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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-205286

Resumo

A proteômica permite a determinação do perfil das proteínas expressas diferencialmente no hospedeiro em resposta à infeção viral, podendo ser aplicada como ferramenta na investigação das respostas moleculares do camarão branco Litopenaeus vannamei frente à infecção pelo vírus da síndrome da mancha branca (WSSV), possibilitando, assim, traçar estratégias eficazes para minimizar seu impacto nos cultivos. No presente trabalho, camarões livres de patógenos específicos (n=180), de aproximadamente 13 gramas, foram aclimatados em aquários individuais por sete dias e, em seguida, foram infectados experimentalmente com 1,3 x 104 cópias virais de WSSV. O período de acompanhamento da infecção foi de 56 dias, período este em que foram coletados pleópodos dos animais mortos. Aos 56 dias após a infecção experimental, a hemolinfa e os pleópodos dos animais sobreviventes (um total de 6%) foram coletados. Os pleópodos foram submetidos a extração de DNA para quantificação da carga viral por qPCR. A hemolinfa de nove animais que sobreviveram a infecção experimental foi centrifugada para a separação do plasma dos hemócitos. O mesmo procedimento foi realizado com amostras da hemolinfa dos mesmos animais coletadas antes do desafio viral. As proteínas extraídas dos hemócitos foram quantificadas pelo método de Bradford modificado e submetidos à eletroforese bidimensional (2-DE). Proteínas diferencialmente expressas em hemócitos dos animais tolerantes a infecção com WSSV, foram determinadas por análise comparativa das proteínas presentes antes e após o desafio viral, após a coloração e a análise densitométrica dos respectivos géis. Um total de 73 proteínas diferencialmente expressas (p<0,05) foram selecionadas. A identificação foi realizada por análise em espectrômetro de massa MALDI-TOF/PMF e para a linha de corte na a identificação das proteínas foi considerado o escore >50. O perfil diferencial de proteínas aqui determinado auxilia na compreensão das alterações metabólicas e das respostas moleculares de camarões L. vannamei que apresentaram maior tolerância ao agente viral. Desta forma, as proteínas identificadas podem subsidiar o delinemaneto de estratégias que contribuam tanto para a seleção de indivíduos menos susceptíveis ao WSSV, como para minimizar o impacto do vírus sobre os cultivos.

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Proteomics allows the determination of the profile of proteins expressed differentially in the host response to viral infection and can be applied as a tool to investigate the molecular responses of white shrimp Litopenaeus vannamei to infection by the virus of white spot syndrome (WSSV), enabling, thus draw effective strategies to minimize their impact on crops. In this study, free shrimp specific pathogens (n = 180), approximately 13 grams, were acclimated in individual tanks for seven days and then were experimentally infected with 1.3 x 104 viral copies of WSSV. The follow-up period of infection was 56 days, a period in which they were collected pleopods of dead animals. After 56 days after experimental infection, the hemolymph and pleopods of surviving animals (a total of 6%) were collected. Pleopods were subjected to DNA extraction to quantify the viral load by qPCR. The hemolymph of nine animals that survived an experimental infection was centrifuged for separation of plasma from hemocytes. The same procedure was performed with hemolymph samples collected from the same animals prior to viral challenge. The proteins extracted from hemocytes was quantified by modified Bradford method and subjected to two-dimensional electrophoresis (2-DE). Proteins differentially expressed in hemocyte of animals tolerant infection with WSSV, were determined by comparative analysis of the protein present before and after viral challenge, after staining, and densitometric analysis of the respective gels. A total of 73 differentially expressed proteins (p <0.05) were selected. Identification was performed by analysis by mass spectrometry MALDI-TOF / PMF and the cutting line on the identification of proteins was considered a score of> 40. The proteins here determined differential profile helps in understanding the metabolic and molecular responses of L. vannamei shrimp of higher tolerance to the viral agent. Thus, the identified proteins may subsidize the delinemaneto strategies which contribute both to the selection of individuals less susceptible to WSSV as to minimize the impact of the virus.

Biblioteca responsável: BR68.1