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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-220627

Resumo

A avicultura de corte brasileira é destaque na produção e exportação de carne de frango, sendo indiscutível a importância da detecção de patógenos na cadeia produtiva. Nessa perspectiva, a presença de Salmonella sp. na avicultura é preocupante, uma vez que interfere no mercado consumidor, já que é um dos principais micro-organismos envolvidos em doenças transmitidas por alimentos (DTAs). Na busca de alternativas para a diminuição da contaminação das aves, a Instrução Normativa No 20, de 21 de Outubro de 2016 do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), visa o controle e monitoramento de Salmonella sp. em estabelecimentos comerciais de frangos e abate; exigindo a realização de ensaios laboratoriais de suabe de arrasto antes do abate, que seguem sendo realizados de acordo com a Portaria 126 de 3 de Novembro de 1995 (MAPA). Buscando agilizar o processo de detecção, este estudo teve por objetivo realizar a otimização de uma técnica de Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) através do 3M TM Molecular Detection Assay 2: Salmonella (MDS®), em conformidade com a Portaria 126, para detecção de Salmonella sp. em suabe de arrasto umedecido com água peptonada 1%. Para o desenvolvimento da metodologia seguiu-se a ISO 16140-2:2016, foram analisadas 300 amostras de suabe de arrasto contaminadas naturalmente, coletadas de aviários de frangos de corte do Oeste de Santa Catarina, e 30 amostras contaminadas artificialmente com salmonelas ATCCs: S. Typhimurium, S. Enteritidis, S. Gallinarum e S. Pullorum em 102, 103 e 10 4 UFC/ml para cada protocolo, referência (Portaria 126) e alternativo (Protocolo A com Caldo Tetrationato e Protocolo B com a utilização do Caldo Cérebro Coração). Das 300 amostras processadas no protocolo A, obteve-se 45 amostras positivas para Salmonella sp., 242 negativas, 1 falso-positiva e 12 falso-negativas, enquanto das 300 amostras analisadas no protocolo B encontrou-se 40 positivas, 256 negativas, 1 falso-positiva e 3 falso-negativas. Resultando para o protocolo A, uma sensibilidade de 79%, especificidade de 99,6%, Valor Preditivo Positivo (PPV) de 98% e Valor Preditivo Negativo (NPV) de 95%; e no protocolo B obteve-se 93% de sensibilidade, 99,6% de especificidade, 98% de PPV e 99% de NPV. Ambos os protocolos apresentaram associação com o método referência (p<0,05). Concluiu-se que o MDS® desempenha eficientemente a sua finalidade em ambos os protocolos A e B, podendo ser utilizado como método de triagem, confirmado também por meio dos resultados das amostras artificialmente contaminadas.

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The Brazilian poultry industry is prominent in the production and exportation of chicken meat, being undoubtedly important to detect pathogens in the production chain. From this perspective, the existence of Salmonella sp. in poultry farming is of concern as it interferes with the consumer market, as it is one of the major microorganisms involved in foodborne diseases. In the search for alternatives to reduce the contamination of birds, Normative Instruction N o 20 of October 21 st , 2016 of the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento), aims at the control and monitoring of Salmonella sp. in commercial poultry and slaughter establishments, requiring the carrying out of laboratory tests of boot sock before slaughter, which continue to be carried out following Ordinance 126 of November 3 rd , 1995 (MAPA). Seeking to streamline the detection process, this study aimed to optimize of a Loop Mediated Isothermal Amplification (LAMP) technique using the 3M TM Molecular Detection Assay 2: Salmonella (MDS®), according to Ordinance 126, for the detection of Salmonella sp. in boot sock moistened with 1% peptoned water. For the development of the methodology, ISO 16140-2: 2016 was followed, 300 naturally contaminated boot sock samples, collected from poultry broilers in the west of Santa Catarina, and 30 samples artificially contaminated with salmonella ATCCs were analyzed: S. Typhimurium, S. Enteritidis, S. Gallinarum and S. Pullorum in dilutions 102, 103 and 10 4 for each protocol, reference (Ordinance 126) and alternative (Protocol A with Broth Tetrationate and Protocol B with the use of Broth Brain Heart). Of the 300 samples processed in protocol A, 45 positive samples were obtained for Salmonella sp., 242 negative, 1 false-positive and 12 false-negative, while of the 300 samples analyzed in protocol B, 40 positive, 256 negative, 1 false-positive and 3 false-negative. Resulting for protocol A, a sensitivity of 79%, a specificity of 99,6%, Positive Predictive Value (PPV) of 98% and Negative Predictive Value (NPV) of 95%; and in protocol B, 93% sensitivity, 99,6% specificity, 98% PPV and 99% NPV were obtained. And through Fisher's exact test, with a p-value result < 0.05 in both protocols, it means that the two protocols are associated with the reference method. It was concluded that MDS® efficiently performs its purpose in both protocols A and B, and can be used as a screening method, also confirmed through the results of artificially contaminated samples.

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