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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-217551

Resumo

A diarreia neonatal bovina (DNB) é uma enfermidade multifatorial que, com maior frequência, acomete bezerros com até 30 dias de idade. A DNB é o principal evento sanitário em bezerras leiteiras lactentes e devido às taxas de morbidade e mortalidade a infecção ocasiona perdas econômicas consideráveis à cadeia produtiva do leite. O principal agente infeccioso viral envolvido na etiologia dessa enfermidade é o rotavírus A (RVA). Entre as várias medidas de controle e profilaxia a serem adotadas para a redução da frequência de DNB em rebanhos bovinos leiteiros destaca-se a vacinação das vacas no período pré-parto. O objetivo desse estudo foi monitorar os genotipos G (VP7) e P (VP4) de cepas de RVA identificadas em bezerras leiteiras em rebanhos regularmente vacinados com vacina comercial contendo RVA genotipo G6P[5]. Para isso, foram conduzidos dois experimentos sendo o primeiro de caráter longitudinal e o segundo transversal. No primeiro experimento, 122 bezerras provenientes de um rebanho da raça Holandesa foram avaliadas até os 30 dias de idade. Em todas as bezerras, independentemente da presença ou ausência de DNB, nos dias 1, 4, 7, 10, 14, 17, 21, 24, 28 e 30 de idade foram realizadas colheitas de amostras fecais totalizando 1.220 amostras. O segundo experimento foi realizado em 14 rebanhos bovinos leiteiros regularmente vacinados contra a rotavirose, e em cada rebanho foi realizada apenas uma colheita de amostras fecais diarreicas (n=87) em bezerras de até 30 dias de idade. Como técnica de triagem, a presença de RVA nas amostras fecais foi avaliada pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA). Todas as amostras positivas para RVA por EGPA foram submetidas à amplificação dos genes VP7 e VP4 por RT-PCR e os genotipos G e P, respectivamente foram determinados por sequenciamento dos produtos amplificados e análise das sequencias obtidas. No experimento longitudinal foram identificados 76 (62,3%) e 99 (8,1%) animais e amostras fecais positivas para RVA, respectivamente. Todas as amostras RVA-positivas (n=10) selecionadas para o sequenciamento foram caracterizadas como genotipo G10P[11]. No experimento transversal somente 42,86% (6/14) das propriedades foram analisadas. Oito rebanhos foram excluídos do estudo, por não apresentarem bezerras com diarreia (n=2) ou por não apresentarem amostras fecais positivas para RVA (n=6). Nos seis rebanhos restantes, 17 (25,4%) amostras de fezes foram positivas para RVA. O sequenciamento e análise filogenética dos produtos amplificados dos genes VP7 e VP4 possibilitaram identificar os genotipos G6P[11] em cinco rebanhos e G10P[11] em um. As cepas G6 pertencem a linhagem III enquanto a cepa G6 vacinal pertence a linhagem IV, caracterizando a ocorrência nos rebanhos vacinados de RVA genotipo G6 distinto daquele presente na cepa vacinal. Adicionalmente, nestes rebanhos vacinados com RVA genotipo G6P[5] foi observada a emergência dos genotipos G10 e P[11] caracterizando possível falha na proteção heteróloga. Os resultados, tanto do experimento longitudinal quanto do transversal, demonstraram que nos rebanhos bovinos regularmente vacinados com a cepa G6P[5] de RVA houve redução na frequência de diarreia em bezerros com idade inferior a 30 dias. Contudo, houve circulação de RVA com genotipos G e P distintos daqueles presentes na cepa vacinal. Com isso, evidencia-se a importância do constante monitoramento das cepas de RVA circulantes em rebanhos bovinos regularmente vacinados e também da realização de estudos de vigilância epidemiológica para a identificação de genotipos emergentes e para a caracterização molecular de cepas de RVA com maior virulência e/ou com potencial zoonótico.

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Neonatal calf diarrhea (NCD) is a multifactorial disease that most frequently affects calves up to 30 days old. The NCD is the main health event in suckling calves and due to the morbidity and mortality rates, the infection causes considerable economic losses to the milk production chain worldwide. The main viral infectious agent involved in the etiology of this syndrome is rotavirus A (RVA). Among the several measures of control and prophylaxis to be adopted to reduce the frequency of NCD in dairy cattle herds stands out the vaccination of cows in the dry period. The aim of this study was to monitor the genotypes G (VP7) and P (VP4) of RVA strains identified in heifer calves in dairy cattle herds regularly vaccinated with commercial vaccine containing RVA genotype G6P[5]. For this, two experiments were conducted, the first being of longitudinal design and the second cross-sectional. In the first experiment, 122 heifer calves up to 30 days old from a Holstein breed were evaluated. In all calves, regardless of the presence or absence of NCD, fecal samples were collected on days 1, 4, 7, 10, 14, 17, 21, 24, 28, and 30, totaling 1,220 samples. The second experiment was performed on 14 dairy cattle herds regularly vaccinated against RVA, and in each herd, only one diarrheic fecal sample (n=87) was collected in heifer calves with NCD. As screening test, the presence of RVA in fecal samples was evaluated by the polyacrylamide gel electrophoresis technique (PAGE). All the positive diarrheic fecal samples for RVA in the screening test were submitted to the amplification of the VP7 and VP4 genes by RT-PCR and the genotypes G and P, respectively were determined by sequencing of the amplified products and analyzes of nucleotide sequence obtained. In the longitudinal experiment were identified 76 (62.3%) and 99 (8.1%) calves and fecal samples positives for RVA, respectively. All RVA-positive samples (n=10) selected for sequencing were characterized as genotype G10P[11]. In the cross-sectional experiment, only 42.9% (6/14) of herd were analyzed. Eight herds were excluded from the study because they did not present heifer calves with diarrhea (n=2) or because they did not present RVA positive fecal samples (n=6). In the remaining six herds, 17 (25.4%) diarrheic fecal samples were positive for RVA. Sequencing and phylogenetic analysis of the VP7 and VP4 genes amplified products allowed to identify the genotype G6P[11] in five herds and the genotype G10P[11] in one. The genotype G6 of RVA field strains migrated into a cluster (lineage III) distinct from the G6 vaccine strain (lineage IV), characterizing the occurrence of G6 genotype phylogenetic distant in vaccinated herds. Additionally, in these herds vaccinated with RVA genotype G6P[5] was observed the emergence of the genotypes G10 and P[11], characterizing a possible failure in heterologous protection. The results of both the longitudinal and cross-sectional experiments showed that in dairy cattle herds regularly vaccinated with the RVA genotype G6P[5] there was a reduction in the frequency of diarrhea in calves up to 30-day-old. However, there were circulations of RVA field strains with different G and P genotypes than those present in the vaccine strain. Thus, it highlights the importance of constant monitoring of RVA strains circulating in regularly vaccinated cattle herds, as well as epidemiological surveillance studies for the identification of emergent genotypes and for the molecular characterization of highly virulent RVA strains and/or strains with zoonotic potential.

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