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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-220576

Resumo

O objetivo desta pesquisa foi determinar a frequência de mastite bovina por Staphylococcus spp. em fazendas leiteiras no estado de Pernambuco, Brasil. Detectar os genes mecA e mecC responsáveis pela resistência à meticilina e norA, norB, norC, msrA, mgrA, tet-38 e lmrS de sistema de efluxo multidrogas em isolados de Staphylococcus spp., realizar a tipagem dos isolados de S. aureus Resistentes à Meticilina (MRSA) por meio da técnica de Eletroforese em Gel Pulsante (PFGE) e avaliar a atividade antimicrobiana das Nanopartículas Polipirrol (NPs-PPy) e do extrato aquoso de Moringa oleifera nos isolados de Staphylococcus spp. portadores dos genes de sistema de efluxo multidrogas. Foram coletadas 676 amostras de leite de vacas, 15 amostras de swabs nasais e de mãos de ordenhadores, 14 swabs de teteiras e nove de baldes de ordenha em cinco propriedades rurais (A-E). Inicialmente foi realizado o California Mastits Tests (CMT) e as amostras que apresentaram resultado + (uma cruz) (319 amostras) ou aquelas que foram positivas no teste da caneca (16 amostras) foram coletadas para as análises microbiológicas. As amostras foram submetidas ao exame microbiológico para detecção de Staphylococcus spp., técnica molecular (PCR) para identificação de Staphylococcus aureus e dos genes mecA, mecC, norA, norB, norC, msrA, mgrA, tet-38 e lmrS. Para os isolados de mecA-MRSA foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e, estes foram submetidos à genotipagem por meio da técnica de Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) e naqueles portadores de mecC foi realizado o sequenciamento do genoma. Nos isolados portadores dos genes de sistema de efluxo multidrogas foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Bactericida Mínima (CBM) das NPs-PPy e do extrato aquoso Moringa oleifera. MRSA foi detectado em 1,49% (5/335), 20% (3/15), 6,6% (1/15) e 7,1% (1/14) das amostras de leite, nariz, mãos e teteiras, respectivamente. Todos os isolados foram sensíveis à oxacilina na CIM. Na PFGE foi possível identificar VIII pulsotipos (A-H), divididos em três clusters maiores nos isolados de MRSA. O mecC foi detectado em 4,68% (3/64) isolados de S. aureus pertencentes a mesma cepa. No sequenciamento, esta cepa apresentou genes de virulência relacionados às exoenzimas, toxinas, enterotoxina, genes de sistema de efluxo multidrogas, de inativação de antibióticos e plasmídeo, e esta cepa foi atribuída a ST 126 e MRSA t605; ainda foram identificadas nove proteínas relacionadas à resistência à meticilina. Os resultados obtidos apresentam impacto direto na saúde pública uma vez que, este é o primeiro estudo que detecta a disseminação de isolados de Staphylococcus spp. multirresistentes com diferentes perfis clonais no ambiente agropecuário de fazendas leiteiras no estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil. Também foi comprovada a atividade bactericida do extrato aquoso de Moringa oleifera e das NPs-PPy, sendo necessários novos estudos com o intuito de utilizar essas compostos como alternativas para tratamento de infecções por Staphylococcus spp. resistentes a antimicrobianos.

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This study aimed to determine the frequency of bovine mastitis caused by Staphylococcus spp. in dairy farms from Pernambuco state, Brazil. Detect mecA and mecC genes responsible for resistance to methicillin, and norA, norB, norC, msrA, mgrA, tet-38 and lmrS genes responsible for multidrug efflux system on Staphylococcus spp. isolates, typify Methicillin-resistant S. aureus (MRSA) strains by Pulsed Field Electrophoresis Gel (PFGE) method, and evaluate the antimicrobial activity of Polypyrrole Nanoparticles (PPy-NPs) and aqueous extract of Moringa oleifera on multidrug efflux system gene carrying Staphylococcus spp. strains. 676 milk samples, 15 swabs from milkers nostrils and hands, 14 swabs from teat cup and 9 from milking buckets were collected from 5 rural properties (A-E). Initially, the California Mastitis Tests (CMT) was performed, and samples with results higher than + (one cross) (319 samples) or those positive on the strip cup test (16 samples) were collected for microbiological analysis. Samples were submitted to microbiological test for detection of Staphylococcus spp., molecular technique (PCR) for identification of Staphylococcus aureus and mecA, mecC, norA, norB, norC, msrA, mgrA, tet-38 and lmrS genes. For mecA-MRSA isolates, Minimal Inhibitory Concentration (MIC) was determined and genotyped by Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE), and mecC-carrying isolates were submitted to genome sequencing. On isolates carrying multidrug efflux system genes, Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Bactericidal Concentration (MBC) of PPy-NPs and aqueous extract of Moringa oleifera were determined. MRSA were detected in 1,49% (5/335), 20% (3/15), 6,6% (1/15) and 7,1% (1/14) of milk, nostrils, hands, and teat liners samples respectively. All isolates were susceptible to oxacillin by MIC. By PFGE it was possible to identify VIII pulsotypes (A-H) between MRSA isolates, divided into three major clusters. MecC gene was detected in 4,68% (3/64) isolates of S. aureus of the same strain. By sequencing, this strain presented virulence genes related to exoenzymes, toxins, enterotoxins, multidrug efflux system, antibiotic inactivation genes and plasmid, this strain was attributed to ST 126 and MRSA t605, also nine new proteins related to methicillin resistance were identified. The results obtained impact directly on public health as this is the first study that detects dissemination of multi-resistant Staphylococcus spp. isolates with different clonal profiles in agricultural environment of dairy farms from Pernambuco state, Northeastern of Brazil. It was also comproved the bactericidal activity of aqueous extract of Moringa oleifera and PPy-NPs, being necessary new studies about using these compounds as alternatives for treatment of infections by multidrug resistant Staphylococcus spp.

Biblioteca responsável: BR68.1