Isolamento e cultivo de protoplastos de porta-enxertos de citros
de Oliveira, R.P.; Mendes, B.M.J.; d' Utra Vaz, F.B.; Tulmann Neto, A..
Sci. agric.;
52(2)1995.
Artigo
em Português
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| ID: vti-438906
Resumo
Protoplast isolation and growth of Citrus rootstock v. Cravo lime and Cleópatra mandarin were carried out Enzyme mixture was used to digest cell suspensions 7-10 times, following criterious purification. Protoplast culture was carried out in doplets of semi-solid (agarose 0.6% p/v) KM8p medium, in the dark, at 28 ± 1°C following density adjustment to 2 x 10(5) ppts/ml. Osmotic pressure reduction was acomplished for each growth every 10 days with a mixture in equal volumes of KM8p and KM8 medium in ratios of 2:1; 1:1; 1:2 e 0:3. Isolation produced 0.7 x 10(6) ppts/ml for Cleópatra mandarin and 0.5 x 10(6) ppts/ml for Cravo lime, with a viability between 86 to 92% and 73 to 80%, respectively. First cell divisions were recorded at the 8th. day of growth, with an inicial platting efficiency of 9% for Cleópatra mandarin and 5% for Cravo lime. Callus development was achived in 50 days upon transfer of microcalus to semi-solid MT medium.Realizou-se o isolamento e cultivo de protolastos de porta-enxertos de citros das variedades limoeiro Cravo e tangerina Cleópatra. Utilizou-se solução enzimática para a digestão da parede celular de células em suspensão (7 a 10 subcultivos em meio de cultura MT) e procedeu-se a purificação criteriosa. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em meio de cultivo KM8p e na molaridade de 0.6 M, sob condições de escuro a 28 ± 1°C, após ajuste para a densidade de 2 x 10s ppts/mL A redução da pressão osmótica do meio de cultivo foi realizada a cada 10 dias na seguinte proporção de meio de cultura KM8p 0.6 M e KM8 (2:1, 1:1, 1:2, 0:3). Com relação aos resultados, obteve-se em média o isolamento de 0.7 x 10(6) ppts / ml de suspensões celulares de tangerina Cleópatra e 0.5 x 1O6 ppts / ml de suspensões de limoeiro Cravo, com uma porcentagem de viabilidade de 86 a 92% para a variedade Cleópatra e de 73 a 80% para o limoeiro Cravo. As divisões celulares começaram a ocorrer por volta do 8° dia após o plaqueamento, sendo obtida uma eficiência inicial de plaqueamento de 9% para a variedade Cleópatra e de 5% para o limoeiro Cravo. Aos 50 dias de cultivo, as colônias foram transferidas para meio semi-sólido MT, onde apresentaram ritmo acelerado de crescimento formando calos.
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BR68.1
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