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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203828

Resumo

A clonagem bovina por transferência nuclear de células somáticas ainda apresenta problemas ligados às elevadas perdas gestacionais. Porém, estas gestações têm sido bons modelos para estudos de fisiopatologia gestacional. Estudos prévios mostraram a ocorrência de três fenótipos após a transferência de embriões (TE) clonados por, sendo eles: (1) Gestações normais (CNG) com presença do embrião (E), vesícula embrionária (VE) e corpo lúteo (CL), (2) Gestações anembrionadas (CAG) com presença da VE e CL, e ausência do E, e (3) Receptoras com CL persistente (CPCL). O objetivo então, foi avaliar as alterações morfovasculares do CL ao longo 35 dias após a ovulação nesses três fenótipos comparando-os com gestações de embriões produzidos in vivo (grupo controle; GC). A hipótese a ser testada foi que a morfofuncionalidade do CL é dependente do grau de desenvolvimento do concepto. Vacas Bos indicus foram utilizadas como receptoras de embriões no dia 7. Exames de ultrassonografia (US) nos modos B e Doppler colorido foram realizados nas receptoras a cada dois dias no primeiro mês de gestação para análise das características morfovasculares do CL. No dia 35, as receptoras foram abatidas para coleta de amostras de tecido luteínico destinados à morfometria e Western-Blot (WB) para quantificação do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e seu receptor 2 (VEGF-R2). Foram realizados 14 ciclos de transferência de embrião em tempo fixo (TETF) onde 120 receptoras receberam 79 embriões clonados e 41 embriões produzidos in vivo. Foram obtidas doze gestações no grupo CNG (15,19%), uma no CAG (1,27%), quatro no CPCL (5,06%) e nove no GC (21,95%). Os dados ultrassonográficos não diferindo entre os grupos (p>0,05), porém mostraram uma diminuição do diâmetro e da área do CL ( 2mm e 0,5 cm² respectivamente; p<0,05) entre os dias 10 e 20 e a vascularização do CL aumentou desde o dia 6 até o dia 24 (30%; p<0,05). Um fato relevante foi a diminuição (0,5 cm²; p<0,05) da área de vascularização luteínica do grupo CNG quando comparado ao GC nos dias 32 e 34. In situ os dados de CL mostraram volume (cm³) e diâmetro (mm) (p=0,007) maiores em GC e menores em CNG. O 11 comprimento do embrião CNG teve médias em torno de 2 mm maiores que em GC (p=0,0131) de 26 a 34 dias de gestação. Pela morfometria, os grupos não diferiram entre si (p>0,05) quanto as médias das proporções de células luteínicas pequenas e grandes. Pelo WB, a quantidade relativa de VEGF no CNG obteve os maiores resultados quando comparada (p=0,025) aos outros grupos e de VEGF-R2 mostrou maiores em CPCL (p=0,006). Apesar CAG e CPCL foram semelhantes entre si, o grupo CNG mostra grandes diferenças em relação a GC quanto às características luteínicas. Em suma, este estudo fornece as bases para novas investigações sobre os aspectos que regem a interação entre o desenvolvimento do concepto e a morfofuncionalidade do CL durante a gestação inicial em bovinos.

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Bovine cloning by somatic cell nuclear transfer still presents obstacles related to high pregnancy loss. However, these pregnancies have been good models for the study of gestational pathophysiological. Previous studies have shown the occurrence of three pregnancy phenotypes after cloned embryo transfer (ET), which are: (1) Normal pregnancies (CNG) with the presence of the embryo (E), embryonic vesicle (EV) and corpus luteum (CL), (2) Anembryonic gestation (CAG) in the presence of EV and CL and absence of E, and (3) Embryo recipient with persistent CL (CPCL). The aim of this study was to evaluate the morphovascular changes of CL over the first 35 days of gestation after TE in these three phenotypes, comparing them with pregnancies obtained with in vivo produced embryos (control group; GC). The hypothesis to be tested was that CLs morphofunctionality is dependent on the degree of fetus development. Bos indicus cows were used as embryos recipient on day 7. Ultrasound (US) in the B and Doppler modes were performed every two days in the first month of gestation to examine CL morphovascular characteristics. On day 35, recipients were slaughtered and luteal tissue samples collected for morphometry and Western-Blot (WB) for quantification of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptor 2 (VEGF-R2). Fourteen Fixed-time embryo transfer (FTET) cycles were performed in witch 120 recipients received 79 cloned embryos and 41 embryos produced in vivo. This study obtained twelve pregnancies in the CNG group (15.19%), one in the CAG (1.27%), four in CPCL (5.06%) and nine in the control group (21.95%). Ultrasonographic data showed no difference between groups, but a slight decrease of diameter and CL area (p<0.05) between days 10 and 20 and luteal vascularization increased in all groups studied from day 6 to day 24 (p <0,05). A relevant fact was the decrease of the luteal vascularization area of CNG group from day 28 compared to the control group on days 32 and 34. In situ CL data showed volume (cm³) and diameter (mm) (p=0.007) higher in CG than in CNG. The embryo had greater average length (p=0.0131) in CNG group than in GC from day 26 to day 34 of gestation. By morphometry analysis, no significant differences were found (p>0.05) between the proportions of cell types among groups. At WB, the relative amount of VEGF CNG obtained the highest values and VEGF-R2 shown higher amounts in CPCL group (p=0.006). Although CAG and CPCL were similar to each other, the CNG group showed large differences from GC within the luteal characteristics. In summary, this study 13 provides the basis for further research on the aspects that govern the interaction between the development of the conceptus and CL morphofunctionality during early pregnancy in cattle

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