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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-207885

Resumo

A resposta imune aviária pode ser dividida em resposta imune inata e adquirida. A imunidade inata é a primeira linha de defesa contra patógenos microbianos e possui como um de seus componentes moleculares os receptores de reconhecimento de padrão (PRRs). Três famílias dos PRRs têm sido maior alvo de pesquisas nas aves: os receptores semelhantes ao Toll (TLR), receptores semelhantes ao NOD (NLR) e os receptores semelhante a RIG-1 (RLR). Estruturas denominadas Padrão Molecular Associado ao Patógeno (PAMP) e Padrão Molecular Associado ao Dano (DAMP) são reconhecidos por esses receptores, induzem respostas imunes inatas e podem modular a imunidade adquirida. O objetivo deste trabalho foi selecionar PAMPs e DAMPs agonistas de PRRS das aves,analisar in silico sequências genéticas do PAMP flagelina e DAMP HSP70 das aves, clonar e expressar de de forma recombinante esses agonistas. O modelo de clonagem e expressão utilizado para a geração do PAMP e DAMP alvos desta pesquisa, pET100-D/TOPO, clonados em E. coli TOP10 e expressos em E. coli C4 (DE3) e C43 (DE3) mostrou ser eficiente, e ambas as proteínas foram expressas e confirmadas por Western Blotting. Os resultados da caracterização in silico realizadas para as proteínas expressas justificaram a adoção do fragmento genético das sequências da flagelina e HSP70 devido a seleção de uma região de cada agonista que foi traduzida em uma proteína com características físico-químicas e imunológicas viáveis para sua adoção como imunobiógicos das aves. Os resultados obtidos nesta tese aumenta a possibilidade de obter novos ensaios in vitro e in vivo que visam analisar PAMPs e DAMPs recombinantes como estimulantes dos componentes do sistema imune inato das aves e desta forma atuarem como possíveis adjuvantes vacinais.

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The immune responses of birds are carried out in coordination by the innate and acquired immune systems. The innate immunity is the first line of defense against microbial pathogens, and is structured with cells equipped with receptors for pattern recognition (PRR). Three families of PRR have been the subject of research in birds: Toll-like receptors (TLR), NOD-like receptors (NLR), and RIG-1-like receptors (RLR). Structures known as Pathogen Associated Molecular Pattern (PAMP), present in pathogens, and Damage Associated Molecular Standard (DAMP), present in the damaged tissue, are recognized by cells with these receptors, and induce innate immune responses which will modulate the acquired immunity. The objective of this work was to perform a review that addresses the intrinsic characteristics of the innate immune system of birds, pointing out the mechanisms of action of PRRs in avian species, and consider the perspective of studies aimed at improving the vaccine responses through the adoption of PAMPs and DAMPs as adjuvants. In addition, we aimed at selecting and analyzing in silico the genetic sequences of the flagellin (PAMP) and HSP70 (DAMP) from birds and to produce these PRR agonists through genetic engineering. The in silico expressed proteins characterization results justified the adoption of the genetic fragment of the fljB (flagellin encoding) and HSP70 gene sequences. The selected region was chosen considering the ideal physico-chemical and immunological characteristics of the translated segment and considering the immunogenicity to birds. The expression system pET100-D / TOPO was used for the generation of flagellin and HSP70 and subsequently cloned in E. coli TOP10. Using E. coli C4 (DE3) and C43 (DE3) for expression, the system showed to be efficient, enabling both proteins be correctly expressed and confirmed by western blotting. The results obtained indicate the possibility of using the recombinant proteins for the immunomodulation in birds. In vitro and In vivo studies are needed aiming at analyzing recombinant PAMPs and DAMPs as stimulants of the innate immune system of birds and their potential use as vaccine adjuvants

Biblioteca responsável: BR68.1