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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216552

Resumo

Atualmente, um dos desafios na reprodução equina é a baixa taxa de sobrevivência de embriões criopreservados com diâmetro > 300 m, usando métodos de vitrificação ou clássicos. Pesquisas sobre a influência da bomba de sódio e potássio (Na+, K+-ATPase) no desenvolvimento embrionário de equinos têm mais de 30 anos e hoje se sabe que participa da cavitação embrionária, modifica o gradiente iônico das células trofoblásticas, além de influenciar a formação, distribuição e permeabilidade das tight junctions (TJ) entre células trofoblásticas. Devido aos diversos tipos de isoformas da Na +, K+-ATPase, a depender das subunidades que a compõe, e a peculiaridades do desenvolvimento embrionário nas diferentes espécies, esse trabalho é caracterizado por uma revisão de literatura, para demonstrar os resultados dos principais estudos na área. Apresenta os resultados de um estudo que foi desenvolvido com o objetivo de buscar um meio capaz de reduzir o diâmetro do embrião equino a campo, para apoiar a vitrificação do blastocisto. Embriões equinos foram recuperados e submetidos a inibição da Na+, K+-ATPase por 1 ou 6 h, utilizando ouabaína isolada ou conjugada à sonda fluorescente (OuabaínaFL), durante incubação a 37° C. Os embriões foram avaliados quanto a características morfométricas (microscopia em campo claro) e de viabilidade (Hoechst 33342 + iodeto de propídeo). Acredita-se que este tenha sido o primeiro estudo que objetivou avaliar primariamente os efeitos da inibição da Na+, K+-ATPase com ouabaína, um inibidor específico, sobre embriões equinos. Observou-se que a inibição da Na+, K+-ATPase com ouabaína é capaz de reduzir o diâmetro dos blastocistos equinos, independetemente do dia de desenvolvimento (D7 ou D9), tendo sua confirmada a capacidade de ligação aos embriões a partir de estudos com ouabaína conjugada a sonda fluorescente. Todavia, a inibição da Na+, K+-ATPase compromente a viabilidade do embrião, não sendo recomendada a sua adoção com estratégia para redução do diâmetro de blastocistos equinos.

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Currently, one of the challenges on equine reproduction is the low survival rate of horse embryos cryopreserved with diameter > 300 m, using either vitrification or classic methods. Researches about the influence of sodium pump and potassium (Na+, K+-ATPase) on horse embryo development have more than 30 years and nowadays it is known that participates on embryo cavitation, changes ionic gradient of trophoblastic cells, as well as influences formation, distribution and permeability of tight junctions (TJ) between trophoblastic cells. Due to many Na+, K+-ATPase isoforms, depending on comprising subunits, as well as peculiarities on embryo development depends on species, this work is characterizied by a literature review to demonstrate the main results in the field of research. It is also presented the results of a study that aimed to develop a medium able to reduce horse embryo diameter in the field, to support horse blastocyst vitrification. Horse embryos were hasvested and subjected to Na+, K+-ATPase inhibition for 1 or 6 h, using ouabain isolated or conjugates to fluorescent probe (OuabaínaFL), during incubation at 37 ° C. Embryos were assessed for morphometric characteristics (bright field microscopy) and viability (Hoechst 33342 + propridium iodide). To our knowledge, this is the first study that primarly aimed to evaluate the influence of Na+, K+-ATPase inhibition with ouabain, a specific inhibitor, on the horse embryos. It was observed that Na+, K+-ATPase inhibition with ouabain is able to reduce horse blastocyst diameter, in spite of embryo development (D7 ou D9), and ouabain binding to blastocysts were confirmed after embryo exposition to fluorescent conjugated ouabain. However, Na+, K+-ATPase inhibiton compromised embryo viability and it is not recommended as a strategy to reduce horse blastocyst diameter.

Biblioteca responsável: BR68.1