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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-202550

Resumo

Foram estudados 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina de diferentes propriedades do estado de São Paulo: 150 Staphylococcus coagulase positiva (SCP) e 150 Staphylococcus coagulase negativa (SCN). A presença de genes para produção de enterotoxinas foi detectada pela Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) e a expressão gênica pela PCR transcriptase reversa (RT-PCR). Os isolados foram submetidos ao perfil de sensibilidade correlacionada com a detecção dos genes mecA e vanA, pela técnica de PCR. Os 150 SCN isolados foram identificados como sendo: 48 (32%) S. warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2,7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auriculares, 1(0,7%) S. saprophyticus subsp. bovis e 1(0,7%) S. capitis. Entre os SCP foram isolados: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%), S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. A concordância entre a identificação fenotípica e genotípica do total de linhagens de SCN e SCP foi de 96,7% e 98,7%, respectivamente. Foram detectados genes codificadores para enterotoxinas clássicas (sea, seb, sec, sed) e outras enterotoxinas (see, seg, seh, sei, sej, sek, sel, sem, sen, seo, sep, seq) em 175 (58%) dos 300 Staphylococcus spp. pesquisados. Estes genes foram detectados em 109 (73%) dos SCN isolados, resultado significantemente maior que entre SCP 66 (44%), P<0,0001. Entre os 109 SCN foram detectados genes codificadores de enterotoxinas nas seguintes espécies: 37(33,9%) S. warneri, 17(15,6%) S. epidermidis, 16(14,7%) S. hyicus, 5(4,6%) S. xylosus, 5(4,6%) S. haemolyticus, 4(3,7%) S. simulans, 4(3,7%) S. schleiferi subsp schleiferi, 4(3,7%) S. homini, 4(3,7%) S. pasteuri, 3(2,7%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3(2,7%) S. cohnii, 3(2,7%) S. chromogenes, 2(1,8%) S. sciuri, 1(0,9%) S. lugdunensis e 1(0,9%) S. capitis. Nos 66 SCP estes genes foram encontrados nas seguintes espécies: 48 (73 %) S. aureus, 10(15%) S. hyicus, 7(11%) S. intermedius e 2(3%) S. schleiferi subsp coagulans. As espécies S. aureus e S. warneri foram as que mais apresentaram genes codificadores de enterotoxinas. Entre os genes codificadores de enterotoxinas clássicas sea foi predominante entre os isolados: 61 SCN (56%) e 29 SCP (44%). Entre SCN a presença dos seguintes genes codificadores de enterotoxina foi observada: sea, seb, sec, sed, see, seg, seh, sem, sen, seo. Entre SCP foram evidenciados: sea, seb, sec, sed, see, seg, sen, sei, sem, sen, seo. Foi detectada tanto a presença de apenas um destes genes como de outros concomitantemente. Verificou-se simultaneamente em um isolado de S. warneri cinco diferentes genes (sec,sed,sem,sen,seo) e em outro isolado de S. aureus cinco genes (see, seg, sem, sen, seo). Nos SCP a principal resistência foi observada aos betalactâmicos, à penicilina em 54 (36 %) isolados, à ampicilina em 51 (34%), à oxacilina 25 (16,7%) enquanto nos foi obesrvada SCN resitência à penicilina em 37 (24,7%), à ampicilina 34 (22,7%) e à oxacilina 20 (13,3%) dos isolados. O gene mecA foi detectado em 17(11%) SCN isolados, em 44(29%) nos SCP, somente em S. aureus. A resistência dos isolados de origem bovina à oxacilina, antibiótico de primeira escolha na terapia de infecções estafilocócicas em humanos, é preocupante em saúde pública e, quando há insucesso no tratamento, a vancomicina é o antibiótico preconizado. O gene vanA, que codifica a resistência à vancomicina não foi detectado nos isolados avaliados. A avaliação da concentração inibitória mínima (CIM), pelo E-test não demonstrou resistência à vancomicina entre os isolados. Entretanto foi verificada resistência intermediária a este antimicrobiano. O presente estudo contribuiu para evidenciar o potencial risco à segurança alimentar dos consumidores do leite e derivados ao avaliar fatores de virulência e resistência em SCP e SCN isolados da mastite bovina.

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A total of 300 isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied, respectively: 150 CPS and 150 CNS strains. The isolates were analyzed to enterotoxins codifying genes by Polymerase Chain Reaction (PCR). Gene expression was evaluated by reverse transcription PCR (RT-PCR). The isolates were subjected to sensitivity profile correlated with the detection of mecA and vanA gene by PCR. Among the CNS the following species were identified: 48 (32%) S. warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auriculares, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis and 1(0.7%) S. capitis. Among the 150 CPS: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%), S. intermedius and 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. The identification by phenotypic and genotypic tests showed a concordance of 96.7% in the CNS isolates, and 98.7% in the CPS. The codifying genes to enterotoxins production were detected to classical and enterotoxin-like in 175 (58%) out of 300 staphylococci isolates. These genes were detected significantly higher among the CNS (73%) in relation to CPS (44%), P<0.0001. In 109 CNS codifying genes to enterotoxins were detected in the following species: 37(33.9%) S. warneri, 17(15.6%) S. epidermidis, 16(14.7%) S. hyicus, 5(4.6%) S. xylosus, 5(4.6%) S. haemolyticus, 4(3.7%) S. simulans, 4(3.7%) S. schleiferi subsp schleiferi, 4(3.7%) S. homini, 4(3.7%) S. pasteuri, 3(2.7%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3(2.7%) S. cohnii, 3(2.7%) S. chromogenes, 2(1.8%) S. sciuri, 1(0.9%) S. lugdunensis and 1(0.9%) S. capitis. Among the 66 CPS, the enterotoxin genes were observed in the following species: 48(73 %) S. aureus, 10(15%) S. hyicus, 7(11%) S. intermedius and 2(3%) S. schleiferi subsp coagulans. The species S. aureus and S. warneri showed the highest presence of these genes whereas it was not detected statistical difference. The major enterotoxin codifying gene observed was sea 61(56%) in the CNS and 29 (44%) in the CPS. In the CNS the presence of the following enterotoxin genes were verified: sea, seb,sec, sed, see,seg,seh, sem, sen, seo. This genes were found alone. as well as, concomitantly with others enterotoxin codifying genes. In the CPS the presence of the following enterotoxin genes were observed: sea, seb, sec, sed, see, seg, sen, sei, sem, sen, seo. In one S. warneri isolate were detected five different genes (sec, sed, sem, sen, seo) and, another S. aureus isolate showed concomitantly five genes (see, seg, sem, sen, seo). The main xv antimicrobial resistance observed in the CPS were toward the betalactamics: penicilin 54 (36%); ampicillin 51(34%); oxacillin 25 (16.7%). Also, among the CNS were toward the betalactamics: penicillin 37(24.7%), ampicillin 34(22.7%), and oxacillin 20(13.3%). The gene mecA was detected in 17(11%) SCN isolates and among the SCP 44(29%), it were verified only in S.aureus isolates. The resistance os strains to oxacillin, is a Public Health concern, since this antimicrobial is first choice to human therapy in the staphylococcical infection cases. The vancomycin is the second choice to human therapy. The gene vanA, that codify vancomycin resistance was researched among the isolates, whereas it was not detected. The E-test vancomycin MIC did not showed vancomycin resistance, nevertheless, the intermediate resistance were observed in some isolates. The main contribution of the present study was the detection of virulence factors among CPS and CNS isolates from mastitis cases, emphasizing the potential risk to the consumers of milk and dairies.

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