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Tese em Inglês | VETTESES | ID: vtt-202230

Resumo

Canine distemper virus (CDV) causa uma doença altamente contagiosa e que afeta mundialmente uma ampla variedade de carnívoros. A infecção sistêmica pelo CDV cursa com imunossupressão, sinais respiratórios e gastrointestinais frequentemente seguidos de complicações neurológicas e altas taxas de mortalidade. Além da elevada prevalência na população canina, vários surtos de cinomose canina são relatados em animais selvagens, incluindo espécies ameaçadas de extinção. Há uma necessidade urgente de opções terapêuticas para promover o controle de surtos e reduzir a mortalidade nas espécies alvo. Neste estudo, nós demonstramos duas abordagens terapêuticas diferentes contra a replicação do CDV. Uma vez que o RNA de interferência vem mostrando um grande potencial terapêutico contra infecções virais, nós construímos vetores plasmidiais expressando short hairpin RNAs (shRNAs) e um vetor adenoviral com cassete múltiplo de shRNAs direcionados para diferentes regiões altamente preservadas do genoma do CDV. Enquanto as construções plasmidiais alvejando o gene da RNA polimerase (L) viral apresentaram uma inibição pouco expressiva, os vetores plasmidiais com shRNAs contra o gene da nucleoproteína (N) viral reduziram acima de 99% os níveis de RNA do gene N e inibiram completamente o rendimento viral. O tratamento com o vetor adenoviral com cassete múltiplo de shRNAs também exibiu uma alta eficiência de silenciamento contra a replicação do CDV. Nós também avaliamos os efeitos anti-CDV do 6-metilmercaptopurina ribosídeo (6MMPr), um análogo de nucleosídeo da classe tiopurina. O tratamento com 6MMPr mostrou uma redução acentuada dos níveis de RNA viral e inibiu a produção de partículas infecciosas do CDV durante o ciclo replicativo. No geral, nossos resultados demonstraram que ambas as abordagens bloquearam o CDV in vitro e dessa forma, apresentaram potencial para o desenvolvimento de estratégicas terapêuticas contra a infecção pelo CDV.

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Canine distemper virus (CDV) causes a highly contagious disease affecting a broad range of carnivores worldwide. Systemic CDV infection courses with immunosuppression, respiratory and gastrointestinal signs often followed by neurological complications and high mortality rates. Besides the high prevalence in dog population, several CDV outbreaks have been reported in wildlife animals, including endangered species. The development of novel therapeutics is an urgent need to achieve rapid outbreak control and reduce the mortality in target species. Here, we used two different therapeutic approaches against CDV replication. Since RNA interference (RNAi) has shown a great therapeutic potential against viral infections, we constructed plasmid-based short hairpin RNAs (shRNAs) and a multi-shRNA adenovirus vector targeting different conserved regions of CDV genome. Whereas plasmid constructs directed to large polymerase (L) gene displayed a weaker antiviral activity, plasmid-based shRNAs against CDV nucleoprotein (N) gene decreased N RNA level over 99% and completely inhibited viral growth. The multi-shRNA adenovirus vector treatment also exhibited a high silencing efficiency against CDV replication. For the second approach, we evaluated the anti-CDV effects of 6methylmercaptopurine riboside (6MMPr), a modified thiopurine nucleoside. 6MMPr treatment produced a marked decrese in viral RNA levels and inhibited the production of CDV infectious particles during virus replication. Taken together, our results demonstrate that both approaches successfully block CDV in vitro and thus contribute to the development of novel therapeutic strategies against CDV infection.

Biblioteca responsável: BR68.1