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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-221159

Resumo

A transferência de embriões frescos resulta em maior taxa de gestação comparada à transferência de embriões criopreservados, sugerindo comprometimento do estabelecimento da gestação após criopreservação. Este estudo objetivou avaliar o efeito da técnica de criopreservação (vitrificação ou congelação lenta) de embriões ovinos produzidos in vivo, na taxa de sobrevivência e perfil de expressão de genes relacionados à apoptose (BAX, BCL2), proliferação e diferenciação celular (TGFB1), respiração celular (NFR1), manutenção da pluripotência (NANOG) e implantação (CDX2). Trinta e duas ovelhas foram submetidas à superovulação e posterior coleta de embriões. Os embriões obtidos foram classificados quanto ao estágio de desenvolvimento e qualidade. Os embriões GI e GII foram uniformemente distribuídos dentro dos grupos experimentais: CONT) blastocistos frescos (n=15); CONG) congelação lenta (n=42); ou VIT) vitrificação (n=43). Os embriões CONT foram congelados a seco em três pools de cinco embriões, para posterior RT-qPCR. Os embriões CONG e VIT após descongelamento/aquecimento, respectivamente, foram alocados para análise de expressão gênica ou cultivo in vitro (24 e 48 h) em meio SOF com aminoácidos suplementado com 2,5% soro fetal bovino, a 38,5 °C e 5% CO2 (CONG: n=27; VIT: n=28). As taxas de sobrevivência de CONG e VIT foram, respectivamente, 29,6% (8/27) e 14,2% (4/28) em 24 h; e 48,1% (13/27) e 32,1% (9/28) em 48 h (P > 0,05). Independentemente da técnica de criopreservação, o gene CDX2 foi super expresso (P < 0,05) quando comparado ao CONT. A expressão dos genes BAX, BCL2, TGFB1 e CDX2 foi aumentada no grupo VIT (P < 0,05) quando comparados ao CONT. Contudo, quando as duas técnicas de criopreservação foram comparadas, apenas o gene BAX foi super expresso (P < 0,05) no VIT, em comparação com o CONG. Esses dados sugerem que o decréscimo de 16% (não-significativo) na taxa de sobrevivência, observado no grupo VIT, pode estar associado ao aumento na expressão do gene pró-apoptótico (BAX). Em conclusão, a técnica de vitrificação levou a um decréscimo de 16% (não significativo) na taxa de sobrevivência do embrião e aumento do gene pró-apoptótico.

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Transfer of fresh sheep embryos have a higher pregnancy rate compared to cryopreserved embryos, suggesting that cryopreservation compromises embryonic signaling during implantation and establishment of pregnancy. This mechanism needs to be more clarified. Thus, this study aimed to evaluate the effect of the cryopreservation technique (vitrification or slow freezing) of sheep embryos produced in vivo on embryo survival rate and expression of genes related to apoptosis (BAX and BCL2), cellular differentiation and proliferation (TGFB1), cellular respiration (NFR1), maintenance of pluripotency (NANOG) and implantation (CDX2). Superovulation (n=32 ewes) was performed and embryos were transcervically collected. A total of 100 GI/II embryos was randomly allocated into three groups: 1) fresh blastocysts (CONT; n=15); 2) slow freezing (SF; n=42); or 3) vitrification (VT; n=43). After thawing/warming, three pools of five embryos per group were used for RT-qPCR; and other embryos were cultured in vitro (24 and 48 h) in SOF with aminoacids and 2.5% of fetal bovine serum medium at 38.5 °C and 5% CO2 (SF: n=27; VT: n=28). Embryonic survival rate of SF and VT were, respectively, 29.6% (8/27) and 14.2% (4/28) at 24 h; and 48.1% (13/27) and 32.1% (9/28) at 48 h (P > 0.05). Only the CDX2 gene was affected (up-regulated, P < 0.05) in both groups compared to CONT. The BAX gene was up-regulated in VT, compared to SF group. The VT increased (P < 0.05) the expression of all genes associated with embryonic quality and implantation, except for NANOG and NRF1, when compared to the CONT. In conclusion, the VT technique led to a decrease of 16% (non-significant) in embryo survival rate and increased pro-apoptotic gene expression.

Biblioteca responsável: BR68.1