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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-204268

Resumo

Introdução: A Obstrução Recorrente das Vias aéreas (ORVA) é uma doença inflamatória e obstrutiva, comum em cavalos adultos estabulados. Objetivo: Estudar a recuperação de células mononucleares na coleta de medula óssea do esterno de equinos em idade avançada, e avaliar a segurança e a resposta a nível celular das células mononucleares derivadas de medula óssea (CMDMO) como tratamento de cavalos com ORVA crônica. Material e Métodos: Previamente ao experimento, quatro animais tiveram a medula óssea coletada sob sedação com acepromazina, xilazina e cloridrato de petidina, obtendo-se 200 mL de medula óssea a partir do esterno. Aliquotas de 500 L da primeira e da última seringa coletadas, em cada ponto de punção, foram armazenadas para contagem do número total de células nucleadas. Para o tratamento da ORVA, oito cavalos foram incluídos no estudo, divididos aleatoriamente em grupo tratado com única instilação traqueal de CMDMO (Gcel) e outro com terapia convencional de dexametasona oral por 21 dias (Gdex). Os tratamentos iniciaram a partir da confirmação do quadro clínico e os animas foram avaliados antes do início do tratamento (0 dia), aos 7 e 21 dias. Após a sedação com detomidina e cloridato de petidina, coletou-se o fluido do lavado broncoalveolar (LBA) com instilação de 500 mL de solução salina estéril a 37°C. A partir do fluido do LBA foi feita análise de volume recuperado, avaliação citológica total e diferencial, atividade dos macrófagos alveolares (adesão e fagocitose), mensuração de interleucina 1 e fator de necrose tumoral , e apoptose celular. Resultados: Foi possível a obtenção de 200 mL de medula por animal, por meio de duas até quatro punções. A média para a primeira seringa de cada punção foi de 41,73 x 106 células vs. 5,88 x 106 células para a última seringa (p<0,0001). Para o estudo da ORVA, em ambos os tratamentos a percentagem de neutrófilos reduziu significativamente na avaliação dos 7 dias (Gdex: 15,7±6,8% vs. 63,0±12,8%, p<0,0001 Gcel:19,0 ±20% vs. 53,2±19,8%, p=0,004) e 21 dias (Gdex: 15,0±9,9% vs. 63,0±12,8%, p<0,0001 Gcel: 22,0±28,5% vs. 53,2±19,8%, p=0,023) em comparação com a avaliação inicial. Essa diminuição foi acompanhada pelo aumento significativo no número de macrófagos alveolares, igualmente aos 7 dias (Gdex: 61,2±7,4% vs. 24,2±10,7%, p<0,0001 Gcel: 52,2±17,4% vs. 24,7±5,3%, p=0,0012) e 21 dias (Gdex: 60,0±20,2% vs. 24,2±10,7%, p=0,0006 Gcel: 54,7±21,5% vs. 24,7±5,3%, p=0,0026). A adesão e a fagocitose do macrófago alveolar apresentaram aumento significativo apenas no grupo Gdex (p<0,05). Já a secreção de interleucina 1 foi menor no grupo Gcel quando comparado ao Gdex aos 7 dias (p=0,0077) e 21 dias de tratamento (p=0,0020). A apoptose celular diminuiu significativamente em ambos os grupos aos 21 dias (Gdex p=0,0039 Gel p=0,0285). Conclusão: Houve redução do número de células mononucleares após sucessivas aspirações de medula óssea em um mesmo ponto de coleta. O tratamento com CMDMO se mostrou seguro, melhorou o perfil celular no fluido do LBA de cavalos com ORVA, diminuiu a secreção de IL-1 e interferiu positivamente na atividade do macrófago alveolar.

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Introduction: Recurrent Airway Obstruction (RAO) is an inflammatory and obstructive disease, common in adult stabled horses. Objective: Study the recovery of mononuclear cells in the bone marrow collection from the sternum in animals with advanced age, and evaluate the safety and response at the cellular level of bone marrow-derived mononuclear cells (BMDMC) as a treatment of horses with chronic RAO. Material and Methods: Prior to the experiment, four animals had the bone marrow collected under sedation with acepromazine, xylazine and hydrochloride of pethidine for the collection of 200 mL of bone marrow from the sternum. Aliquots of 500L from the first and last syringe collected in each punction point were stored for counting to the total number of nucleated cells. For the treatment of RAO, eight horses were studied, randomly divided into the group treated with a single tracheal instillation of BMDMC (Gcel) or treated with conventional therapy of oral dexamethasone for 21 days (Gdex). The treatments started from the confirmation of the disease and the animas were evaluated before treatment (0 day), after 7 and 21 days. After sedation with detomidine and hydrochloride of pethidine, it was collected the bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, instilling 500 mL of a sterile saline solution at 37 °C. From the BAL fluid was made the recovered volume analysis, cytological analysis with total and differential cell count, activity of alveolar macrophages (adhesion and phagocytosis), interleukin-1 and tumor necrosis factor mensuration, and cell apoptosis. Results: It was possible to obtain 200 mL of bone marrow per animal, with two to four punctures. The mean for the first syringe was 41.73 x 106 cells vs. 5.88 x 106 cells for the last syringe (p<0.0001). For the study of RAO, in both treatments the percentage of neutrophils was significantly reduced after 7 days (Gdex: 15,7±6,8% vs. 63,0±12,8%, p<0,0001 Gcel: 19,0±20% vs. 53,2±19,8%, p=0,004) and 21 days (Gdex: 15,0±9,9% vs. 63,0±12,8%, p<0,0001 Gcel: 22,0±28,5% vs. 53,2±19,8%, p=0,023) compared to baseline. This reduction was accompanied by a significant increase in alveolar macrophages also after 7 days (Gdex: 61,2±7,4% vs. 24,2±10,7%, p<0,0001 Gcel: 52,2±17,4% vs. 24,7±5,3%, p=0,0012) and 21 days (Gdex: 60,0±20,2% vs. 24,2±10,7%, p=0,0006 Gcel: 54,7±21,5% vs. 24,7±5,3%, p=0,0026). The adhesion and phagocytosis of alveolar macrophages increased significantly only in Gdex group (p<0,05). The secretion of interleukin 1 was lower in the Gcel group compared to Gdex group at 7 days (p=0,0077) and 21 days of treatment (p=0,002). Cell apoptosis was significantly decreased in both groups in the 21 days evaluation (Gdex p=0,0039 - Gcel p=0,0285). Conclusion: There was a reduction in the number of nucleated cells after repeated aspirations at the same puncture. The treatment with BMDMC was safe, improved BAL cell profile, reduced IL-1 secretion and positive influenced the activity of alveolar macrophage.

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