Methodological standardization for determination of seed storage protein of Handroanthus albus (Chamiso) / Padronização metodológica para determinação de proteínas de reserva de sementes de Handroanthus albus (Chamiso)
Shibata, Marília; Maria Medeiros Coelho, Cileide; Magda de Oliveira, Luciana; Frederico Guidolin, Altamir.
R. Ci. agrovet.;
10(2): 151-157, 2011.
Artigo
em Português
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| ID: vti-714275
Resumo
The discontinuous electrophoresis system containing polyacrilamide and sodium dodecyl sulphate (SDS-PAGE) is used to separate polypeptide chains for subsequent protein profile analysis. However, the protein extraction and separation methods vary according to the vegetal species and little is reported about storage proteins in Handroanthus albus. Because of this, the objective of this work was to standardize a method of extracting and visualizing the protein profi le of H. albus seeds. Four methodologies were tested in the electrophoresis SDS-PAGE system, from a basic method, using a simple extraction buffer containing only Tris-HCl, to the most complex method with strong antioxidants, were used. Also, various modifications were made to the gel concentration in the sample buffer and the electrode buffer, in order to obtain neatness in the visualization of the protein profile. The method which allowed the best visualization of the protein profile was the one based on the use of 1 M of tris-HCl pH 8.8 in the extraction buffer and 20% glycerol; 1.73 mM of SDS; 1.54 mM tris-HCl-6.8; 0.036 mM bromophenol blue and 2% of -mercaptoetanol in the sample buffer. The protein profile observed showed proteins with a molecular weight between 63 kDa and 25.6 kDa in separating gel 15% and the concentrator at 3%. Such methodology standardization serves as a basis for future works which have theO sistema de eletroforese descontínuo contendo poliacrilamida e dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) é utilizado para separar cadeias polipeptídicas para posterior análise do perfil protéico. No entanto, as metodologias para extração e separação das proteínas em sementes variam conforme a espécie vegetal e pouco se relata a respeito de proteínas de reserva em Handroanthus albus. Desta forma, objetivou-se padronizar um método para extração e visualização do perfil protéico de sementes de H. albus. Testaram-se quatro metodologias em sistema de eletroforese SDS-PAGE, onde utilizou-se desde um tampão de extração simples, contendo apenas tris HCl, até um mais complexo com fortes antioxidantes. Realizaram-se, também, modificações na concentração dos géis, no tampão de amostra e no tampão dos eletrodos visando nitidez na visualização do perfil protéico. O método que permitiu a observação do melhor perfil protéico foi o que se baseou no uso de 1 M de tris HCl pH 8,8 no tampão de extração e 20% de glicerol; 1,73 mM de SDS; 1,54 mM tris-HCl-6,8; 0,036 mM azul de bromofenol e 2% de -mercaptoetanol no tampão de amostra. O perfil protéico observado apresentou proteínas com peso molecular entre 63 kDa a 25,6 kDa em gel separador de 15% e o concentrador a 3%. Tal padronização metodológica serve de base para futuros trabalhos que objetivem estudar o perfil protéico associado a determinados eve
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