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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216291

Resumo

O Brasil é o terceiro maior produtor e o primeiro exportador mundial de carne de frango. Visando garantir o aumento da produção, torna-se necessário o controle da sanidade avícola, lesões no sistema respiratório, como a aerossaculite, dificultam a dinâmica respiratória das aves e trazem risco de morte. A aerossaculite e septicemia que, na sua maioria, são alterações decorrentes de doenças respiratórias ocasionadas por infecção por Escherichia coli. Além do aumento da taxa condenações, aves com aerossaculite ocasionam risco de contaminação das carcaças com patógenos no processamento. Diante disso, o Serviço de Inspeção Estadual ADEPARÁ, desempenha um importante papel, o de garantir um produto de origem animal dentro dos padrões exigidos pela legislação. Com base no exposto, este estudo teve como objetivo verificar a relação existente entre a inspeção visual, a análise microbiológica, a fim de isolar e identificar E. coli, além de detectar genes de virulência de resistência sérica (iss) e hemaglutinação (tsh) através de uma multiplex PCR (Reação em Cadeia de Polimerase) em carcaças de frangos de corte, provenientes de um abatedouro avícola no estado do Pará. Os registros foram agrupados em tabelas tomando-se como base o número de aves abatidas mensalmente, de acordo com a natureza das condenações, apresentou um índice de 50,54 % e 60,45 % relacionadas a causas patológicas e as de origem não patológicas, corresponderam a 49,54 % e 39,55 %, nos anos de 2014 e 2015 respectivamente, indicando que ocorreram falhas no manejo sanitário nos plantéis de criação das aves. Das aves condenadas foram selecionas 30 carcaças oriundas de frangos condenados na linha de inspeção, com suspeitas de aerossaculite, pelo técnico do Serviço de Inspeção. Para o processamento das amostras, foram usados três órgãos de cada frango, sendo: traqueia, fígado e pulmão. Foram utlizados três técnicas de diagnósticos diferenciados: método convencional, PCR e exame histopatológico. Dos 30 frangos condenados, foram isolados E. coli em 100%, 97% e 80%, respectivamente amostras de traqueia, pulmão e fígado pelo método convencional. Após a confirmação da presença do agente nas amostras, foi realizada a pesquisa de genes, onde constatou com a utilização da mutiplex PCR, os genes tsh (670pb) e iss (720pb) devidamente amplificados, nos três órgãos das aves 1, 19 e 22, caracterizando uma infecção mista, assim como foram identificados 7/30 aves os dois fatores de virulência apenas nos órgãos respiratórios, o gene de virulência que apresentou mais frequência foi o tsh amplificando 670pb em 7/30 aves nos órgão respiratórios, não foram amplificados os genes pesquisados em 4/30 aves, mostrando ausência em todos os órgãos das mesmas, ressaltando que nos 17 figados estudados não houve amplificação de nenhum dos fatores de virulência, certificando que as aves não apresentavam quadro de septicemia. Os resultados demostraram que a técnica proposta para a pesquisa dos fatores de virulência foi eficiente, visto que os genes alvos foram detectados tanto nos controles positivos quanto nas amostras. Quanto à extração de DNA, a metodologia testada revelou-se apropriada para ser utilizada como etapa essencial de execução da m-PCR. Além disso, utilizando o diagnóstico histopatológico detectou-se a predominância de 6 heterófilos e mononucleares na traqueia (30/30), no pulmão (27/30) e no fígado (4/30), onde praticamente não foi diagnosticada nenhuma alteração, diferentemente dos órgãos respiratórios. Conclui-se, diante dos resultados obtidos, indica que a Multiplex PCR para os genes de virulência tsh e iss apresenta um grande potencial na caracterização de isolados de E. coli, com isso faz-se necessária a utilização de tecnologias para identificação e prevenção de E. coli nos aviários e matadouros avícolas.

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Brazil is the third largest producer and the world's leading exporter of chicken meat. In order to guarantee an increase in production, it is necessary to control poultry health, injuries to the respiratory system, such as aerossaculitis, interfere with the respiratory dynamics of birds and bring a risk of death. Aerosurgulitis and septicemia, which are mostly changes due to respiratory diseases caused by Escherichia coli infection. In addition to increased condemnation rates, birds with aerossululitis pose a risk of contamination of carcasses with pathogens in processing. Therefore, the State Inspection Service ADEPARÁ, plays an important role, to ensure a product of animal origin within the standards required by the legislation. Based on the foregoing, this study aimed to verify the relationship between visual inspection and microbiological analysis in order to isolate and identify E. coli, in addition to detecting virulence genes of resistance (ISS) and hemagglutination (tsh) through a multiplex PCR (Polymerase Chain Reaction) in carcasses of broiler chickens from a poultry slaughterhouse in the state of Pará. The records were grouped into tables based on the number of birds slaughtered monthly, according to the nature of the convictions, presented a rate of 50.54% and 60.45% related to pathological causes and those of non-pathological origin, corresponded to 49.54% and 39.55%, in the years of 2014 and 2015 respectively, indicating that there were failures in sanitary management in poultry farms. Of the condemned birds were selected 30 carcasses from chickens convicted in the line of inspection, with suspected aerossaculitis, by the Inspection Service technician. For the processing of the samples, three organs of each chicken were used, being: trachea, liver and lung. Three different diagnostic techniques were used: conventional method, PCR and histopathological examination. Of the 30 condemned chickens, E. coli were isolated in 100%, 97% and 80%, respectively tracheal, lung and liver samples by the conventional method. After confirming the presence of the agent in the samples, the gene search was carried out using the mutaplex PCR, tsh (670pb) and iss (720pb) genes, duly amplified, in the three organs of birds 1, 19 and 22 , characterizing a mixed infection, just as 7/30 birds were identified the two virulence factors only in the respiratory organs, the virulence gene that presented the most frequency was the tsh amplifying 670bp in 7/30 birds in the respiratory organs, were not amplified the genes in 4/30 birds, showing absence in all the organs of the same, emphasizing that in the 17 liver samples studied there was no amplification of any of the virulence factors, certifying that the birds did not present septicemia. The results demonstrated that the proposed technique for virulence factors research was efficient, since the target genes were detected in both the positive controls and the samples. As for DNA extraction, the methodology tested proved to be an essential step in the execution of m-PCR. In addition, the predominance of heterophiles and mononuclears in the trachea (30/30), lung (27/30) and liver (4/30) were detected using histopathological diagnosis, in which almost no abnormalities were diagnosed. respiratory organs. In conclusion, it is concluded that the multiplex PCR for the virulence genes tsh and iss presents a great potential in the 8 characterization of E. coli isolates, which makes it necessary to use technologies for the identification and prevention of E. coli in aviaries and poultry slaughterhouses.

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