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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-213926

Resumo

Os organóides intestinais possuem grande relevância na terapia celular, pois fornecem informações mais precisas sobre a composição e arquitetura de tecidos em relação ao cultivo bidimensional, além de servir como modelo de estudo para interação de hospedeiros e testes de fármacos. O saco vitelino, membrana de nutrição fetal, é um dos responsáveis pela formação do epitélio intestinal durante o desenvolvimento embrionário. Com isso, este trabalho teve como objetivo verificar se o cultivo tridimensional in vitro de células-tronco derivadas do saco vitelino canino possui capacidade de desenvolver organóides intestinais. Células-tronco mesenquimais do saco vitelino canino foram isoladas e caracterizadas, sendo posteriormente cultivadas tridimensionalmente em Matrigel® sob diferentes condições de indução da diferenciação, sendo o próprio tecido do saco vitelino digerido também testado para este cultivo tridimensional, utilizando como grupo controle células-tronco intestinais caninas. As estruturas derivadas dos diferentes tipos de cultivo foram testadas com RT-qPCR para diferentes marcadores endodermais e intestinais, sendo a quantificação das amostras avaliada utilizando o método 2-CT. As estruturas tridimensionais derivadas do tecido do saco vitelino foram capazes de desenvolver morfologia semelhante ao grupo controle, possuindo marcação para células epiteliais intestinais e células do cólon intestinal. Enquanto que as estruturas derivadas do grupo das mesenquimais, apesar de apresentar expressão de células intestinais, não desenvolveu uma morfologia adequada. Concluindo assim que o saco vitelino canino possui capacidade para desenvolver organóides intestinais, enquanto que as células-tronco mesenquimais isoladas, apesar de serem capazes de sofrer diferenciação intestinal, não formam uma morfologia semelhante a organóides no cultivo tridimensional.

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The intestinal organoids have great relevance in cell therapy, since they provide more precise information on the composition and architecture of tissues in relation to the two-dimensional culture, besides serving as a study model for host interaction and drug tests. The yolk sac, fetal nutrition membrane, is one of the responsible for the formation of the intestinal epithelium during the embryonic development. The objective of this study was to verify if the in vitro three-dimensional culture of stem cells derived from the canine yolk sac has the capacity to develop intestinal organoids. The mesenchymal stem cells of the canine yolk sac were isolated and characterized, and were subsequently cultured three-dimensionally in Matrigel® under different conditions of induction of differentiation, and the same yolk sac tissue was also tested for this three-dimensional culture using canine intestinal stem cell as control. The structures derived from the different culture types were tested with RT-qPCR for different endodermal and intestinal markers, and the quantification of the samples was evaluated using the 2-CT method. The three-dimensional structures derived from yolk sac tissue were able to develop similar morphology to the control group, expressing intestinal epithelial cells and intestinal colon cells genes. While the structures derived from the mesenchymal group, despite presenting intestinal cell expression, did not develop an adequate morphology. Concluding that the canine yolk sac is capable of developing intestinal organoids, whereas isolated mesenchymal stem cells, although capable of undergoing intestinal differentiation, do not form organoids-like structures in three-dimensional culture.

Biblioteca responsável: BR68.1