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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-208473

Resumo

As doenças vesiculares são de grande importância para a Medicina Veterinária. A febre aftosa, a doença vesicular suína, o exantema vesicular suíno e a estomatite vesicular são doenças vesiculares clássicas de etiologia viral. Na família Picornaviridae estão incluídos o vírus da febre aftosa e o vírus da doença vesicular suína que ocasionam lesões vesiculares em suínos. Entretanto, dois estudos realizados no Canadá e nos EUA a partir de 2008 identificaram uma nova espécie de picornavírus, denominada Senecavirus A, como o mais provável agente etiológico de doença vesicular, similar à febre aftosa, em suínos. No final de 2014 e início de 2015 houve diversos relatos de doença vesicular em suínos nas fases de creche e terminação, além do aumento da incidência de doença multissistêmica em leitões, com altas taxas de mortalidade, nos principais estados brasileiros produtores de suínos. O objetivo deste estudo foi investigar a infecção natural pelo Senecavirus A em suínos de diferentes categorias de produção provenientes de granjas dos estados brasileiros de maior importância para a suinocultura. Para isso foram realizados três estudos. O primeiro estudo teve como objetivo investigar a infecção pelo Senecavirus A em surtos de doença vesicular de origem desconhecida em suínos das categorias de creche e adultos. Um conjunto de primers específico para amplificar um produto de 542 pb da região VP3/VP1 do genoma do vírus foi desenhado para ser utilizado na técnica de RT-PCR. Amostras clínicas de suínos foram coletadas em oito granjas com surto da doença vesicular, incluindo fluido vesicular (n=4), swabs de vesículas rompidas (n=7) e raspados de lesões ulcerativas (n=5). Foram também analisadas raspados de pele (n=52) de suínos assintomáticos provenientes de granjas com e sem histórico da doença. Os agentes virais de doenças vesiculares clássicas foram investigados e não foram detectados. O RNA do Senecavirus A foi detectado em todas as amostras (16/16) provenientes de animais acometidos pela doença vesicular, enquanto nenhuma das amostras de animais assintomáticos foram positivas para o vírus. O segundo e o terceiro estudos descrevem, respectivamente, novas manifestações clínicas associadas ao Senecavirus A assim como os achados patológicos, imunohistoquímicos e moleculares associados à infecção, ambos em leitões neonatos com 1 a 5 dias de idade. No segundo estudo, foram analisadas amostras de órgãos/tecidos (n=81) e de fezes (n=6) de 10 leitões, provenientes de cinco granjas dos estados do Paraná, Santa Catarina e Mato Grosso do Sul. O terceiro estudo é complementar ao segundo e foram incluídas amostras clínicas de mais dois leitões provenientes dos estados de São Paulo e Santa Catarina, totalizando 102 amostras de órgãos/tecidos e 8 amostras de fezes. Todos os leitões incluídos nos estudos manifestaram sinais clínicos de fraqueza, letargia, salivação excessiva, hiperemia cutânea, sinais neurológicos, diarreia e/ou morte espontânea. Em conjunto, os resultados desses dois estudos revelaram que os achados de necropsia mais comuns foram impressão das costelas em pulmões (n=9), glossite diftérica (n=6) e lesões ulcerativas na banda coronária (n=5). A histopatologia revelou pneumonia intersticial (n=12), miocardite (n=6), glossite diftérica (n=3), encefalite (n=3) e atrofia das vilosidades intestinais com vacuolização das células epiteliais superficiais (n=6). A imunohistoquímica com anticorpos monoclonais específicos para Senecavirus A demonstrou imunorreatividade no plexo coróide do cérebro, epitélio degenerado de lesões ulcerativas da língua, uroepitelio do rim e vesícula urinária e nas células superficiais do intestino e em vários tecidos dos leitões; os ensaios moleculares para os outros vírus avaliados apresentaram resultados negativos. Os estudos descrevem pela primeira vez a infecção pelo Senecavirus A fora da América do Norte e sugerem que o vírus seja o agente causal dos surtos de doença vesicular descritos no Brasil, bem como a participação do vírus em múltiplas lesões observadas em leitões neonatos, caracterizando-se como um vírus pantrópico capaz de causar doença multissistêmica em suínos infectados precocemente.

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Vesicular diseases are of great importance for Veterinary Medicine. Foot-and-mouth disease, swine vesicular disease, vesicular exanthema of swine, and vesicular stomatitis are classical vesicular diseases of viral etiology. In the Picornaviridae family are included the foot-and-mouth disease virus and swine vesicular disease virus that cause vesicular lesions in pigs. However, two studies conducted in Canada and in the United States from 2008 identified a new species of picornavirus, known as Senecavirus A, as the most likely etiological agent of vesicular disease, similar to foot-and-mouth disease, in swine. At the end of 2014 and early 2015 there were several reports of vesicular disease in pigs at nursery and finishing ages, as well as an increasing in the incidence of multisystemic disease in piglets with high mortality rates in the major Brazilian pig-producing states. The objective of this study was to investigate the natural infection by Senecavirus A in pigs of different production categories from herds of the Brazilian states of greater importance for pork industry. Three studies were carried out. The first study aimed to investigate the Senecavirus A infection in outbreaks of vesicular disease of unknown etiology in weaned and adult pigs. A specific primer set for amplifying a 542 bp product from the VP3/VP1 region of the virus genome was designed for use in the RT-PCR technique. Clinical samples of pigs were collected from eight farms with vesicular disease outbreak, including vesicular fluid (n=4), swabs of ruptured vesicle (n=7), and scrapping of ulcerative lesions (n=5). Cutaneous scrappings (n=52) of asymptomatic pigs from farms with and without vesicular disease history were also analyzed. The viral agents of classic vesicular diseases were investigated and were not detected. Senecavirus A RNA was detected in all samples (16/16) of vesicular disease-affected animals, while none of the samples from asymptomatic pig were positive for the virus. The second and third studies describe, respectively, new clinical manifestations associated with Senecavirus A and pathological, immunohistochemical, and molecular findings associated with infection, both in neonatal piglets at 1 to 5 days of age. In the second study, organ/tissue samples (n=81) and feces (n=6) of 10 piglets from five herds of the states of Paraná, Santa Catarina, and Mato Grosso do Sul were analyzed. The third study is complementary to the second, and clinical samples of two more piglets from the states of São Paulo and Santa Catarina were included, totalizing 102 organ/tissue samples and 8 fecal samples. All piglets included in the studies showed clinical signs of weakness, lethargy, excessive salivation, cutaneous hyperemia, neurological signs, diarrhea, and/or spontaneous death. Overall, the results of these two studies revealed that the most common necropsy findings were faint rib impressions on the pleural surface of the lungs (n=9), diphtheritic glossitis (n=6), and ulcerative lesions at the coronary band (n=5). Histopathology revealed interstitial pneumonia (n=12), myocarditis (n=6), diphtheritic glossitis (n=3), encephalitis (n=3), and atrophy of intestinal villi with vacuolation of the superficial epithelial cells (n=6). Immunohistochemistry with monoclonal antibodies specific for Senecavirus A demonstrated immunoreactivity of the choroid plexus of the cerebrum, degenerate epithelium of ulcerative lesions of the tongue, the urothelium of the kidney and urinary bladder, and the superficial cells of the intestine and in various tissues of the piglets. The molecular tests for the other viruses evaluated showed negative results. The studies describe for the first time the infection by Senecavirus A outside of North America and suggest that the virus is the causative agent of the outbreaks of vesicular disease described in Brazil, as well as the participation of the virus in multiple lesions observed in neonatal piglets, characterizing as a pantropic virus able to produce a multisystemic disease entity in pigs infected at an early age.

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