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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-221139

Resumo

Trabalhos recentes têm demonstrado que a maturação in vitro (MIV) acarreta um maior acúmulo de lipídios no ovócito, o que se reflete na qualidade dos embriões produzidos. Esse acúmulo pode ser devido a retirada prematura dos ovócitos dos folículos ou ao ambiente in vitro propriamente dito, já que não ocorre quando os ovócitos são maturados in vivo. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de três sistema de maturação: in vitro (MatV), in vivo (MatS) e Transferência intrafolicular de ovócitos imaturos (TIFOI; MatT), no acúmulo de lipídios em ovócitos bovinos. Os ovócitos foram maturados, em seus respectivos sistemas de maturação, por vinte e duas horas e, apenas os ovócitos com a presença do corpúsculo polar foram utilizados para as análises. A presença e quantificação de lipídios foi realizada pela coloração com Bodipy 493/503 em Microsocopia Confocal e por Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET). Foi também avaliada a expressão de genes relacionados ao metabolismo de lipídios por PCR em tempo real (qPCR) (Acyl-CoA Synthetase Short Chain Family Member 2, ACSS2; Fatty Acid Elongase 1, ELOVL1; Fatty Acid Binding Protein 3, FABP3). Dados relativos à cinética de maturação nuclear, quantificação do acúmulo de gotas lipídicas e expressão gênica, foram analisados pelo teste Qui-quadrado, ANOVA (GLIMMIX) e KruskalWallis, respectivamente. Para todas as análises um nível de significância de 5% (p<0,05%) foi considerado. A média da área ocupada pelos lipídios nos ovócitos imaturos (IMA; 13% ±1.9) foi similar (p>0,05%) aos ovócitos maturados in vivo (MatS= 16% ± 1,7 e MatT= 12% ± 1,9). Entretanto, nos ovócitos maturados in vitro (MatV), houve um aumento no acúmulo de lipídios (24% ±1,9) durante a maturação sendo maior do que nos outros grupos (p<0,001). Na avaliação ultraestrutural os ovócitos MatV apresentaram uma maior presença de lipídios. Contudo, todos os grupos foram semelhantes quanto a organização dos grânulos corticais e mitocôndrias. A expressão dos genes ACSS2, ELOVL1 e FABP3 foram semelhantes entre os grupos MatS e MatT (p > 0,05%), contudo, os ovócitos MatS também foram semelhantes (p > 0,05%) aos MatV. Pela primeira vez, foi demonstrado que ovócitos maturados pela TIFOI são semelhantes aos ovócitos maturados in vivo, quanto ao acúmulo de lipídios, o que implica na superior qualidade quando comparado com os in vitro. Este novo método de maturação abre novas possibilidades para as biotecnologias que necessitam da maturação de ovócitos como a PIVE, criopreservação de ovócitos e embriões, clonagem e transgenia.

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We aimed to evaluate the effects of three maturation systems: in vitro (MatV), in vivo (MatS), and intrafollicular transfer of immature oocytes (IFIOT; MatT), on the accumulation of lipid droplets in bovine oocytes. Lipid evaluations were performed by Confocal Microscopy (Bodipy 493/503) and Transmission Electron Microscopy (TEM). The expression of genes related to lipid metabolism (Acyl-CoA Synthetase Short Chain Family Member 2, ACSS2; Fatty Acid Elongase 1, ELOVL1; Fatty Acid Binding Protein 3, FABP3) was quantified by quantitative polymerase chain reaction (qPCR). The area occupied by lipids of IMA groups (13% ± 1.9) was similar (p > 0.05%) to those in vivo (MatS = 16% ± 1.7 and MatT = 12% ± 1.9). However, lipids increased in the oocytes of the MatV group (24% ± 1.9), with this increase being higher than that in the other groups (p < 0.001). In the ultrastructural evaluations, MatV oocytes also showed the highest lipid content. The expression of ELOVL1 and FABP3 were similar for MatS and IFIOT groups (p > 0.05%). However, transcript level for ACSS2 gene was lower in IFIOT oocytes than in MatV oocytes. Our results indicated, for the first time, that oocytes matured by IFIOT are similar to those matured in vivo, regarding lipid accumulation, which indicates better quality when compared to in vitro.

Biblioteca responsável: BR68.1