Evaluation of experimental conditions for quantification of LT produced by human derived enterotoxigenic Escherichia coli strains
Ang-Simões Lasaro, Melissa; Falcão Rodrigues, Juliana; Cabrera-Crespo, Joaquim; Elisabete Sbrogio-Almeida, Maria; de Oliveira Lasaro, Marcio; Carlos Souza Ferreira, Luís.
Braz. J. Microbiol.;
38(3)2007.
Artigo
em Inglês
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| ID: vti-444126
Resumo
The heat-labile toxin (LT) is a key virulence-associated factor associated with the non-invasive secretory diarrhea caused by enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) strains either in humans or domestic animals. Several LT detection methods have been reported but quantification of the toxin produced by wild-type ETEC strains is usually performed by the GM1 ganglyoside enzyme-linked immunosorbent assay (GM1 ELISA). In this study we conducted the optimization of an alternative LT-quantification method, the antibody-capture ELISA (cELISA). Detailed analysis of the appropriate dilutions of capture and detecting LT-specific antibodies significantly improved the sensitivity of the method. Additionally, testing of different LT extraction techniques indicated that sonic disruption of the bacterial cells enhanced LT recovery yields, in contrast to the usual procedure based on addition of polymyxin B to the culture medium as well as extraction methods based on chloroform or Triton X-100. Moreover, the present data indicate that performance of the LT extraction method based on polymyxin B treatment can vary among wild ETEC strains.A toxina termo-lábil (LT) é um fator de virulência associado à diarréia secretora não invasiva causada por linhagens de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) em humanos ou animais domésticos. Diversos métodos de detecção de LT foram descritos na literatura, no entanto, a quantificação da toxina produzida por linhagens selvagens de ETEC é geralmente realizada por ensaio imunoenzimático com o gangliosídeo GM-1 (GM-1 ELISA). Neste estudo, conduzimos uma otimização experimental de um método alternativo de quantificação de LT, o ELISA de captura (cELISA). Análise detalhada de diluições apropriadas dos anticorpos LT específicos de captura e detecção melhorou significantemente a sensibilidade do método. Em adição, testes com diferentes técnicas de extração de LT indicaram que a ruptura das células por ultra-som, mas não o tratamento com polimixina B, clorofórmio ou Triton X-100, aumentou o rendimento da recuperação de LT. Além disto, os dados apresentados demonstram que o desempenho do método de extração de LT baseado no tratamento com polimixina B pode variar entre linhagens selvagens de ETEC.
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BR68.1
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