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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-204148

Resumo

As técnicas de criopreservação vêm sendo amplamente utilizadas visando a preservação de tecidos e células em quiescência para o retorno ao metabolismo normal. Existem poucos relatos de criopreservação em embriões de Macrobrachium amazonicum, assim como as injúrias que este processo pode causar durante o desenvolvimento embrionário. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi analisar os efeitos dos agentes crioprotetores e do resfriamento no estádio VIII desta espécie. Fêmeas ovígeras tiveram seus ovos e embriões retirados da câmara incubadora e pesados (0,01 g), em seguida foramcolocados em tubos Falcon® com solução crioprotetora e solução salina livre de cálcio.Os ovos e embriões foram levados para caixas térmicas e resfriados a5 °C por duas horas, ao término, foram lavados em água corrente e transportados para incubadoras, onde permaneceram por 24 horas.Uma alíquota foi fixada com formol 4% e, em seguida passou pelo processo de histologia clássica, com cortes de3 m de espessura e analisada em microscópio Leica DM 2000. Outra alíquota foi utilizada para a avalição biométrica, em que comprimento, largura e volume foram medidos e analisados em microscópio estereoscópico Leica DFC 295,utilizando o programa LAS V3.6. Os agentes crioprotetores utilizados foram: dimetilsulfóxido (1, 5 e 10 %), álcool metílico (1, 5 e 10 %), etilenoglicol (1, 5 e 10 %) e sacarose (0,5 M). Foi realizada análise de variância seguida do teste Tukey, com nível de significância de 5%. O dimetilsulfóxido (DMSO) foi o crioprotetor que menos afetou a sobrevivência dos embriões com taxas de 71,8%, 36,2%e 0% para as concentrações de 1%, 5% e 10%, respectivamente. O etilenoglicol causou 100% de mortalidade em todas as concentrações utilizadas. No tratamento com DMSO 10% foram observadas as menores medidas para comprimento e volume, comparado com as outras concentrações de DMSO utilizadas. Os ovos resfriados em álcool metílico 10% tiveram as menores medidas para comprimento, largura e volume.Não foi observada diferença estatística significativa no comprimento dos ovos resfriados nas três concentrações de etilenoglicol. Não foi possível observar nesse trabalho a interferência do resfriamento e dos crioprotetores utilizados sobre as estruturas embrionárias

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The cryopreservation techniques have been widely used with the intention of preserving tissues and cells in quiescence for the return to normal metabolism. There are few reports of cryopreservation Macrobrachium amazonicum embryos, as well as injuries that this process can cause during embryonic development. Thus, the aim of this study was to analyze the effects of cryoprotectants agents and cooling in stage VIII of this species. Ovigerous females eggs andembryos were removed from the incubator chamber and weighed (0.01g), then were placed in Falcon® tubes with cryoprotectant solution and saline-free calcium solution. Eggs and embryos were in ice coolers and cooled to 5 °C then were stored for a period of two hours, at the end, were washed with tap water to remove the ACP and acclimated for 5 minutes in water at room temperature and then transferred to 50 ml incubators, where they remained for 24 hours. An aliquot was fixed with 4% formaldehyde and then passed through the histology procedure with 3 mm thick sections, stainded with hematoxylin/eosin and analyzed in a Leica DM 2000. Another aliquot was used for biometric analyse, where length, width and volume were measured and analyzed in stereoscopic microscope Leica DFC 295, using the LAS program V3.6. The cryoprotectants agents used were: dimethylsulfoxide (1, 5 and 10%), methyl alcohol (1, 5 and 10%), ethylene glycol (1, 5 and 10%) and sucrose (0.5 M). Variance analysis was used, followed by the Tukey test at 5% significance level. The dimethylsulfoxide (DMSO) cryoprotector was affected less embryo survival with rates of 71.8%, 36.2% and 0% for concentrations of 1%, 5% and 10%, respectively. The ethylene caused 100% mortality at all the concentrations used. Treatment with 10% DMSO were observed minor measures to length and volume, compared with other DMSO concentrations used. Colds eggs to methyl alcohol 10% had lower measures for length, width and volume. There was no statistically significant difference in the length of colds eggs in the three ethylene glycol concentrations. It was not possible to observe this work interference cooling and cryoprotectants used on embryonic structures

Biblioteca responsável: BR68.1