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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-201965

Resumo

O diagnóstico precoce da gestação visa o aumento da produtividade e otimização dos sistemas de criação animal. Na investigação de métodos mais precoces de detecção da prenhez, foram descobertas as glicoproteínas associadas à prenhez (PAG), que são produzidas pela placenta dos mamíferos euterianos e pertencem à família das proteases aspárticas. Liberadas na circulação periférica materna logo após a implantação podem ser um indicador de gestação para muitas espécies, variando a quantidade de PAG e o tempo de aparecimento. O Idexx Visual Pregnancy Test é um ensaio ELISA-PAG visual que detecta PAG no sangue materno e permite a leitura visual dos resultados pela coloração das amostras; no entanto foi validado apenas para bovinos, nos quais são detectadas, com melhor precisão, a partir de 28 dias de gestação. Com o objetivo de avaliar o ELISA-PAG visual para a espécie ovina, foram utilizadas duas raças ovinas brasileiras, Santa Inês e Morada Nova, em quatro fases. Na primeira fase foram utilizadas 41 ovelhas, diagnosticadas como positivas para prenhez, por ultrassonografia. Amostras de sangue foram colhidas aos 26, 28, 30 e 32 dias, após a observação da última cobertura natural, e utilizadas para realização, em duplicata, do diagnóstico de prenhez pelo ELISA-PAG visual, com base na presença de PAG. Na segunda fase, amostras de sangue foram colhidas 30 dias após inseminação artificial, de 65 ovelhas Santa Inês, para diagnóstico gestacional pelo ELISA-PAG visual. Posteriormente, na terceira fase, com o intuito de se conhecer o tempo de detecção sérica das PAG nas ovelhas, após os 30 dias de gestação, continuaram-se as colheitas de sangue em 10 ovelhas, a cada sete dias até 92 dias pós-parição. Na quarta fase, foram utilizadas 34 fêmeas ovinas, sabidamente não prenhes, para avaliar o teste quanto à identificação de ovelhas negativas. A detecção ou não detecção de PAG foi analisada pelo modelo logístico do PROC GENMOD do SAS e as diferenças foram detectadas pelo teste qui quadrado. Os resultados da primeira fase, com amostras de 26, 28, 30 e 32 dias de gestação, pelo ELISA-PAG visual, mostraram percentual positivo de 75,0, 93,2, 97,6 e 97,6, respectivamente. Na segunda fase, das 65 ovelhas inseminadas, 49 estavam gestantes à ultrassonografia sendo todas diagnosticadas corretamente como positivas; contudo houve a presença de um diagnóstico falso positivo pelo ELISA-PAG visual. Na terceira fase, as PAG permaneceram na circulação periférica das fêmeas durante todo o período pré-parto até a parição e pós-parto, até o 7º dia em 100% das ovelhas, decaindo após esse período. Entretanto, as PAG se mantiveram circulantes em 30% das ovelhas durante todo o período avaliado (92 dias). Na fase de identificação das fêmeas não prenhes, pelo ELISA-PAG visual, 97,06% das ovelhas foram diagnosticadas como negativas para prenhez e 2,94% positivas, indicando novamente a presença de um falso positivo. Conclui-se que o ELISA-PAG visual é um método eficaz, prático e rápido para o diagnóstico precoce de gestação em ovelhas. O ELISA-PAG visual pode ser aplicado às ovelhas a partir do 30º dia de gestação.

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Early diagnosis of pregnancy is aimed to increase productivity and optimization of breeding systems. In the investigation of the earliest methods for the detection of pregnancy, were findings the pregnancy-associated glycoproteins (PAG), which are produced by the placenta of eutherian mammals and belong to the family of aspartic proteases. Released in the maternal peripheral circulation after implantation it can be an indicator of pregnancy in many species, with a variation in the amount of PAG and the onset time. The Idexx Visual Pregnancy Test is a visual ELISA-PAG detecting PAG in maternal serum and permits the visual reading of results by the staining of the samples, however it was only validated for cattle, in which are detected with better results from 28 days gestation. In order to evaluate the visual ELISA-PAG for sheep, two Brazilian sheep breeds were used, Santa Inês and Morada Nova in four phases. In the first phase we used 41 sheep, diagnosed as positive for pregnancy by ultrasound. Blood samples were collected at 26; 28; 30 and 32 days after observation of the last natural cover, and used for performing, in duplicate, diagnosis of pregnancy for the visual ELISA-PAG, based on presence of PAG. In the second phase, blood samples were collected 30 days after artificial insemination from 65 Santa Ines sheep, for pregnancy diagnosis by visual ELISA-PAG. Subsequently, in the third phase, the blood samples continued to be harvested in 10 pregnant ewes, every seven days to 92 days post-calving. In the fourth phase, 34 female sheep known non-pregnant were used to evaluate the test as to the identification of negative sheep. The detection or non-detection of PAG was analyzed by logistic model PROC GENMOD of SAS and the differences were detected by the chi-square test. The results of the first phase, samples 26; 28; 30 and 32 days of gestation, the visual ELISA-PAG showed positive percentage of 75.0, 93.2, 97.6 and 97.6, respectively. In the second phase of the 65 inseminated sheep, 49 were diagnosed pregnant by ultrasound and that diagnosis as positive was confirmed as correct; but there was the presence of a false positive diagnosis by visual ELISA-PAG. The clock phase of expression, the PAG remained in the peripheral circulation of the females throughout the antepartum period until the parturition and post partum, from the 7th day in 100% of the sheep, declining thereafter. However, PAG kept current by 30% of the sheep throughout the study period (92 days). The identification phase of non-pregnant females, for the visual ELISA-PAG, 97.06% of the sheep were diagnosed as negative for pregnancy and 2.94% positive, again indicating the presence of a false positive. It follows that the visual ELISA-PAG is an effective, convenient and fast method for early pregnancy diagnosis in sheep. The visual ELISA-PAG can be applied from the sheep from the 30th day of gestation.

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