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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-220574

Resumo

Neste estudo, objetivou-se avaliar a rastreabilidade genética e o perfil de resistência aos beta-lactâmicos de cepas de Staphylococcus (S). aureus isoladas de mastite em vacas primíparas, ambiente de ordenha e ordenhadores no estado de Pernambuco, Brasil. Foram coletadas 432 amostras de leite, 108 swabs de teto, 41 swabs de utensílios de ordenha e 28 swabs de ordenhadores (14 nasais e 14 de mãos). Foram analisadas 27 cepas de S. aureus de amostras de leite, seis cepas de S. aureus de amostras de swab de teto, uma cepa de S. aureus de swab de utensílios e quatro cepas de S. aureus de amostras de ordenhadores (três de swab nasal e uma de swab de mãos). Realizou-se a detecção dos genes de resistência blaZ, mecA e mecC por PCR e para o teste de resistência antimicrobiana utilizou-se o método de concentração inibitória mínima (CIM). O gene blaZ foi identificado em 74,07% (20/27) dos isolados das amostras de leite, em 16,6% (1/6) dos isolados de swab de tetos, 100% (1/1) dos isolados de utensílios de ordenha e 100% (4/4) dos isolados de ordenhadores e os genes mecA e mecC não foram detectados. A técnica de Concentração Inibitória Mínima (CIM) para penicilina e oxacilina foi realizada em todos os isolados de S. aureus e constatou-se 73,68% de taxa de resistência à penicilina e 10,51% de resistência à oxacilina. Além disso, realizaram-se as técnicas de tipificação rep-PCR, usando o primer RW3A, e PFGE, usando a endonuclease SmaI para investigar a correlação genética entre 18 isolados de S. aureus positivos para o gene blaZ. A tipagem por rep-PCR foi altamente discriminatória (valor D = 0,9804) e um total de 15 padrões foram detectados. A técnica de PFGE também foi altamente discriminatória (valor D = 0,9667) e um total de 13 padrões foi observado. A partir das duas técnicas foi possível detectar cepas clonais em amostras de leite da mesma propriedade e, apesar da presença de cepas dominantes, percebeu-se uma alta diversidade genética dentre as cepas de S. aureus analisadas. Assim, a alta frequência do gene blaZ associada aos resultados da CIM evidenciaram a importância da produção de beta-lactamases como mecanismos indutores de resistência nos isolados de S. aureus estudados. Além disso, a circulação de S. aureus resistentes a beta-lactâmicos indica a importância do conhecimento mais aprofundado acerca da disseminação dessas cepas no ambiente agropecuário. Desse modo, fazem-se necessárias medidas preventivas, tais como: a conscientização dos ordenhadores acerca da importância da higiene pessoal e do ambiente de ordenha, o uso racional de antimicrobianos e a escolha de drogas antimicrobianas apenas após a realização de testes de sensibilidade in vitro, visando reduzir a seleção e propagação de cepas de S. aureus resistentes.

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The general objective of this study was to assess the genetic traceability and the beta-lactam resistance profile of Staphylococcus (S.) aureus strains isolated from mastitis in primiparous dairy cows, milking environment and milkers in Pernambuco state, Brazil. A total of 432 milk samples, 108 teat swabs, 41 milking utensils swabs and 28 milkers swabs (14 nasal swabs and 14 hand swabs) were collected. Twenty-seven S. aureus strains from milk samples, six S. aureus strains from teat swabs, one S. aureus strain from milking utensils and four S. aureus strains from milkers (three from nasal swab and one from hand swab) were evaluated. Determination of genotypic resistance of S. aureus was achieved by Polymerase Chain Reaction (PCR) for amplification of the blaZ, mecA and mecC genes. Phenotypic resistance of S. aureus strains was evaluated by Minimal Inhibitory Concentration (MIC) technique using broth microdilutions of penicillin and oxacillin. The blaZ gene was detected in 74.07% (20/27) of the isolates from milk samples, 16.6% (1/6) of the isolates from teat swabs, 100% (1/1) of the isolates from milking utensils and 100% (4/4) of the isolates from milkers and the mecA and mecC genes were not detected. MIC technique was performed in all S. aureus strains and according to its results, penicillin had a 73.68% resistance rate and oxacillin had a 10.51% resistance rate. In addition, repetitive extragenic palindromic polymerase chain reaction (rep-PCR), using RW3A primers, and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), using the endonuclease SmaI, were carried out to investigate the genotypic relatedness of 18 S. aureus strains (blaZ-positive). The rep-PCR typing was highly discriminatory (D value= 0.9804) and a total of 15 patterns were detected. The PFGE method was also highly discriminatory (D value= 0.9667) and a total of 13 patterns were observed. Also, clonally-related strains isolated from milk were identified at the same farm by both typing methods, and despite the presence of dominant strains, the results of this study suggest a high genetic diversity of S. aureus strains exist at the dairy farms. Thus, the high frequency of the blaZ gene associated with MIC results indicates the significance of beta-lactamase production as induced resistance mechanism in S. aureus strains. The circulation of beta-lactam resistant S. aureus strains shows the need for deep knowledge to be acquired about the dissemination of these strains in the agricultural environment. Therefore, it becomes necessary to take preventive measures, such as: the awareness of milkers about the importance of personal and milking environmental hygiene, the rational use of antibiotics and the selection of antimicrobial drugs only after conducting in vitro susceptibility testing, aiming to reduce the selection and the spread of resistant S. aureus strains.

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