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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-207562

Resumo

O leite e o queijo caprino artesanal em muitos casos são manipulados inadequadamente, propiciando o crescimento de Staphylococcus aureus. Assim, este estudo objetivou a identificação com análise de genes de virulência e o perfil de resistência antimicrobiana de S. aureus provenientes de leite e queijo artesanal caprino. A colheita das amostras ocorreu em sete municípios do semiárido: Petrolina-PE, Santa Filomena-PE, Santa Maria da Boa Vista-PE, Dormentes-PE, Afrânio-PE, Juazeiro-BA e Uauá-BA (totalizando 70 amostras de leite e 30 de queijo). Subsequente, fez-se as análises microbiológicas e a caracterização bioquímica dos isolados. Determinou-se também, o Índice de Resistência Múltipla aos Antimicrobianos (IRMA). Em seguida, foram realizados testes para qualificação e quantificação de formação de biofilmes, assim como produção de exopolissacarídeos (EPS) e hidrofobicidade. Para a confirmação da espécie, foi realizada a análise molecular seguida do sequenciamento. A fim de identificar os isolados com resistência antimicrobiana, utilizou-se os genes mecA e blaZ. E para a detecção dos genes de virulência foi conduzida Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) com genes icaA ,icaD, SEA a SEE. No leite e queijo caprino, as médias encontradas para S. aureus nas amostras foram de 4,53 log10 Unidades Formadoras de Colônia/grama (UFC/g) e 6,47 log10 UFC/g, respectivamente. Vinte isolados foram caracterizados fenotipicamente e molecularmente como S. aureus. Estes isolados apresentaram múltipla resistência aos antimicrobianos, tanto no teste com antimicrobianos em disco como também no de microdiluição. No teste de produção de biofilme, os 20 isolados foram classificados como produtores, e dois como fortes produtores. Na análise de produção de EPS, todos foram produtores. Para o teste de hidrofobicidade, todos isolados foram considerados hidrofóbicos, sendo sete isolados identificados como altamente hidrofobicos. Em relação ao gene mecA todos isolados foram negativos. Para o gene blaZ, apenas três isolados foram positivos. Para os genes de virulência como o icaA, nenhum isolado foi positivo, entretanto para icaD, apenas um isolado apresentou positividade. Com relação às enterotoxinas, 12 e 14 isolados foram positivos para a SEC e SED, respectivamente. S. aureus são responsáveis pela intoxicação alimentar. Além disso, sua capacidade diferenciada na propagação genes de resistência antimicrobiana provoca preocupação global pelo aumento de seus fatores de virulência, dificultando seu controle e a eficácia nos tratamentos.

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Milk and goat cheese in many cases are handled improperly, leading to the growth of Staphylococcus aureus. Thus, this study aimed at the identification with virulence gene analysis and antimicrobial resistance profile of S. aureus from goat milk and artisanal cheese. Samples were collected in seven municipalities of Petrolina-PE, Santa Filomena-PE, Santa Maria da Boa Vista-PE, Dormentes-PE, Afrânio-PE, Juazeiro-BA and Uauá-BA (totaling 70 samples of milk and 30 of cheese). Subsequently, the microbiological analyzes and biochemical characterization of the isolates were carried out. The Multiple Antimicrobial Resistance Index (IRMA) was also determined. Subsequently, tests were carried out for the qualification and quantification of biofilm formation, as well as exopolysaccharide (EPS) production and hydrophobicity.For the confirmation of the species, the molecular analysis followed the sequencing. In order to identify isolates with antimicrobial resistance, the mecA and blaZ genes were used. And for the detection of virulence genes, Polymerase Chain Reaction (PCR) with icaA, icaD, SEA and SEE genes was conducted. In the milk and goats, the mean values found for S. aureus in the samples were 4.53 log10 colony forming units / gram (CFU / g) and 6.47 log10 CFU / g, respectively. Twenty isolates were characterized phenotypically and molecularly as S. aureus. These isolates showed multiple antimicrobial resistance, both in the antimicrobial test as well as in the microdilution test. In the biofilm production test, the 20 isolates were classified as producers, and two as strong producers. In the analysis of EPS production, all were producers. For the hydrophobicity test, all isolates were considered hydrophobic, with seven isolates identified as highly hydrophobic. Regarding the mecA gene, all isolates were negative. For the blaZ gene, only three isolates were positive. For virulence genes such as icaA, no isolates were positive, however for icaD, only one isolate showed positivity. For enterotoxins, 12 and 14 isolates were positive for SEC and SED, respectively. S. aureus are responsible for food poisoning. In addition, its differentiated capacity in the propagation of antimicrobial resistance genes causes global concern for the increase of its virulence factors, hindering its control and effectiveness in the treatments.

Biblioteca responsável: BR68.1