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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203685

Resumo

Objetivou-se verificar a viabilidade operacional e eficiência da técnica de bipartição num programa de produção in vitro de embriões bovinos, e estudar aspectos relacionados à capacidade de desenvolvimento de hemi-embriões, comparando com embriões intactos. Foram utilizados oócitos oriundos de ovários de abatedouro de animais sem raça e idade definidas, para a produção dos embriões. No dia 6 do cultivo foram realizadas as avaliações dos embriões, sendo classificados, de acordo com o estádio de desenvolvimento e qualidade, para posterior micromanipulação embrionária. O estudo foi dividido em dois experimentos. Inicialmente, foi determinada a viabilidade operacional da técnica de PIVE na bipartição, utilizando 243 embriões. E posteriormente em um segundo experimento, foi avaliado o estádio embrionário e sua viabilidade após a bipartição, utilizando 481embriões. Com o auxílio de um esteromicroscópio acoplado ao dispositivo de micromanipulação mecânico (Leitz) cada estrutura foi individualmente posicionada e segmentada, no intuito de produzir duas metades com maior semelhança. Este procedimento simplificado de bipartição embrionária utilizou lâmina de aço inoxidável de politetrafluoroetileno (Wilkinson Sword). Quando a bipartição não ocorreu de forma a constituir dois hemi-embriões semelhantes estas estruturas não foram consideradas. Os hemi-embriões, imediatamente após a micromanipulação, retornaram ao meio de cultivo original a condições controladas (38,8ºC, atmosfera de 5 % de CO2 e umidade saturada). Permaneceram em cultivo até o 10º dia, mas foram reavaliados a cada 24 horas. Os resultados mostraram que no experimento 1, os embriões foram bipartidos sem considerar o estádio de desenvolvimento prévio, incluindo Mórula (Mo), Blastocisto inicial (Bi), Blastocisto (Bl) e Blastocisto expandido (Bx). Utilizando embriões em todos os estádios de desenvolvimento encontrados no D6, a técnica de bipartição não disponibilizou (P>0,05) um maior número de embriões com potencial para serem transferidos no D7 ou D8, quando comparado ao grupo controle. No segundo experimento, somente embriões em estádio de Bi e Bl foram incluídos. Procedendo desta forma, o grupo bipartido disponibilizou aproximadamente 20% a mais (p<0,008) de embriões com potencial de transferência, quando comparado com o controle (120,2 ± 46,6 vs.98,3 ± 4,3%, respectivamente). Esta diferença se deveu basicamente dentro do grupo bipartido, a recuperação pós-bipartição dos embriões classificados previamente como Bls (129,9±45,5 vs. 109,5±4,7%, respectivamente, para Bl e Bi). Adicionalmente, o estudo revelou que o grupo tratado apresentou comportamento semelhante ao grupo controle, não havendo diferença estatística quanto à viabilidade embrionária entre os grupos. Conclui-se que a viabilidade após bissecção de embriões produzidos in vitro é dependente do estádio de desenvolvimento e, blastocistos aparentemente são mais resistentes ao processo.

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The aim of this study was to verify the operational viability and efficiency of splitting in a bovine embryo in vitro production program, and to evaluate the aspects related to the hemi-embryo development capacity, compared to intact embryos. Oocytes from slaughtered cow ovaries from mixed breed and undefined age, were used for the production of embryos. At the 6th of cultivation, the embryos evaluations were carried out and they were classified according to the stage of development and quality for subsequent embryo micromanipulation. The study was divided into two experiments. Initially, it was determined the operational viability of IVP technique in splitting using 243 embryos. And later, in a second experiment, it was evaluated the embryo stage and its viability after splitting using 481 embryos. With a use of a stereomicroscope coupled to mechanical micromanipulation device (Leitz), each structure was segmented and individually positioned in order to produce two halves with higher similarity. This simplified procedure of embryo splitting was performed using stainless steel blade polytetrafluoroethylene (Wilkinson Sword). When splitting does not occur forming two hemi-embryos, these structures were not considered similar. The hemi-embryos, immediately after micromanipulation, returned to the original culture medium at controlled conditions (38.8ºC, atmosphere of 5% CO2 and saturated humidity). The embryos were kept in culture until the 10th day, but they were re-evaluated every 24 hours. The results showed that in experiment 1, the embryos were split without considering the previous stage of development, including Morula (Mo), early blastocyst (Bi), blastocyst (Bl) and expanded blastocyst (Bx). Using embryos at all stages of development found in D6, the splitting technique did not provide (P> 0.05) a higher number of embryos with the potential to be transferred in D7 or D8, when compared to the control group. In the second experiment, only embryos in Bi and Bl stage were included. With this procedure, the split group provided about 20% higher (p <0.008) embryos with transfer potential compared to the control (120.2 ± 46.6 vs. 98.3 ± 4.3%, respectively ). This difference is due primarily within the bipartite group and the post-splitting recovery of embryos previously classified as Bls (129.9 ± 45.5 vs. 109.5 ± 4.7% for Bl and Bi). Additionally, the study showed that the treated group presented similar behavior to the control group, with no statistical difference in embryo viability between groups. It can be concluded that the viability after embryo bisection is dependent on the developmental stage, and blastocysts are apparently more resistant to the process.

Biblioteca responsável: BR68.1