Monoclonal antibody anti-AFB1: scale-up in vitro for biotools development / Anticorpo monoclonal antiAFB1: produção in vitro visando desenvolvimento de bioferramentas
Reika Takabayashi, Cássia; Hayashi, Luciana; Martins de Oliveira, Tatiane; Fujii, Simone; Kemmelmeier, Carlos; Yurie Sataque Ono, Elisabete; Nakagawa Itano, Eiko; Kawamura, Osamu; Yoko Hirooka, Elisa.
Semina Ci. agr.;
31(4): 933-944, 2010.
Artigo
em Português
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| ID: vti-473058
Resumo
Aflatoxin B1 (AFB1) is a mycotoxin classified as group 1 (human carcinogen) by International Agency for Research on Cancer - IARC, causing hazardous contamination in a wide variety of food and feed, where the monitoring depends on precision and accuracy of analytical method. The culture of AFB1 specific monoclonal antibody (mAb) secreting hybridoma was performed for further development of immunochemical methods. The growth of hybridoma AF2 was carried out in RPMI medium + 15 % fetal bovine serum (FBS), as well as the same medium gradually amended with H-SFM medium (25, 50, 75 and 100 % H-SFM). The protein concentration in the culture supernatant ranged from 1.80 to 10.88 mg/mL. The culture amended with FBS-free synthetic H-SFM medium reached production of reagent with higher degree of purity and lower risk, in addition to lower protein content (2.29 mg/mL reached with 100 % H-SFM), which approaches the real content of pure mAb. The indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) showed anti-AFB1 activity and IgG corresponding bands, respectively, indicating feasible application of mAb produced in 100, 75 and 50 % H-SFM for further use in the development of AFB1 detecting biotools. This mAb production can be an initial step that can supply the self-sufficient immune-reagent in the rapid diagnosis at nationalAflatoxina B1 (AFB1) é uma micotoxina classificada pela International Agency for Research on Cancer - IARC no Grupo 1 (carcinógeno ao humano), responsável pelo perigo de contaminação em ampla variedade de alimento e ração, cujo monitoramento depende de metodologia analítica precisa e exata. O trabalho visou cultivo do hibridoma secretor de anticorpo monoclonal (AcM) específico para AFB1 visando desenvolvimento de métodos imunoquímicos. Hibridoma AF2 foi cultivado em meio RPMI + 15 % de soro fetal bovino (SFB), assim como o mesmo meio com adição gradual de meio H-SFM (25, 50, 75 e 100 % H-SFM). A concentração proteica obtida no sobrenadante de cultura variou de 1,80 a 10,88 mg/mL. A introdução de meio sintético H-SFM isento de SFB permitiu obtenção de reagente com maior pureza e menor perigo, já que cultivos com maior proporção de H-SFM apresentou menor teor proteico (2,29 mg/mL em 100 % de H-SFM), sendo este provavelmente próximo ao teor real de AcM puro. O ensaio imunoenzimático competitivo indireto (ic-ELISA) e eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS (SDS-PAGE) demonstraram atividade antiAFB1 e bandas correspondentes ao IgG, respectivamente, indicando viabilidade da aplicação de AcM produzido em 100, 75 e 50 % H-SFM para o desenvolvimento de bioferramentas para detecção de AFB1. Esta produção de AcM abre perspectiva perante autossuficiência de reagentes essenciais no d
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