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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-206289

Resumo

Recentemente, R. microplus tem ampliado a sua distribuição a altitudes maiores na Colômbia. A identificação dos mecanismos de resistência a acaricidas é requerida, e também do diagnóstico e dos candidatos a vacina dos patógenos transmitidos Babesia bovis e Anaplasma marginale. Restrições devidas a patentes e requirementos da bolsa de doutorado estabeleceram três capítulos à tese de DSc. Capítulo 1: Deteção de genes de resistência a piretroides sintéticos e de Babesia spp. em amostras de Rhipicephalus microplus e sangue bovino da Colômbia. Amostras de Rhipicephalus microplus (teleoginas e larvas) e de sangue bovino foram coletadas de fazendas selecionadas em 8 municípios na Colômbia. Uma triagem por PCR procurando mutações nos genes CzEst9 e IIIS6, os quais conferem resistência a piretroides sintéticos, mostrou que todas as amostras de carrapatos foram heterozigóticas para CzEst9 e a maioria mostraram suscetibilidade para IIIS6. Uma triage por nested PCR para a deteção dos genes rra de Babesia bovis e rap-1c de B- bigemina resultou em bandas adicionais evitando evidência conclusiva. Capítulo 2: Processo de transformação de Pichia pastoris KM71 com o gene sintético H1Bbo23290 derivado da proteina RAP-1 de Babesia bovis. O processo de transformação de Pichia pastoris KM71 com H1Bbo23290 (um candidato vicinal promissório contra a babesiose bovina) não foi bem sucedido. A extração de DNA plasmidial e a sua posterior linharização foram os maiores obstáculos. Capítulo 3: Resposta immune bovina produzida pelas proteínas da membrana externa de Anaplasma marginale OPM7, OMP8, e OMP9 da cepa St. Maries em novilhos experimentais confinados e imunizados. As proteínas OMP7, OMP8, e OMP9 de A. marginale e A. centrale foram usadas para testar a presença de potenciais sequencias conservadas. As proteínas recombinates e seus peptídeos superpostos periódicamente foram usados em ensaios de proliferação de células T. Epítopes de células T, imunogênicos e conservados foram identificados.

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Recently, R. microplus has extended its distribution to higher altitudes in Colombia. Proper identification of acaricide resistance mechanisms is required, as well as tickborne diseases diagnosis and vaccine candidates for Babesia bovis and Anaplasma marginale. Patent restrictions and the scholarship funding requirements established three separated, but related, chapters for the DSc thesis. Chapter 1: Detection of genes to synthetic pyrethroids resisntance and Babesia spp. in Rhipicephalus microplus and cattle blood samples from Colombia. Samples of R. microplus (engorged females and larvae) and cattle blood were collected from selected farms in 8 municipalities in Colombia. A PCR screening for mutations on CzEst 9 and IIIS6 genes that confer synthetic pyrethroid resistance showed all tick samples had a heterozygous genotype to CzEst9 and most of the samples had an IIIS6 susceptible genotype. A nested PCR screening for detection of B. bovis rra and B. bigemina rap-1c genes resulted in unexpected bands prevented conclusive evidence. Chapter 2: Transformation process of Pichia pastoris KM71 with the synthetic gene H1Bbo23290 derivative from Babesia bovis RAP-1 protein. The transformation process of Pichia pastoris KM71 with H1Bbo23290 (a promising vaccine candidate against bovine babesiosis) was unsuccessful. Plasmid DNA extraction and subsequent linearization were the major obstacles. Chapter 3: Bovine immune response produced by OMP7, OPM8, and OMP9 Outer Membrane proteins from Anaplasma marginale St. Maries strain in confined experimental immunized animals. OMP7, OMP8, and OMP9 proteins were used to test potential conserved sequences containing CD4 T-cell epitopes. Using in vitro T-cell proliferation assays to test recombinant A. marginale and A. centrale OMP7, OMP8, and OMP9, and their overlapping peptides spanning each protein, conserved immunogenic T-cell epitopes were been identified in some peptides.

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