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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-208228

Resumo

No Brasil, infecções naturais por Plasmodium spp. foram diagnosticadas em primatas não humanos em todas as regiões. Apesar da existência de uma grande diversidade de primatas neotropicais na Amazônia brasileira, estudos sobre infecções por esses agentes ainda são incipientes. Portanto, o objetivo do estudo foi pesquisar a frequência da infecção natural por Plasmodium spp. em primatas não humanos nascidos em vida livre e mantidos em cativeiro na Amazônia Ocidental. Amostras de sangue total foram coletadas de 98 primatas não humanos pertencentes às famílias Aotidae (n=1), Atelidae (n=40), Callitrichidae (n=3), Cebidae (n=49) e Pitheciidae (n=5). A extração de DNA genômico das amostras foi realizada com um kit comercial. A detecção de DNA de Plasmodium vivax e Plasmodium falciparum foi realizada por Semi-Nested PCR. Os produtos amplificados foram purificados e sequenciados. As sequências consenso foram submetidas ao BLASTn para determinação da identidade das sequências obtidas em relação as sequências armazenadas no GenBank. Para confirmar a identidade das sequência de DNA, múltiplos alinhamentos foram realizados para construção de uma árvore filogenética. DNA de Plasmodium spp. foi detectado em 6,12% (6/98) dos primatas examinados, sendo que em 4,08% (4/98) foi detectado DNA de P. falciparum e 2,04% (2/98) de P. vivax. As maiores frequências de infecções por P. falciparum foram detectadas em calitriquídeos (33,33%), seguido por cebídeos (4,08%) e atelídeos (2,5%), enquanto que DNA de P. vivax foi observado somente em atelídeos (5%). Não foram diagnosticadas co-infecções nos primatas examinados. A busca por homologia utilizando o algoritmo BLASTn revelou 99% de identidade entre as sequências parciais do gene 18S rRNA dos dois isolados de P. vivax de Lagothrix cana do Amazonas e as sequências de isolados de P. vivax disponíveis no GenBank. As sequências parciais do gene 18S rRNA dos isolados de P. falciparum de Saimiri ustus, Saguinus bicolor, Sapajus sp. e L. cana revelaram identidades de 100%, 99%, 99% e 97%, respectivamente, com as sequências de isolados de P. falciparum disponíveis no GenBank. A análise filogenética demonstrou a homologia das sequências de P. vivax obtidas dos dois L. cana do Amazonas que foram agrupadas em um clado juntamente com outras sequências de P. vivax. As quatro sequências de P. falciparum obtidas no estudo agruparam em um mesmo clado com outros três isolados de P. falciparum. Pode-se concluir que os primatas não humanos estão infectados por Plasmodium spp. nas áreas estudadas, sendo relatada pela primeira vez a infecção por P. vivax em um primata não humano (L. cana) na Amazônia brasileira e a infecção por P. falciparum em S. bicolor. Estudos sobre os agentes etiológicos da malária são importantes não somente para a saúde pública, mas também para a conservação de espécies de primatas não humanos.

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In Brazil, natural infections by Plasmodium spp. were diagnosed in non-human primates in all regions. Despite the existence of a great diversity of neotropical primates in the Brazilian Amazon, studies on infections by these agents are still incipient. However, the objective of the study was to search the frequency of natural infection by Plasmodium spp. in non-human primates born in free-living and kept in captivity in the Western Amazon. Total blood samples were collected from 98 non-human primates belonging to the families Aotidae (n=1), Atelidae (n=40), Callitrichidae (n=3), Cebidae (n=49) and Pitheciidae (n=5). DNA extraction from the samples was performed with a commercial kit. DNA detection of Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum was performed by Semi-Nested PCR. The amplified products were purified and sequenced. The consensus sequences were subjected to BLASTn to determine the identity of the sequences obtained with respect to the sequences stored in GenBank. To confirm the identity of the DNA sequences, multiple alignments were made to construct a phylogenetic tree. DNA of Plasmodium spp. was detected in 6,12% (6/98) of the primates examined, being detected in 4.08% (4/98) of these animals DNA of P. falciparum and in 2.04% (2/98) DNA of P. vivax. The highest frequencies of infections by P. falciparum were detected in callitrichids (33.33%), followed by cebids (4.08%) and atelids (2.5%), whereas P. vivax DNA was observed only in atelids (5%). No co-infections were detected in the examined primates. The search by homology using the BLASTn algorithm revealed 99% identity between the 18S rRNA gene partial sequences of the two isolates of P. vivax in Lagothrix cana from the Amazonas and the sequences of the isolates of P. vivax available from GenBank. The 18S rRNA gene partial sequences of P. falciparum isolates from Saimiri ustus, Saguinus bicolor, Sapajus sp. and L. cana showed identities of 100%, 99%, 99% and 97%, respectively, with the sequences of P. falciparum isolates available from GenBank. Phylogenetic analysis demonstrated the homology of P. vivax sequences obtained of two L. cana from the Amazonas that were clustered together with others P. vivax sequences. The four P. falciparum sequences obtained in the study grouped in the same clade with three other P. falciparum isolates. It can be concluded that non-human primates are infected by Plasmodium spp. in the studied areas, being reported for the first time the infection by P. vivax in a non-human primate (L. cana) in the Brazilian Amazon and P. falciparum infection in S. bicolor. Studies about the etiological agents of malaria are important not only for public health but also for the conservation of species of non-human primates.

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