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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-213009

Resumo

As aves de postura e corte constam como possíveis reservatórios para Salmonella enterica e o caráter multiplicação em plantéis e, por consequência, contaminação dos alimentos. Objetivou-se avaliar o potencial de colonização de orgãos, excreção fecal e contaminação de ovos por Salmonella Heidelberg e Salmonella Typhimurium, assim como avaliar a influência da infecção pelos sorovares Heidelberg e Typhimurium na expressão de TLR-4, IL1, IL6 e IL10 em baço, magno e útero de poedeiras inoculadas experimentalmente. Foram selecionadas 45 poedeiras White Leghorn com 28 semanas de idade, livres de patógenos específicos, foram divididas em três grupos mantidos em unidades isoladoras. No primeiro grupo, SH, inoculou-se em cada ave, via oral, 1,2 x 10 UFC de Salmonella Heidelberg, no segundo grupo, ST, 1,0 x 10 UFC de Salmonella Typhimurium. No grupo controle, as aves receberam igual volume de solução salina esterilizada. Aos sete, 14 e 21 dias pós inoculação, cinco poedeiras/grupo foram submetidas à eutanásia e necropsia. Baço, fígado, ovários, magno, istmo, útero, intestino delgado e ceco foram colhidos e destinados aos ensaios histopatológicos e bacteriológicos. Ovos foram colhidos diariamente e excretas a cada três dias, antes e durante o período de realização do experimento e analisados. Foi realizado qPCR para análise de expressão dos genes TLR-4, IL6, IL10 e IL1B em baço, magno e útero. Os resultados obtidos foram normalizados, utilizando os genes constitutivos RPLP-1 e -actina e a expressão foi calculada pela razão entre as diferenças de média do grupo controle e grupos desafio dos genes alvo. Nenhumas das poedeiras apresentou sinais clínicos após a inoculação. A excreção fecal foi intermitente e durou 12 dias para ambos sorovares. O sorovar Heidelberg foi Typhimurium, identificada em todos os tecidos avaliados, exceto ovário, sete DPI. Salmonella Heidelberg persistiu no ceco e baço, de forma viável, 14 DPI, enquanto que o sorovar Typhimurium não foi identificado em nenhum tecido, considerando o mesmo período. A inoculação experimental gerou infecção com resolução em 14 DPI em poedeiras ST e 21 DPI para poedeiras SH. Salmonella Heidelberg permaneceu por mais tempo no hospedeiro, com isolamento microbiológico persistente em ceco e baço associado a pouca indução de resposta inflamatória nos órgãos avaliados. Os dois sorovares foram capazes de contaminar os ovos produzidos no período pós inoculação, sendo isolados em casca a partir de três DPI e gema até 12 DPI. As alterações histopatológicas encontradas foram de escore discreto, sem alterações em baço. Existem interações fortes entre os genes TLR4, IL1B, IL6 e IL10, sendo evidenciada a presença de cinco genes parceiros funcionais STAT3, IL10RA, TRAF6, TICAM1 e LY96. Os resultados evidenciam diferença do reconhecimento antigênico e resposta imune determinada pela expressão de mRNA dos genes TLR-4, IL1B, Il6 e IL10 nas poedeiras infectadas por Salmonella Heidelberg e Salmonella Typhimurium.

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Laying hens and broilers are potential reservoirs for Salmonella enterica and the zoonotic risk composes predictive analyses, regarding the attributes for infection and multiplication in poultry flocks and, consequently, food contamination. The aim of this study was to evaluate the potential of internal organ colonization, fecal shedding patterns and egg contamination by Salmonella Heidelberg and Salmonella Typhimurium, and evaluate the influence of infection by Heidelberg and Typhimurium serovars on TLR-4, IL1, IL6 and IL10 expression in spleen, magnus and uterus of experimentally inoculated layers. 28-week-old White Leghorn laying hens were selected, free of specific pathogens, divided into three groups kept in isolation units. In the first group, SH, 1.2 x 10 CFU of Salmonella Heidelberg was inoculated orally in each bird, in the second group, ST, 1.0 x 10 CFU of Salmonella Typhimurium. In 7 7 the control group, birds received equal volume of sterile saline solution. At seven, 14 and 21 days after inoculation, five layers / group were euthanized and necropsied. Spleen, liver, ovaries, magnum, isthmus, uterus, small intestine and caecum were collected and destined for histopathological and bacteriological tests. Eggs were collected daily and excreted every three days, before and during the period of the experiment and analyzed. qPCR was performed for expression analysis of TLR-4, IL6, IL10 and IL1B genes in spleen, magnus and uterus. Results were normalized using constitutive genes RPLP-1 and -actin and expression was calculated by the ratio of the mean differences between the control group and the target gene in challenge groups. None of the layers showed clinical signs after oral inoculation. Fecal excretion was intermittent and lasted 12 days for both serovars. Heidelberg serovar was identified in all tissues evaluated seven DPI, as well as Salmonella Typhimurium, identified in all tissues evaluated, except ovary, seven DPI. Salmonella Heidelberg persisted 14 DPI in the cecum and spleen, while Typhimurium serovar was not identified in any tissue over the same period. Experimental inoculation generated infection with 14 DPI resolution in ST layers and 21 DPI in SH layers. Salmonella Heidelberg persisted longer in the host, with microbiological isolation in the caecum and spleen associated with discrete induction of inflammatory response in the evaluated organs. Both serovars were able to contaminate the eggs produced in the post inoculation period, being isolated in shell from three DPI and yolk up to 12 DPI. The histopathological alterations found were of discrete score, without alterations in the spleen. There are interactions between the TLR4, IL1B, IL6 and IL10 genes, evidencing the presence of five functional partner genes STAT3, IL10RA, TRAF6, TICAM1 and LY96. The results show differences in antigen recognition and immune response determined by mRNA expression of TLR-4, IL1B, Il6 and IL10 genes in laying hens infected with Salmonella Heidelberg and Salmonella Typhimurium.

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