9% for BT milk samples. In general, the qPCR methodology enabled the detection of S. aureus and S. agalactiae, regardless of the type of milk sampling. The direct use of milk samples to estimate the counting of S. aureus by qPCR demonstrated lower sensitivity than the counting of S. agalactiae, which can be explained by the pathogen infection dynamics and differences in milk sample type.

A case of canine visceral leishmaniasis of unknown origin in Curitiba (state of Paraná, Brazil) treated successfully with miltefosine / Caso de leishmaniose visceral canina de origem desconhecida em Curitiba (Estado do Paraná, Brasil) tratado com sucesso com miltefosina

There are no records of autochthonous cases of canine visceral leishmaniasis in the city of Curitiba, Paraná state, Brazil. In 2020, a male French bulldog (CW01), approximately 2 years old was taken by its owners to a private veterinarian clinic. The suspicion of CVL was confirmed by means of a serology test (ELISA/IFAT reagent), rapid chromatographic immunoassay (DPP®) (ELISA - Biomanguinhos®), parasitological culture and quantitative polymerase chain reaction (qPCR). The animal routinely frequented parks in Curitiba and was taken on several trips to the municipalities of Bombinhas and Balneário Camboriú (Santa Catarina) and to Matinhos (Paraná) where CVL had not previously been reported. Treatment was initiated orally with Milteforan™ which resulted in a significant reduction in the parasitic load. The suspicion of autochthony was investigated through entomological research. A total of 10 traps were installed, one at the animal's home, seven in adjacent city blocks and two in a forest edge. No sandflies were trapped in the dog's home and adjacent houses. The traps in the forest edge caught one Migonemyia migonei female and five Brumptomyia spp. females. This case serves as a warning of the possible introduction of CVL in the city of Curitiba.(AU)

Não há registros de casos autóctones de leishmaniose visceral canina (LVC) no município de Curitiba, Paraná, Brasil. Em 2020, um "bulldog" francês macho (CW01), com aproximadamente 2 anos de idade, foi levado por seus donos a uma clínica veterinária particular. A suspeita de LVC foi confirmada por meio de teste sorológico (reagente ELISA/IFAT), imunoensaio cromatográfico rápido (DPP®) (ELISA - Biomanguinhos®), cultura parasitológica e reação quantitativa em cadeia da polimerase (qPCR). O animal frequentava, rotineiramente, parques de Curitiba e foi levado em diversas viagens para Bombinhas e Balneário Camboriú (Santa Catarina) e para Matinhos (Paraná), onde a LVC não havia sido relatada anteriormente. O tratamento foi iniciado por via oral com Milteforan™ (Virbac) o que resultou em redução significativa da carga parasitária. A suspeita de autóctone foi investigada por meio de pesquisa entomológica. Foram instaladas 10 armadilhas, uma na casa do animal, sete em quarteirões adjacentes e duas na borda da mata. Nenhum inseto foi capturado na casa do proprietário do animal e nas casas adjacentes. As armadilhas na borda da mata capturaram uma fêmea de Migonemyia migonei e cinco Brumptomyia spp. fêmeas. Este caso serve de alerta para a possível introdução da LVC na cidade de Curitiba.(AU)

Gender-based incidence, recovery period, and mortality rate of COVID-19 among the population of district Attock, Pakistan

Abstract COVID-19 is reported as an extremely contagious disease with common symptoms of fever, dry cough, sore throat, and tiredness. The published literature on incidence and gender-wise prevalence of COVID-19 is scarce in Pakistan. Therefore, the present study was designed to compare the distribution, incubation period and mortality rate of COVID-19 among the male and female population of district Attock. The data were collected between 01 April 2020 and 07 December 2020 from the population of district Attock, Pakistan. A total of 22,962 individuals were screened and 843 were found positive for RT-qPCR for SARS-CoV-2. The confirmed positive cases were monitored carefully. Among the positive cases, the incidence of COVID-19 was 61.7% among males and 38.2% among females. The average recovery period of males was 18.89±7.75 days and females were 19±8.40 days from SARS-CoV-2. The overall mortality rate was 8.06%. The death rate of male patients was significantly higher (P 0.05) compared to female patients. Also, the mortality rate was higher (P 0.05) in male patients of 40-60 years of age compared to female patients of the same age group. Moreover, the mortality rate significantly increased (P 0.05) with the increase of age irrespective of gender. In conclusion, the incidence and mortality rate of COVID-19 is higher in males compared to the female population. Moreover, irrespective of gender the mortality rate was significantly lower among patients aged 40 years.

Resumo Covid-19 é relatada como uma doença extremamente contagiosa com sintomas comuns de febre, tosse seca, dor de garganta e cansaço. A literatura publicada sobre incidência e prevalência de Covid-19 com base no gênero é escassa no Paquistão. Portanto, o presente estudo teve como objetivo comparar a distribuição, o período de incubação e a taxa de mortalidade de Covid-19 entre a população masculina e feminina do distrito de Attock. Os dados foram coletados entre 1 de abril de 2020 e 7 de dezembro de 2020 da população do distrito de Attock, Paquistão. Um total de 22.962 indivíduos foi selecionado, e 843 foram considerados positivos para RT-qPCR para SARS-CoV-2. Os casos positivos confirmados foram monitorados cuidadosamente. Entre os casos positivos, a incidência de Covid-19 foi de 61,7% no sexo masculino e 38,2% no feminino. O período médio de recuperação dos homens foi de 18,89 ± 7,75 dias e das mulheres 19 ± 8,40 dias do SARS-CoV-2. A mortalidade geral foi de 8,06%. A taxa de mortalidade de pacientes do sexo masculino foi significativamente maior (P 0,05) em comparação com pacientes do sexo feminino. Além disso, a taxa de mortalidade foi maior (P 0,05) em pacientes do sexo masculino com 40-60 anos de idade em comparação com pacientes do sexo feminino da mesma faixa etária. Além disso, a taxa de mortalidade aumentou significativamente (P 0,05) com o aumento da idade, independentemente do sexo. Em conclusão, a incidência e a taxa de mortalidade de Covid-19 são maiores no sexo masculino em comparação com a população feminina. E também, independentemente do sexo, a taxa de mortalidade foi significativamente menor entre os pacientes com idade 40 anos.

Association between chronic Anaplasma marginale and Babesia spp. infection and hematological parameters of taurine heifers / Associação entre infecção crônica por Anaplasma marginale e Babesia spp. e parâmetros hematológicos de novilhas taurinas

The aim of this study was to investigate the association between chronic Anaplasma marginale and Babesia spp. infection and hematological parameters of pregnant and non-pregnant taurine heifers. Blood samples from 94 females were collected on the first day (D-10) of timed artificial insemination (TAI) protocol and on pregnancy diagnosis (D+34). Hematological parameters were determined and compared between pregnant (PG) and non-pregnant (NPG) heifers, and within group at different sampling days. Real-time PCR (qPCR) was used to determine A. marginale and Babesia bovis infection, and for absolute quantification of Babesia spp. between PG and NPG groups. Correlation analysis was performed between the number of gDNA copies (CN) of Babesia spp. and hematological parameters. On D-10, mean hemoglobin concentration was higher for NPG, and hematocrit and total plasma protein were higher on D+34 for both groups. There was no difference in Babesia spp. CN between groups. In the first qPCR, all heifers were positive for A. marginale and B. bovis. Significant correlations were found between hemoglobin and erythrocyte and between hemoglobin and hematocrit (r = 0.8082 and r = 0.3009, respectively). Low levels of A. marginale and Babesia spp. did not affect hematological parameters of chronically infected pregnant and non-pregnant taurine heifers.(AU)

O objetivo deste estudo foi investigar a associação entre infecção crônica por Anaplasma marginale e Babesia spp. e parâmetros hematológicos de novilhas taurinas prenhes e não prenhes. Sangue de 94 fêmeas foi coletado no primeiro dia (D-10) do protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e no diagnóstico de gestação (D+34). Parâmetros hematológicos foram comparados entre novilhas prenhes (PG) e não prenhes (NPG) e dentro dos grupos entre dias de coleta. Usando-se PCR em tempo real (qPCR), determinou-se a infecção por A. marginale e Babesia bovis e quantificação absoluta de Babesia spp. Entre os grupos PG e NPG. A análise de correlação foi realizada entre o número de cópias (CN) de Babesia spp. e parâmetros hematológicos. No D-10, a concentração de hemoglobina foi maior para NPG e hematócrito, e proteína plasmática total foram maiores em D+34 para ambos os grupos. Não houve diferença para CN de Babesia spp. entre os grupos. Na primeira qPCR, todas as novilhas foram positivas para A. marginale e B. bovis. Correlações significativas foram encontradas entre hemoglobina/eritrócito e hemoglobina/hematócrito (r=0,8082 e r=0,3009, respectivamente). Baixos níveis de A. marginale e Babesia spp. não afetaram os parâmetros hematológicos de novilhas taurinas prenhes e não prenhes cronicamente infectadas.(AU)

Distinct carbapenems susceptibility profiles in isogenic isolates of Klebsiella pneumoniae presenting Ompk36 disruption and expression of down-regulated blaKPC-2 / Perfis distintos de suscetibilidade a carbapenêmicos em isolados isogênicos de Klebsiella pneumoniae apresentando interrupção de Ompk36 e expressão de blaKPC-2 negativamente regulada

The isolation of multidrug-resistant Klebsiella pneumoniae in hospitals is a major public health threat, increasing patient hospitalization costs, morbidity and mortality. Therefore, this work investigated the resistance mechanisms that produced different carbapenems susceptibility profiles in two isogenic strains of K. pneumoniae isolated from the same patient in a public hospital in Recife, Pernambuco. The genes that encode the main porins in K. pneumoniae, ompK35 and ompK36, and several beta-lactamase genes were analyzed. The expression of these genes was evaluated by quantitative real time PCR (polymerase chain reaction) with reverse transcriptase (RT-qPCR). SDS-PAGE (sodium dodecyl sulphate­polyacrylamide gel electrophoresis) was performed to analyze the outer membrane proteins. The analysis of the ompK36 genetic environment disclosed an IS903 insertion sequence disrupting this gene in the ertapenem resistant isolate (KPN133). The blaKPC-2 gene showed down-regulated expression in both isolates. Our findings show that changes in porins, especially OmpK36, are more determinant to carbapenems susceptibility profile of bacterial isolates than variations in blaKPC gene expression.

O isolamento de Klebsiella pneumoniae multirresistente em hospitais é uma grande ameaça à saúde pública, aumentando os custos de internação, morbidade e mortalidade dos pacientes. Portanto, este trabalho investigou os mecanismos de resistência que produziram diferentes perfis de suscetibilidade aos carbapenêmicos em duas cepas isogênicas de K. pneumoniae isoladas do mesmo paciente em um hospital público em Recife, Pernambuco. Foram analisados ​​os genes que codificam as principais porinas em K. pneumoniae, ompK35 e ompK36, e diversos genes de beta-lactamases. A expressão desses genes foi avaliada por PCR (reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real) com transcriptase reversa (RT-qPCR). SDS-PAGE (dodecil sulfato de sódio-poliacrilamida gel eletroforese) foi realizada para analisar as proteínas da membrana externa. A análise do ambiente genético ompK36 revelou uma sequência de inserção IS903 interrompendo este gene no isolado resistente ao ertapenem (KPN133). O gene blaKPC-2 apresentou expressão negativamente regulada em ambos os isolados. Nossos achados mostram que alterações nas porinas, especialmente OmpK36, são mais determinantes no perfil de suscetibilidade aos carbapenêmicos de isolados bacterianos do que variações na expressão do gene blaKPC.

Performance of the tetra-primer PCR technique compared to PCR-RFLP in the search for rs12979860 (C/T) and rs8099917 (T/G) single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the IFNL4 gene / Desempenho da técnica tetra-primer PCR em relação a PCR-RFLP na pesquisa de polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) rs12979860 (C/T) e rs8099917 (T/G) no gene IFNL4

Single nucleotide polymorphisms (SNPs, rs12979860 e rs8099917) in the Interferon Lambda 4 gene (IFNL4, formerly IFNL3and/or IL28B) has been associated with failure in the innate immune response, sustained virological response in hepatitis C, and HTLV-1-associated myelopathy (HAM) development. To search for these polymorphisms several methodologies can be employed, such as sequencing, real-time or quantitative polymerase chain reaction (qPCR), restriction fragment length polymorphism analysis in PCR products (PCR-RFLP), and tetra-primer PCR. The present study compared the performance of the tetra-primer PCR in relation to the PCR-RFLP, both optimized in the Research HTLV Laboratory of the Center of Immunology of Instituto Adolfo Lutz in São Paulo. One hundred DNA samples obtained from patients of STD/Aids Reference Centre in São Paulo, previously analyzed for IL28B SNPs by PCR-RFLP were selected for analysis, after confirming that they represent all IL28B SNPs patterns described in the literature. The results obtained showed concordance between the PCR-RFLP and the tetra-primer PCR SNPs results, and because of the low cost, easy to perform, and minor employment of biological specimen and reagents, the tetra-primer PCR is of choice to be used in routine. (AU)

Polimorfismos de nucleotídeos únicos (single nucleotide polymorphisms, SNPs rs12979860 e rs8099917) no gene que codifica o Interferon Lambda 4 (IFNL4, antigamente IFNL3 e/ou IL28B) têm sido associados às falhas na resposta imune inata e resposta virológica sustentada na hepatite C, e a mielopatia associada ao HTLV-1 (HTLV-1-associated myelopathy, HAM). A pesquisa destes polimorfismos pode empregar diversas metodologias: sequenciamento, reação em cadeia da polimerase em tempo real ou quantitativa (quantitative polymerase chain reaction, qPCR), análise de fragmentos de restrição enzimática em produtos de PCR (restriction fragment length polymorphism in PCR products, PCR-RFLP) e a tetra-primer PCR. Este estudo comparou o desempenho da tetra-primer PCR em relação a PCR-RFLP, ambas otimizadas no Laboratório de Pesquisa em HTLV do Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo. Foram selecionadas 100 amostras de DNA obtidas de pacientes do Centro de Referência e Treinamento em DST/Aids de São Paulo cujos SNPs na IL28B foram anteriormente determinados por PCR-RFLP e representaram todos os perfis descritos em literatura. Os resultados obtidos mostraram concordância entre elas, e pelo fato da tetra-primer PCR ter menor custo, ser de fácil execução, empregar menos tempo, insumos e material biológico, é a técnica de escolha para uso em rotina. (AU)

The effect of Cissus quadrangularis Salisb. extract on maturation of rat mesenchymal stem cells / O efeito do extrato de Cissus quadrangularis Salisb. na proliferação e diferenciação de células-tronco mesenquimais de rato

Degenerative diseases, such as osteoporosis, could be treated by stem cells. The aim of this study was to identify the gene expression of bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC) derived from Sprague Dawley rats and to assess the effect of Cissus quadrangularis Salisb. extract on their maturation into bone cells. The BM-MSC were divided into three groups: (a) BM-MSCs + osteoblast cell growth basal medium as the positive control; (b) BM-MSCs + Dulbecco's modified eagle's medium (DMEM) + 0.3 mg/mL methanol extract of C. quadrangularis as methanol group; and (c) BM-MSC + DMEM + 0.3 mg/mL ethyl acetate extract of C. quadrangularis as ethyl acetate group. A relative quantification approach using was used to analyze the expression of the alp (alkaline phosphatase) gene, with the beta-actin gene was used to normalize the expression of the alp gene. The intra-assay variation was calculated to validate the RT-qPCR data. Our study found that the intra-assay variation value was acceptable, with most of the coefficients of variability (CV) value <5. Ethyl acetate solvent outperformed methanol solvent in extracting the active compound C. quadrangularis. In the ethyl acetate extract group, the expression of the alp gene increased three times compared to the positive control. In methanol extract group, the expression of alp gene was lower six times compared to positive control. This study suggests that C. quadrangularis extracts using ethyl acetate could induce the maturation of BM-MSCs. However, further studies are warrant to confirm this effect using different indicators.

Doenças degenerativas, como a osteoporose, podem ser tratadas por células-tronco. O objetivo deste estudo foi identificar a expressão gênica de células-tronco mesenquimais da medula óssea (BM-MSCs) derivadas de ratos Sprague Dawley, bem como sua proliferação e diferenciação em células ósseas afetadas pelo extrato de Cissus quadrangularis Salisb. As BM-MSCs foram divididas em três grupos: (1) BM-MSCs + meio basal de crescimento de osteoblastos como controle positivo; (2) BM-MSCs + meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) + extrato de metanol; e (3) BM-MSCs + DMEM + extrato de acetato de etila de C. quadrangularis. Uma abordagem de quantificação relativa foi usada para analisar a expressão do gene alp (fosfatase alcalina), com o gene da beta-actina sendo usado para normalizar a expressão do gene alp em cada tratamento. A variação intraensaio foi calculada para validar os dados de RT-qPCR. Os resultados mostraram que o valor da variação intraensaio é aceitável, com a maioria dos valores dos coeficientes de variabilidade (CV) < 5. Além disso, no tratamento T2, a expressão do gene alp aumentou três vezes em relação ao controle positivo. No tratamento T1, o gene alp apresentou nível de expressão seis vezes menor em comparação com o controle positivo. Além disso, o solvente acetato de etila superou o solvente metanol na extração do composto ativo C. quadrangularis Salisb. Este estudo demonstra que extratos de C. quadrangularis Salisb., particularmente com acetato de etila como solvente, podem induzir a proliferação e diferenciação de BM-MSCs. Com base na expressão do gene alp, C. quadrangularis tem o potencial de corrigir a perda óssea.

Transcriptome analysis of the spider Phonotimpus pennimani reveals novel toxin transcripts

Background: Phonotimpus pennimani (Araneae, Phrurolithidae) is a small-sized (3-5 mm) spider endemic to the Tacaná volcano in Chiapas, Mexico, where it is found in soil litter of cloud forests and coffee plantations. Its venom composition has so far not been investigated, partly because it is not a species of medical significance. However, it does have an important impact on the arthropod populations of its natural habitat. Methods: Specimens were collected in Southeastern Mexico (Chiapas) and identified taxonomically by morphological characteristics. A partial sequence from the mitochondrial gene coxI was amplified. Sequencing on the Illumina platform of a transcriptome library constructed from 12 adult specimens revealed 25 toxin or toxinlike genes. Transcripts were validated (RT-qPCR) by assessing the differential expression of the toxin-like PpenTox1 transcript and normalising with housekeeping genes. Results: Analysis of the coxI-gene revealed a similarity to other species of the family Phrurolithidae. Transcriptome analysis also revealed similarity with venom components of species from the families Ctenidae, Lycosidae, and Sicariidae. Expression of the toxinlike PpenTox1 gene was different for each developmental stage (juvenile or adult) and also for both sexes (female or male). Additionally, a partial sequence was obtained for the toxin-like PpenTox1 from DNA. Conclusion: Data from the amplification of the mitochondrial coxI gene confirmed that P. pennimani belongs to the family Phrurolithidae. New genes and transcripts coding for venom components were identified.(AU)

Gender-based incidence, recovery period, and mortality rate of COVID-19 among the population of district Attock, Pakistan / Incidência baseada em gênero, período de recuperação e taxa de mortalidade de COVID-19 entre a população do distrito de Attock, Paquistão

COVID-19 is reported as an extremely contagious disease with common symptoms of fever, dry cough, sore throat, and tiredness. The published literature on incidence and gender-wise prevalence of COVID-19 is scarce in Pakistan. Therefore, the present study was designed to compare the distribution, incubation period and mortality rate of COVID-19 among the male and female population of district Attock. The data were collected between 01 April 2020 and 07 December 2020 from the population of district Attock, Pakistan. A total of 22,962 individuals were screened and 843 were found positive for RT-qPCR for SARS-CoV-2. The confirmed positive cases were monitored carefully. Among the positive cases, the incidence of COVID-19 was 61.7% among males and 38.2% among females. The average recovery period of males was 18.89±7.75 days and females were 19±8.40 days from SARS-CoV-2. The overall mortality rate was 8.06%. The death rate of male patients was significantly higher (P<0.05) compared to female patients. Also, the mortality rate was higher (P<0.05) in male patients of 40-60 years of age compared to female patients of the same age group. Moreover, the mortality rate significantly increased (P<0.05) with the increase of age irrespective of gender. In conclusion, the incidence and mortality rate of COVID-19 is higher in males compared to the female population. Moreover, irrespective of gender the mortality rate was significantly lower among patients aged <40 years.

Covid-19 é relatada como uma doença extremamente contagiosa com sintomas comuns de febre, tosse seca, dor de garganta e cansaço. A literatura publicada sobre incidência e prevalência de Covid-19 com base no gênero é escassa no Paquistão. Portanto, o presente estudo teve como objetivo comparar a distribuição, o período de incubação e a taxa de mortalidade de Covid-19 entre a população masculina e feminina do distrito de Attock. Os dados foram coletados entre 1 de abril de 2020 e 7 de dezembro de 2020 da população do distrito de Attock, Paquistão. Um total de 22.962 indivíduos foi selecionado, e 843 foram considerados positivos para RT-qPCR para SARS-CoV-2. Os casos positivos confirmados foram monitorados cuidadosamente. Entre os casos positivos, a incidência de Covid-19 foi de 61,7% no sexo masculino e 38,2% no feminino. O período médio de recuperação dos homens foi de 18,89 ± 7,75 dias e das mulheres 19 ± 8,40 dias do SARS-CoV-2. A mortalidade geral foi de 8,06%. A taxa de mortalidade de pacientes do sexo masculino foi significativamente maior (P < 0,05) em comparação com pacientes do sexo feminino. Além disso, a taxa de mortalidade foi maior (P < 0,05) em pacientes do sexo masculino com 40-60 anos de idade em comparação com pacientes do sexo feminino da mesma faixa etária. Além disso, a taxa de mortalidade aumentou significativamente (P < 0,05) com o aumento da idade, independentemente do sexo. Em conclusão, a incidência e a taxa de mortalidade de Covid-19 são maiores no sexo masculino em comparação com a população feminina. E também, independentemente do sexo, a taxa de mortalidade foi significativamente menor entre os pacientes com idade < 40 anos.

Feline leishmaniosis: hematological and biochemical analysis / Leishmaniose felina: análises de hematologia e bioquímica

One hundred and sixty-six cats from two animal shelters were subjected to enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), indirect immunofluorescence antibody test (IFAT), conventional polymerase chain reaction (cPCR), quantitative PCR (qPCR) and parasitological tests (PA) for the diagnosis of Leishmania spp. Among them, 15% (25/166), 53.6% (89/166), 3.6% (06/166) and 1.8% (03/166) were positive by ELISA, IFAT, both PCRs and PA, respectively. The sequencing of ITS-1 PCR amplicons revealed a 100% match with Leishmania infantum. After the Leishmania spp. survey, 12 cats were selected and divided into two groups for clinical, hematological, and biochemical analysis: six L. infantum positive cats (G1) and six Leishmania spp. negative cats (G2). All the cats were negative for feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV). A statistical analysis indicated significantly low platelet counts and significant hyperproteinemia associated with hypoalbuminemia in positive cats (p<0.05). Our results suggest that in endemic areas, cats with clinical signs of feline leishmaniosis (such as skin lesions, weight loss and/or enlarged lymph nodes) and that exhibit hematological and biochemical changes, such as low platelet counts and hyperproteinemia with hypoalbuminemia, should be tested for Leishmania spp. infection.(AU)

Cento e sessenta e seis gatos de dois abrigos foram submetidos ao diagnóstico de Leishmania spp. por ensaio imunoenzimático (ELISA), imunofluorescência indireta (RIFI), reação em cadeia pela polimerase convencional (cPCR) e quantitativa (qPCR) e métodos parasitológicos (PA). Destes, 15% (25/166), 53,6% (89/166), 3,6% (06/166) e 1,8% (03/166) foram positivos por ELISA, RIFI, as duas PCRs e PA, respectivamente. O sequenciamento dos produtos amplificados da PCR ITS-1 foi 100% idêntico à Leishmania infantum. Após o inquérito, 12 gatos foram selecionados para compor dois grupos para análises de hematologia e bioquímica: 6 gatos positivos para L. infantum (G1) e 6 gatos Leishmania spp. negativos (G2). Todos os gatos foram negativos para o vírus da imunodeficiência felina (FIV) e o da leucemia felina (FeLV). Foi observada uma diminuição na contagem de plaquetas e uma hiperproteinemia e hipoalbuminemia significativas em gatos positivos (p<0,05). Esses resultados sugerem que, em áreas endêmicas, os gatos com sinais clínicos de leishmaniose felina (tais como lesões dermatológicas, perda de peso e/ou linfonodos aumentados), associados a alterações hematológicas e bioquímicas, como contagem reduzida de plaquetas e hiperproteinemia com hipoalbuminemia, devem ser testados para leishmaniose felina.(AU)

Dogs naturally infected by Rangelia vitalii, Babesia canis vogeli, and Ehrlichia canis in São Paulo, Brazil / Cães naturalmente infectados por Rangelia vitalii, Babesia canis vogeli, e Ehrlichia canis em São Paulo, Brasil

Several agents can cause hemoparasitic diseases in dogs, and blood-sucking arthropods transmit these diseases. These agents can cause several clinical manifestations and, in some cases, can kill the host. Because these agents are essential in animal health, this study aims to detect the frequency of Ehrlichia canis, Rickettsia rickettsii, Anaplasma platys, and Rangelia vitalii by real-time PCR and Babesia vogeli in dogs in the southern region of the city of São Paulo, São Paulo. Of the 98 dog samples, 18 (18.4%) tested positive with real-time polymerase chain reaction for at least one studied agent. Of these 18 samples, 17 tested positive for a single agent (11.2% for B. canis vogeli, 1.02% for R. vitalii, and 5.1% for E. canis), and one showed co-infection with B. canis vogeli and R. vitalii. The results demonstrate the presence of hemoparasites in the studied animals, which can influence the quality and life expectancy of these animals. The Rangeliadetection warns small animal clinicians to include it as a differential diagnosis for hemoparasitosis.(AU)

As hemoparasitoses em cães podem ser causadas por diversos agentes, sendo essas doenças transmitidas por artrópodes hematófagos. Esses agentes podem causar diversas manifestações clínicas e, em alguns casos, podem matar o hospedeiro. Este estudo teve como objetivo detectar por PCR em tempo real a frequência de Ehrlichia canis, Rickettsia rickettsii, Anaplasma platys, Rangelia vitalii e Babesia canis vogeli em amostras de cães da zona sul da cidade de São Paulo, Brasil. Das 98 amostras de cães, 18 (18,4%) testaram positivo com reação em cadeia da polimerase em tempo real para pelo menos um agente estudado. Destas 18 amostras, 17 testaram positivo para um único agente (11,2% para B. canis vogeli, 1,02% para R. vitalii e 5,1% para E. canis), e uma apresentou coinfecção com B. canis vogeli e R. vitalii. Os resultados demonstram a presença de hemoparasitas nos animais estudados, o que pode influenciar a qualidade e a expectativa de vida desses animais. Além disso, é o primeiro relato da detecção de R. vitalli na zona sul de São Paulo e serve de alerta para os clínicos de pequenos animais incluírem esse agente como diagnóstico diferencial para as hemoparasitoses.(AU)

Canine ringworm caused by Trichophyton mentagrophytes - detection by SYBR-Green real-time PCR

Background: Dermatophytes, fungi of universal distribution, invade semi or fully keratinized structures, such as skin, fur/ hair and nails. The various species of dermatophytes are classified into three genera anamorphic: Microsporum, Trichophyton and Epidermophyton. The genus Epidermophyton includes only E. floccosum, that rarely affects animals. The main species responsible for the disease in dogs and cats are Microsporum canis, M. gypseum and Trichophyton mentagrophytes, which were characterized through conventional mycological methodology (microscopic examination with KOH and culture). Molecular methodologies, such as real-time PCR, can contribute to a rapid laboratory diagnosis, helping clinicians to initiate an early antifungal treatment. This case report describes a case of canine dermatophytosis due to Trichophyton mentagrophytes detected from a clinical sample by SYBR-Green real-time PCR. Case: A 8-year-old dog, rescued from the street, was referred to a private veterinary clinic in the city of Canoas, RS, Brazil, presenting generalized lymphadenomegaly, crusted lesions all over the body, generalized alopecia, signs of excoriation and epistaxis. Initially, were administered prednisone [1 mg/kg every 48 h, BID] and cephalexin [30 mg/kg, BID]. Weekly baths with benzoyl peroxide were also given. The therapy was not clinically successful. Wood's Lamp Test was negative. As a differential diagnosis, PCR for detection of Leishmania was negative. Complete blood count and serum biochemical assay were also performed. For mycological diagnosis, hair specimen was clarified and examined microscopically using 10% potassium hydroxide (KOH) for the visualization of chains of arthroconidia (ectothrix invasion of hair). The infected hair was plated onto MycoselTM Agar, incubated at 28°C for 15 days. Microscopy of hyphae/ conidia and macroscopic colony characteristics (colors and texture) were conducted for the differentiation of the species within the genus Microsporum and Trichophyton. In addition, real-time PCR was applied for direct analysis of the fungal DNA obtained from the hair sample. Microscopic examination was negative. The dermatophyte present in the hair sample was confirmed as Trichophyton mentagrophytes by culture and qPCR (melting-point analysis). The patient was treated with systemic itraconazole [10 mg/ kg SID - 90 days]. Twice-weekly application of 2.5 % miconazole and 2% chlorhexidine shampoo until complete cure. Discussion: Dermatophytosis is often listed as self-limiting infection; however, animal dermatophytosis can spread between pets, as well as a zoonotic transmission to humans. The literature on dermatophytosis indicates that Microsporum canis is the predominant etiological agent, followed by M. gypseum. Trichophyon mentagrophytes that appear in a lower percentage of isolation. The culture of hair, even with specific medium containing chloramphenicol and cyclohexamide, may present contaminating fungi, not related to dermatophytosis, which can inhibit or override the growth of dermatophytes. The use of real-time PCR provided a faster and specific diagnosis of dermatophytosis when compared to the conventional mycological methodology for detection and identification of T. mentagrophytes, which takes around 10 to 15 days for culture. It is possible to use this technique as an alternative diagnosis for dermatophytes associated to clinical hair samples of dogs.

Molecular prevalence of Mycoplasma parvum in production cycle of technified swine herds / Prevalência molecular do Mycoplasma parvum em granjas de suínos tecnificados de ciclo completo

Porcine hemoplasmosis is characterized as a geographically cosmopolitan disease caused by Mycoplasma suis and Mycoplasma parvum. Asymptomatic pigs are considered the focus of hemoplasmosis because they are carriers and reservoirs to new infections. This study aimed to determine the molecular occurrence of porcine hemoplasmas (PH) in the production cycle of technified farrow-to-finished swine herds. For this purpose, 20 swine herds were evaluated, where 501 whole blood samples were collected for qPCR and phylogenetic analyses for hemoplasmas. The epidemiological analysis was performed for the entire population and per the growth stage. The total prevalence for PH was 31.93% (161/501); 95% (19/20) of sampled herds were positive. The occurrence of PH by swine growth stages was nursery (30.47%), growing (31.29%), finishing (26.18%), and slaughter (40.25%). The quantification cycles (Cq) ranged from 3.18-39.56 and the number of PH 16S rRNA copies per µL of DNA ranged from 5,57 x10 to 2.23 x1010 . Sequencing and phylogenetic analysis of five selected samples showed 100% identity with M. parvum strain Indiana and two M. parvum sequences from Brazil/Goiás. This is the first report on PH in technified herds in Southeastern Brazil by growth stages.

A hemoplasmose suína é uma doença geograficamente cosmopolita, causada por Mycoplasma suis e Mycoplasma parvum. Suínos assintomáticos são considerados foco de hemoplasmose por serem portadores e reservatórios de novas infecções. Este estudo teve como objetivo determinar a ocorrência molecular de hemoplasmas suínos (HP) no ciclo de produção de rebanhos suínos tecnificados. Foram avaliados 20 rebanhos suínos e coletadas 501 amostras de sangue total para qPCR e análises filogenéticas para hemoplasmas. A análise epidemiológica foi realizada pela população e por estágio de crescimento. A prevalência total de HP foi de 31,93% (161/501); 95% (19/20) dos rebanhos amostrados foram positivos. A ocorrência de HP por fases de crescimento dos suínos foi: creche (30,47%), em crescimento (31,29%), acabamento (26,18%) e abate (40,25%). Os ciclos de quantificação (Cq) variaram de 3,18-39,56 e o número de cópias de rRNA PH 16S por µL de DNA variou de 5,57 x102 a 2,23 x10¹0. O sequenciamento e a análise filogenética de cinco amostras selecionadas mostraram 100% de identidade com a cepa indiana de M. parvum e duas sequências de M. parvum do Brasil / Goiás. Este é o primeiro relato de HP em rebanhos tecnificados, na região Sudeste do Brasil, por estágios de crescimento.

Gender-based incidence, recovery period, and mortality rate of COVID-19 among the population of district Attock, Pakistan / Incidência baseada em gênero, período de recuperação e taxa de mortalidade de COVID-19 entre a população do distrito de Attock, Paquistão

COVID-19 is reported as an extremely contagious disease with common symptoms of fever, dry cough, sore throat, and tiredness. The published literature on incidence and gender-wise prevalence of COVID-19 is scarce in Pakistan. Therefore, the present study was designed to compare the distribution, incubation period and mortality rate of COVID-19 among the male and female population of district Attock. The data were collected between 01 April 2020 and 07 December 2020 from the population of district Attock, Pakistan. A total of 22,962 individuals were screened and 843 were found positive for RT-qPCR for SARS-CoV-2. The confirmed positive cases were monitored carefully. Among the positive cases, the incidence of COVID-19 was 61.7% among males and 38.2% among females. The average recovery period of males was 18.89±7.75 days and females were 19±8.40 days from SARS-CoV-2. The overall mortality rate was 8.06%. The death rate of male patients was significantly higher (P<0.05) compared to female patients. Also, the mortality rate was higher (P<0.05) in male patients of 40-60 years of age compared to female patients of the same age group. Moreover, the mortality rate significantly increased (P<0.05) with the increase of age irrespective of gender. In conclusion, the incidence and mortality rate of COVID-19 is higher in males compared to the female population. Moreover, irrespective of gender the mortality rate was significantly lower among patients aged <40 years.(AU)

Covid-19 é relatada como uma doença extremamente contagiosa com sintomas comuns de febre, tosse seca, dor de garganta e cansaço. A literatura publicada sobre incidência e prevalência de Covid-19 com base no gênero é escassa no Paquistão. Portanto, o presente estudo teve como objetivo comparar a distribuição, o período de incubação e a taxa de mortalidade de Covid-19 entre a população masculina e feminina do distrito de Attock. Os dados foram coletados entre 1 de abril de 2020 e 7 de dezembro de 2020 da população do distrito de Attock, Paquistão. Um total de 22.962 indivíduos foi selecionado, e 843 foram considerados positivos para RT-qPCR para SARS-CoV-2. Os casos positivos confirmados foram monitorados cuidadosamente. Entre os casos positivos, a incidência de Covid-19 foi de 61,7% no sexo masculino e 38,2% no feminino. O período médio de recuperação dos homens foi de 18,89 ± 7,75 dias e das mulheres 19 ± 8,40 dias do SARS-CoV-2. A mortalidade geral foi de 8,06%. A taxa de mortalidade de pacientes do sexo masculino foi significativamente maior (P < 0,05) em comparação com pacientes do sexo feminino. Além disso, a taxa de mortalidade foi maior (P < 0,05) em pacientes do sexo masculino com 40-60 anos de idade em comparação com pacientes do sexo feminino da mesma faixa etária. Além disso, a taxa de mortalidade aumentou significativamente (P < 0,05) com o aumento da idade, independentemente do sexo. Em conclusão, a incidência e a taxa de mortalidade de Covid-19 são maiores no sexo masculino em comparação com a população feminina. E também, independentemente do sexo, a taxa de mortalidade foi significativamente menor entre os pacientes com idade < 40 anos.(AU)

Investigation of Egg Weight, Ovarian Follicles Morphology and Growth Differentiation Factor 9 mRNA Expression in Potchefstroom Koekoek Chicken Breed

The growth differentiation factor 9 (GDF9) gene plays a vital role in the growth and maturation of ovarian follicles in laying hens. However, its messenger ribonucleic acid (mRNA) expression levels in preovulatory ovarian follicles of indigenous chickens remain poorly understood. The study aimed to identify the association between egg weight and egg quality traits, ovarian follicles morphology, and mRNA expression levels of the GDF9 gene in pre-ovulatory ovarian follicles of the South African Potchefstroom Koekoek chicken breed. The correlation results showed that egg weight (EW) had a positively high significant correlation (p<0.01) with egg width (EWD), yolk weight (YW), shell surface area (SSA), albumen weight (AW), albumen ratio (AR) and egg volume (EV), and a positive significant correlation (p<0.05) with egg length (EL). The Student's T-test results revealed that the numbers of large yellow follicles were significantly lower (p<0.05) than those of small yellow follicles. ANOVA findings showed that there was a significant difference (p<0.05) in the average weight of the large yellow follicles. The quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-qPCR) findings indicated that there were significant differences (p<0.05) in the mRNA expression levels of the GDF9 gene in preovulatory ovarian follicles of the Potchefstroom Koekoek chicken breed. The mRNA expression was more abundant in F1 and F4 than in other ovarian follicles.(AU)

Isoliquiritigenin regulates the circ_0002860/miR-431-5p/RAB9A axis to function as a tumor inhibitor in melanoma

Background: Isoliquiritigenin (ISL) presents antitumor effects against melanoma cells. It is known that various circular RNAs (circRNAs) are involved in the development of melanoma. Therefore, the present study aims to investigate the molecular mechanisms of ISL and circ_0002860. Methods: Circ_0002860, microRNA-431-5p (miR-431-5p) and member RAS oncogene family (RAB9A) were detected through reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) assay. Cell viability was examined via cell counting kit-8 assay. The proliferation ability was assessed using colony formation assay. Cell apoptosis and cell cycle were determined by flow cytometry. Transwell assay was used for detection of migration and invasion. Western blot was conducted for protein analysis. Target binding was confirmed via dual-luciferase reporter assay and RNA immunoprecipitation (RIP) assay. In vivo research was performed through xenograft tumor assay. Results: Circ_0002860 was downregulated by ISL in melanoma cells. ISL-induced inhibitory effects on cell proliferation, cell cycle progression, migration and invasion were alleviated by circ_0002860 overexpression. MiR-431-5p was a target of circ_0002860. Circ_0002860 eliminated the ISL-induced tumor inhibition via sponging miR-431-5p in melanoma cells. Circ_0002860 elevated the RAB9A level by targeting miR-431-5p. The function of ISL was related to miR-431-5p/RAB9A axis in melanoma progression. Tumor growth was reduced by ISL in vivo through downregulating circ_0002860 to regulate miR-431-5p and RAB9A levels. Conclusion: The current data indicates that ISL suppressed cell malignant progression of melanoma via targeting the circ_0002860/miR-431-5p/RAB9A pathway.(AU)

Gender-based incidence, recovery period, and mortality rate of COVID-19 among the population of district Attock, Pakistan / Incidência baseada em gênero, período de recuperação e taxa de mortalidade de COVID-19 entre a população do distrito de Attock, Paquistão

Abstract COVID-19 is reported as an extremely contagious disease with common symptoms of fever, dry cough, sore throat, and tiredness. The published literature on incidence and gender-wise prevalence of COVID-19 is scarce in Pakistan. Therefore, the present study was designed to compare the distribution, incubation period and mortality rate of COVID-19 among the male and female population of district Attock. The data were collected between 01 April 2020 and 07 December 2020 from the population of district Attock, Pakistan. A total of 22,962 individuals were screened and 843 were found positive for RT-qPCR for SARS-CoV-2. The confirmed positive cases were monitored carefully. Among the positive cases, the incidence of COVID-19 was 61.7% among males and 38.2% among females. The average recovery period of males was 18.89±7.75 days and females were 19±8.40 days from SARS-CoV-2. The overall mortality rate was 8.06%. The death rate of male patients was significantly higher (P<0.05) compared to female patients. Also, the mortality rate was higher (P<0.05) in male patients of 40-60 years of age compared to female patients of the same age group. Moreover, the mortality rate significantly increased (P<0.05) with the increase of age irrespective of gender. In conclusion, the incidence and mortality rate of COVID-19 is higher in males compared to the female population. Moreover, irrespective of gender the mortality rate was significantly lower among patients aged <40 years.

Resumo Covid-19 é relatada como uma doença extremamente contagiosa com sintomas comuns de febre, tosse seca, dor de garganta e cansaço. A literatura publicada sobre incidência e prevalência de Covid-19 com base no gênero é escassa no Paquistão. Portanto, o presente estudo teve como objetivo comparar a distribuição, o período de incubação e a taxa de mortalidade de Covid-19 entre a população masculina e feminina do distrito de Attock. Os dados foram coletados entre 1 de abril de 2020 e 7 de dezembro de 2020 da população do distrito de Attock, Paquistão. Um total de 22.962 indivíduos foi selecionado, e 843 foram considerados positivos para RT-qPCR para SARS-CoV-2. Os casos positivos confirmados foram monitorados cuidadosamente. Entre os casos positivos, a incidência de Covid-19 foi de 61,7% no sexo masculino e 38,2% no feminino. O período médio de recuperação dos homens foi de 18,89 ± 7,75 dias e das mulheres 19 ± 8,40 dias do SARS-CoV-2. A mortalidade geral foi de 8,06%. A taxa de mortalidade de pacientes do sexo masculino foi significativamente maior (P < 0,05) em comparação com pacientes do sexo feminino. Além disso, a taxa de mortalidade foi maior (P < 0,05) em pacientes do sexo masculino com 40-60 anos de idade em comparação com pacientes do sexo feminino da mesma faixa etária. Além disso, a taxa de mortalidade aumentou significativamente (P < 0,05) com o aumento da idade, independentemente do sexo. Em conclusão, a incidência e a taxa de mortalidade de Covid-19 são maiores no sexo masculino em comparação com a população feminina. E também, independentemente do sexo, a taxa de mortalidade foi significativamente menor entre os pacientes com idade < 40 anos.

Reference gene stability in the Longissimus thoracis et lumborum muscle of Colombian Creole sheep / Estabilidade de genes de referência no músculo Longissimus thoracis et lumborum de ovelhas crioulas colombianas

The Colombian Creole sheep breed has a high economic and social importance for Colombia. Both males and females of this breed are multipurpose animals, and evaluating the production and meat quality of both sexes is important for small farmers in Colombia. This requires the use of tools that help to evaluate critical production points, such as Real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR), which is a widely used molecular tool for the relative quantification of candidate genes in various tissues. For its correct use, the use of housekeeping genes with stable expression, so-called "reference genes", is required. However, recent studies have shown that the expression of these reference genes can vary among tissues and can be modulated by breed, sex, or external stimuli. Likewise, there is little information regarding the expression of these genes in the Longissimus thoracis et lumborum muscle of male and female Colombian Creole sheep. In this study, the stability in the expression of seven reference genes (ACTB, YWHAZ, SDHA, GAPDH, TUBB2A, B2M, and PGK1) in the Longissimus thoracis et lumborum muscle of male and female Colombian Creole sheep was compared since they are used in RT-qPCR studies to determine the most stable ones for this breed. Twelve animals, six males and six females, with a body weight of 26 ± 4 kg and 12 ± 3 months of age, were used under grazing conditions. Biopsies of the Longissimus thoracis et lumborum muscle were taken, from which RNA was extracted and cDNA was synthesized. Expression was determined using RT-qPCR, and its stability was analyzed by computational algorithms using the geNorm, Normfinder, and BestKeeper software packages, which were integrated using the RefFinder software package. The results indicate that GAPDH, ACTB, and SDHA have the highest stability, whereas the most variable expression was found for B2M. These data provide the basis for more precise results in RT-qPCR studies of gene expression in the muscle of Colombian Creole sheep.(AU)

A raça de ovinos Crioula Colombiana tem grande importância econômica e social para a Colômbia. Avaliar a produção e a qualidade da carne de machos e fêmeas é importante para pequenos produtores do país e, assim, faz necessário o uso ferramentas que ajudam a avaliar os pontos críticos de produção, como a reação em cadeia da polimerase em tempo real (Real-time quantitative polymerase chain reaction [RT-qPCR]). Esta é uma ferramenta molecular amplamente usada para a quantificação relativa de genes candidatos em vários tecidos. Para o seu uso correto, é necessário o uso de genes com expressão estável denominados genes de referência. No entanto, estudos recentes têm mostrado que a expressão desses genes de referência pode variar entre os tecidos e pode ser modulada por raça, sexo ou estímulos externos. Da mesma forma, existem poucas informações sobre a expressão desses genes no músculo Longissimus thoracis et lumborum de ovinos machos e fêmeas da raça Crioula Colombiana. Neste estudo foi comparada a estabilidade na expressão de sete genes de referência (ACTB, YWHAZ, SDHA, GAPDH, TUBB2A, B2M e PGK1) no músculo Longissimus thoracis et lumborum de ovinos Crioulo Colombiano machos e fêmeas, por serem genes utilizados em estudos de RT-qPCR visando determinar os mais estáveis para esta raça. Doze animais com peso corporal de 26 ± 4 kg e 12 ± 3 meses de idade foram utilizados em condições de pastejo. Foram realizadas biópsias do músculo Longissimus thoracis et lumborum, de onde o RNA foi extraído e o cDNA foi sintetizado. A expressão foi determinada usando RT-qPCR e sua estabilidade foi analisada por algoritmos computacionais usando geNorm, Normfinder e BestKeeper pacote de software, os quais foram integrados usando RefFinder pacote de software. Os resultados indicam que GAPDH, ACTB e SDHA apresentam maior estabilidade, enquanto a expressão mais variável foi para B2M. Esses dados fornecem a base para resultados mais precisos em estudos de RT-qPCR de expressão gênica em músculos defeminino ovinos da raça Crioula Colombiana.(AU)