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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-202610

Resumo

O resveratrol tem emergido como um composto natural com imenso potencial terapêutico. Pode atuar como um antioxidante contra o estresse oxidativo em diferentes células, no entanto, o resveratrol nunca foi utilizado no cultivo de folículos pré-antrais. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito do resveratrol sobre a viabilidade, apoptose e desenvolvimento de folículos secundários ovinos isolados, bem como, o nível intracelular de GSH e atividade mitocondrial. Após a coleta dos ovários, folículos secundários foram isolados e cultivados por 18 dias em meio -MEM+ suplementado com BSA, insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina e ácido ascórbico (meio controle) ou em meio suplementado com diferentes concentrações de resveratrol (2,0; 10,0 ou 30,0 M). Os parâmetros analisados foram morfologia, formação de antro, diâmetro, taxa de crescimento, apoptose através da técnica de TUNEL, níveis de GSH e atividade mitocondrial. Todos os grupos de resveratrol diminuiram significativamente a percentagem de folículos morfologicamente normais no dia 18 comparado com o grupo controle (-MEM+). A formação de antro foi maior em folículos cultivados em -MEM+ sozinho ou adicionado de 2M de resveratrol do que aqueles folículos cultivados na presença de 10 M de resveratrol. Além disso, os folículos cultivados com 30 M resveratrol mostraram maior percentagem de oócitos apoptóticos quando comparados ao grupo controle. Oócitos de folículos tratados com 10 e 30 M resveratrol diminuíram significativamente os níveis intracelulares de GSH comparados com 2M resveratrol. Além disso, folículos cultivados em -MEM+ (controle) mostraram maior atividade mitocondrial do que folículos cultivados com 10 e 30 M resveratrol. Em conclusão, esse estudo mostrou que o resveratrol, em altas concentrações, diminui a viabilidade folicular e promove apoptose no oócito, após cultivo in vitro de folículos secundários ovinos, pela diminuição dos níveis de GSH e atividade metabólica.

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Resveratrol has emerged as a natural compound with immense therapeutic potential. It may act as an antioxidant against oxidative stress in different cells, however, resveratrol has never been used in preantral follicle culture. The aim of the present study was to evaluate the effect of resveratrol on viability, apoptosis and development of isolated ovine secondary follicles as well as intracellular glutathione (GSH) level and mitochondrial activity. After collection of the sheep ovaries, secondary follicles were isolated and cultured for 18 days in -MEM+ supplemented with BSA, insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine and ascorbic acid (control medium) or in control medium added by different concentrations of resveratrol (2; 10 or 30 M). The parameters analyzed were morphology, antrum formation, follicular diameter, growth rate, apoptosis, GSH levels and mitochondrial activity. All resveratrol groups significantly decreased the percentage of morphologically normal follicles at day 18 compared with the control group (-MEM+). Antrum formation was higher in follicles cultured in -MEM+ alone or added with 2 M resveratrol than those cultured in presense of 10 M resveratrol. In addition, follicles cultured with 30 M resveratrol showed a higher percentage of apoptotic oocytes when compared to follicles cultured in control medium. Oocytes from follicles cultured with 10 and 30 M resveratrol significantly decreased intracellular GSH levels compared with those cultured with 2 M resveratrol. Moreover, follicles cultured in -MEM+ (control) showed more active mitochondria than those cultured with 10 and 30 M resveratrol. In conclusion, this study showed that resveratrol, at high concentrations, decrease follicular viability and promote oocyte apoptosis after in vitro culture of ovine secondary follicles, by decreasing GSH levels and metabolic activity.

Biblioteca responsável: BR68.1