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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216980

Resumo

OHLWEILER, Lain Uriel. Estratégias para aumentar a viabilidade de embriões suínos produzidos in vitro e vitrificados. 2018, 72 p. Tese (Doutorado em Ciência Animal). Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Lages, 2018. Os embriões suínos apresentam importantes particularidades, tanto de desenvolvimento quanto estruturais, as quais fazem com que a sua criopreservação seja menos eficaz que as outras espécies domésticas. Na primeira fase deste trabalho foi avaliado o efeito de diferentes gradientes de percoll durante a seleção dos espermatozoides utilizados na fecundação in vitro e sua influência no posterior desenvolvimento e qualidade embrionária. O maior gradiente avaliado (90/45) teve a menor produção e qualidade embrionária, baseado nas taxas de produção embrionária e expressão de receptores de estrógeno. O gradiente intermediário (80/40) proporcionou bons índices de produção e baixa mortalidade embrionária, associados a elevada qualidade embrionária. Já o menor gradiente (70/35) apresentou alta mortalidade embrionária. A segunda fase investigou o efeito e toxicidade de diferentes crioproteotres aos embriões suínos nos dias 5 ou 6 de cultivo. A toxicidade aos embriões está relacionada com o dia de cultivo, o agente crioprotetor, sua concentração e tempos de exposição. As menores concentrações de EG associado a DMSO são menos tóxicas e tão eficientes quanto o uso exclusivo de EG. A sacarose mostrou-se pouco tóxica a embriões dos dias 5 e 6 de cultivo. Na terceira fase, avaliou-se o efeito do estresse controlado por pressão negativa como estratégia para aumentar a viabilidade dos embriões. Quando o estresse foi aplicado aos oócitos na intensidade de 250 mBar houve maior produção embrionária, e menor índice de apotose nos blastômeros, baseado na expressão da caspse-3 clivada. No entanto, isto não se refletiu em maior criotolerância dos embriões. Quando o estresse foi aplicado diretamente nos blastocistos, somente a pressão de 500 mBar não prejudicou o desenvolvimento embrionário, também não afetando a criotolerância dos mesmos. Quando associadas: pressão negativa de 250 mBar no oócito e 500 mBar no embrião, houve aumento na criotolerância. Na quarta fase do estudo, foi avaliado o uso do nitrogênio super-resfriado na vitrificação de embriões, que não diferiu do nitrogênio convencional. Como conclusões, o gradiente de seleção espermática influencia na qualidade embrionária, sendo que embriões do dia 5 de cultivo possuem maior viabilidade que os embriões do dia 6. Os crioprotetores exercem níveis diferentes de toxicidade aos embriões, conforme a concentração, e é possível aumentar a viabilidade de embriões vitrificados através do uso de estresse controlado por pressão negativa.

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OHLWEILER, Lain Uriel. Strategies to improve the viability of in vitro produced and vitrified porcine embryos. 2018, 72 p. Thesis (Doctorate in Animal Science). Santa Catarina State University. Post Graduate Program in Animal Science. Lages, 2018. The porcine embryos present important structural and developmental features that play a negative role in their cryotolerance, in comparison to the other domestic species. The first phase of this study aimed to evaluate the effect of different concentrations of the percoll gradient, in the outcome of in vitro fertilization and its influence in the further embryo development and quality. The highest concentration assessed (90/45) resulted in the lowest embryo production and quality, based in the embryo production rate and in the expression of estrogen receptor. The outcome of the intermediate gradient (80/40) was a good rate of embryo production, with low embryo mortality and high embryo quality; whereas the lowest gradient (70/35) presented high embryo mortality. The second phase of the study aimed to assess the toxic effect of different cryoprotectant agents, to either day 5 or day 6 porcine blastocysts. Embryo toxicity was affected by the cryoprotectant agent, concentration, lenght of exposure time, and age of embryos. Low concentrations of EG and DMSO associated were the least toxic, and as efficient as the use of EG alone. Sucrose showed to have low toxicity to embryos of days 5 and 6 of culture. The third phase of the study aimed to evaluate the effect of the controlled stress by negative pressure, as a strategy to increase embryo viability. When the oocytes were submitted to 250 mBar of negative pressure, there was an increase in embryo production and a decrease in the rate of apoptosis, based in the expression of cleaved caspase-3. Nonetheless, their cryotolerance was not affected. When the stress was applied in the blastocysts, only the pressure of 500 mBar did not decrease the embryo development rates, not affecting, however, their cryotolerance. In the other hand, when both steps of negative pressure were applied: 250 mBar to the oocyte and 500 mBar to the blastocyst, in a sequential association, there was an increase in embryo cryotolerance. The fourth phase of the study aimed to assess the use of super-cooled nitrogen for embryo vitrification. Results found showed no differences between conventional (normal atmosphere) and super-cooled nitrogen. As main conclusions, the sperm selection gradient plays a role in the embryo quality, being day 5 embryos more resistant than the ones at day 6. The cryoprotectant agents have different levels of toxicity to the embryos, what was dependant on its concentration. Also, it is possible to increase the viability of vitrified embryos by applying a controlled stress mediated by negative pressure.

Biblioteca responsável: BR68.1