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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-218723

Resumo

Biotecnologias aplicadas à reprodução são importantes ferramentas para o incremento de sistemas produtivos e estudos de conservação e manutenção de espécies ameaçadas de extinção. Os pacotes tecnológicos são constituídos por diversas técnicas, e entre elas, destaca-se a ginogênese, processo de reprodução uniparental de herança genética exclusivamente materna. Através da ginogênese, é possível obter lotes monossexuais de 100% fêmeas em espécies com sistema de determinação sexual XY, linhagens clonais e aplicação em estudos que elucidam os mecanismos de determinação sexual em peixes. Diante disso, o presente trabalho foi conduzido com o objetivo de estabelecer um protocolo de ginogênese mitótica em Astyanax altiparanae. Para isso, foram estabelecidos quatro tratamentos: Oócitos fertilizados com sêmen normal (controle diploide), oócitos fertilizados com sêmen irradiado em câmara UV para inativação do material genético paterno sem aplicação de choque térmico (ginogenético haploide), oócitos fertilizados com sêmen irradiado e com aplicação de choque 24 minutos pós fertilização (mpf) (ginogenético diploide) e oócitos fertilizados com sêmen normal com aplicação de choque térmico aos 24 mpf (tetraploide). As taxas de fertilização e sobrevivência foram verificadas nos principais estágios do desenvolvimento embrionário (clivagem, blástula, gástrula, segmentação e eclosão), assim como a porcentagem de larvas normais e anormais. As larvas recém eclodidas de cada tratamento por repetição tiveram a ploidia confirmada por citometria de fluxo e cariótipo. A irradiação e o choque térmico reduziram significativamente a sobrevivência dos embriões do tratamento ginogenético no estágio de eclosão (26,50 ±2,50%), taxa de larvas normais (36,62 ± 3,42%), aumento na taxa de larvas anormais (63,38 ± 3,42%) e 98,64% do total eclodido se confirmaram larvas ginogenéticas. No entanto, estão sendo realizadas análises de sequenciamento genético para elucidar o nível de homozigose desses indivíduos. No tratamento para indução a tetraploidia, foi observada uma taxa de eclosão de 17,8 ± 4,11% com 50,08 ± 4,27% de larvas normais e 49,92± 2,52% de larvas anormais, e 37,25% do total de larvas eclodidas tetraploides.

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Biotechnologies applied to reproduction are important tools to increase aquacultural production and support studies of conservation and maintenance of threatened species. Ginogenesis, is a uniparental reproductive process of exclusively maternal genetic inheritance, that may be induced in order to provide monosex population with increased performance, clonal lineages and may be used to elucidate the mechanisms of sex determination. Therefore, the objective of this study was to establish mitotic gynogenesis in Astyanax altiparanae, an important aquaculture and laboratory species. Four egg batches were used, each of them were divided into four treatments as follows: oocytes fertilized with normal semen (diploid control), oocytes fertilized with UV-inactivated semen without the application of thermal shock (haploid gynogenetic), oocytes fertilized with UV-inactivated semen succeeded by heat-shock (40°C, 24 minutes after fertilization -mpf) (diploid gynogenetic) and oocytes fertilized with normal semen with shock application 24 mpf (tetraploid). Fertilization and survival rates were checked in the main stages of early development (cleavage, blastula, gastrula, somite stage and hatching), as well as the percentage of normal and abnormal larvae. The newly hatched larvae (maximum of 20 samples repetition) from all treatments had ploidy status confirmed by flow cytometry and chromosome preparations. The results show that irradiation and thermal shock significantly reduced survival in the hatching stage (26.50 ± 2.50%), normal larvae rate (36.62 ± 3.42%) and provided increased rate of abnormal larvae (63.38 ± 3.42%), increase in the rate of abnormal larvae (63.38 ± 3.42%) and 98.64% of the total hatch were confirmed as gynogenetic larvae. However, genetic sequencing analyzes are being carried out to elucidate the level of homozygosity it has. In the treatment for induction of tetraploidy, an hatching rate of 17.8 ± 4.11% was observed with 50.08 ± 4.27% of normal larvae and 49.92 ± 2.52% of abnormal larvae, and 37, 25% of the total tetraploid hatched larvae.

Biblioteca responsável: BR68.1