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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-202992

Resumo

A resposta imune contra parasitos em modelos murinos tem caracteristicas de indução de células Th2. Infecções experimentais por diversas espécies parasitárias em ruminantes nem sempre apresentam este perfil Th2 clássico de indução de citocinas e células efetoras. Outras moléculas tem sido implicadas na resposta contra nematoides em ruminantes dentre elas as letinas, que são proteínas ligadoras de carboidratos que estão envolvidas tanto nas respostas inata como adaptativa. Somado a isso observamos que estudos de infecção natural por nematoides são muito escassos e infecções experimentais em ambientes controlados não simulam com exatidão o que ocorre nos animais criados extensivamente. O objetivo do estudo foi detectar a expressão gênica de colectinas, galectinas e citocinas em tecido abomasal de ovinos de diferentes faixas etárias naturalmente infectados por helmintos gastrintestinais. Cada grupo foi formado com seis ovinos: o grupo I foi composto por lactentes, com menos de dois meses; o grupo II, borregos, de quatro a seis meses de idade, e o grupo III, adultos, com idade entre 18 e 24 meses. A carga parasitária foi determinada pelas contagens de ovos nas fezes (OPG) e de estádios imaturos e adultos no trato gastrintestinal. Fragmentos do abomaso foram coletados para quantificação da expressão gênica por RT-qPCR para a proteína surfactante A (SP-A), conglutinina (CGN), galectina 11 (GAL11) e 14 (GAL14), interleucina 4 (IL-4), IL-5, IL-13, IL-10, IL-6, fator transformador de crescimento-beta (TGF-), interferon-gama (IFN-) e proteínase de mastócitos (MCP-1). As proteínas recombinantes, galectina 11(r-Gal11) e conglutinina (r-Cgn) foram produzidas para indução da produção de anticorpo policlonal e posterior caracterização em tecido abomasal por imunohistoquímica. Haemonchus contortus foi o principal parasita observado no abomaso. Todos os marcadores foram detectados no tecido abomasal destes ovinos, e diferenças estatisticamente significativas foram observadas na expressão gênica de CGN, galectina 11, MCP-1 e IL-5 onde o Grupo II apresentou maior expressão que os demais (p <0,05), apesar de não ser encontrada correlação entre a carga parasitária e a expressão das lectinas e citocinas neste compartimento. A caracterização tecidual de galectina 11 e conglutinina por imunohistoquímica revelou um padrão granular no citoplasma de células secretoras da mucosa abomasal de ambas as proteínas sendo que a conglutinina também marcou o tecido conjuntivo de forma inespecífica.

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The characteristics of immune response against parasites in murine models have a profile of Th2 cell induction. Experimental parasitic infections in ruminant do not have the classical profile of Th2 cytokine induction and effector cells. Other molecules have been implicated in ruminants response against nematodes such letins, a carbohydrate-binding proteins that are involved in both innate and adaptive immune responses. Additionally, studies of natural infection of nematodes are very scarce and experimental infections in controlled environments do not simulate exactly what occurs in animals raised extensively. The objective of the study was meansure collectins, galectins and cytokines gene expression in abomasal tissue in different ages of sheep naturally infected with gastrointestinal helminths. Each group consisted of six sheep: group I consisted of infants under two months; group II, lambs, four to six months old, and the group III, adults, aged between 18 and 24 months. The parasite load was determined by egg counts in faeces (EPG) and immature stages and adults in the gastrointestinal tract. Fragments of the abomasum were collected for quantification of gene expression by RT-qPCR for surfactant protein A (SP-A), conglutinin (CGN), galectin 11 (GAL11) and 14 (GAL14), interleukin 4 (IL-4), IL -5, IL-13, IL-10, IL-6, transforming growth factor-beta (TGF-), interferon-gamma (IFN-) and mast cell proteinase (MCP-1). The recombinant proteins, galectin 11 (r-Gal11) and conglutinin (r-CGN) were produced to induce polyclonal antibody production and further characterization of abomasal tissue by immunohistochemistry. Haemonchus contortus was the main parasite observed in the abomasum. All markers were detected in abomasal tissue of these sheep, and statistically significant differences in gene expression of CGN, galectin 11, MCP-1 and IL-5 where the Group II showed higher expression than the others (p <0.05) although not find any correlation between the parasitic load and the expression of lectins, and cytokines in this compartment. The tissue characterization galectin 11 and conglutinin by immunohistochemistry showed a granular pattern in the cytoplasm of cells secreting the abomasal mucosa of both proteins and that the conglutinin also marked the tissue nonspecific.

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