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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-221237

Resumo

O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização molecular de estirpes de Listeria monocytogenes e Salmonella spp. isoladas de biofilmes de ambientes de abatedouros frigoríficos de aves e bovinos localizados no Distrito Federal e estado de Goiás. Objetivou-se caracterizar os isolados de L. monocytogenes através da sorotipificação e através da análise de variabilidade genética pela técnica da PFGE. Para Salmonella spp., objetivou-se realizar caracterização pela análise do WGS. Realizou-se a análise da sequência de fragmentos do gene inlA nos isolados de L. monocytogenes para detecção de PMSCs. Para avaliação do potencial patogênico desses isolados, realizou-se o teste de adesão e invasão em cultivo de células Caco-2, além da detecção de resistência antimicrobiana em todos os isolados através de antibiograma pela técnica de difusão em disco e pesquisa de genes de resistência antimicrobiana por PCR, no caso dos isolados de L. monocytogenes, e WGS, para o isolado de Salmonella spp.. Avaliou-se a capacidade de formação de biofilme dos isolados a 37ºC e 12ºC, com 24 e 168 horas de incubação respectivamente, pelo teste em microplaca de poliestireno. Foram detectados 14 isolados de L. monocytogenes e um (01) isolado de Salmonella spp. em dois dos três abatedouros frigoríficos de aves estudados. Nenhum isolado foi detectado nos dois abatedouros frigoríficos de bovinos. Todos os isolados de L. monocytogenes pertenceram à linhagem II (sorotipo 1/2a), e foram observados 11 pulsotipos diferentes. O isolado de Salmonella foi identificado como Salmonella enterica sorovar Ruiru. Não foram detectados PMSCs no sequenciamento do gene da inlA dos isolados de L. monocytogenes, e todos estes isolados foram capazes de aderir em células Caco-2, enquanto 50% deles foram também capazes de invasão das células. Foi detectada resistência antimicrobiana em 57,1% dos isolados de L. monocytogenes, sendo a resistência às sulfonamidas a mais observada. Foram detectados os genes tetC, ermB e tetM, e quatro dos isolados detectados foram classificados com multirresistentes. O isolado de Salmonella spp. apresentou resistência a 9 antimicrobianos e foi classificada como multirresistente, e foram detectados os genes de resistência qnrB19, blaCMY-2, aac(6)-1aa, sul2 e tetA, além de mutação no gene parC p. T57S. 78,5% dos isolados de L. monocytogenes foram capazes de formação de biofilme a 37ºC/ 24h de incubação e 64,3% foram capazes de formação de biofilme a 12ºC/168h de incubação. Não houve diferença estatística na capacidade de formação de biofilme nas diferentes temperaturas avaliadas. O isolado de Salmonella spp. foi capaz de formar biofilme em ambas as temperaturas testadas. A caracterização dos biofilmes, bem como a sua presença nos estabelecimentos abatedouros frigoríficos de aves deste estudo foi confirmada pelas coletas repetidas dos mesmos pontos, e pelo teste de capacidade de formação de biofilme in vitro. Desta forma, estes resultados ressaltam o risco potencial de contaminação cruzada nos ambientes de abatedouros frigoríficos de aves. Os testes de adesão e invasão, aliados à ausência de PMSCs nos isolados de L. monocytogenes, à resistência antimicrobiana e à observação de isolados multirresistentes para os dois microrganismos detectados demonstram o risco potencial para a saúde pública, e destacam a importância da vigilância e manutenção de programas de controle de patógenos dentro da indústria de produção de carnes.

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The aim of this study was to perform the molecular characterization of Listeria monocytogenes and Salmonella spp. strains isolated from biofilms of poultry and bovine slaughter plants located in Distrito Federal and Goiás state. Strain serotyping was performed via PCR for L. monocytogenes and WGS for Salmonella. Genetic polymorphism of L. monocytogenes strains was evaluated via PGFE. Sequence analysis of inlA gene fragments was performed aiming PMSCs detection. For assessment of pathogenic potential, adhesion and invasion essays using Caco-2 cells were performed with all L. monocytogenes strains. Antibiotic resistance profile was also assessed by disk-diffusion test, in addition to detection of resistance genes via PCR, regarding L. monocytogenes strains, and WGS for Salmonella sp. strain. Assessment of biofilm formation ability was performed by polystyrene microplate test at 12ºC and 37ºC in 24 and 168 hours of incubation respectively. It was detected 14 L. monocytogenes isolates and one Salmonella sp. isolate in two out of the three evaluated poultry slaughter plants. No isolate was detected in bovine slaughter plants. All L. monocytogenes isolates belonged to lineage II (serotype 1/2a), and 11 pulsotypes were detected. The Salmonella strain was identified as Salmonella enterica serovar Ruiru. No PMSCs were detected in the inlA gene sequence fragments analysed in this study, and the L. monocytogenes isolates were capable of Caco-2 cell adhesion, while 50% of them were also capable of Caco-2 cell invasion. Antimicrobial resistance was detected in 57.1% of the L. monocytogenes strains, and sulphonamides resistance was the most detected resistance. It was detected the resistance genes tetC, ermB and tetM, and four of these isolates were classified as multiresistent strains. Salmonella sp. strain presented resistance to nine antimicrobials and was classified as multiresistent, and it was detected the resistance genes qnrB19, blaCMY-2, aac(6)-1aa, sul2 and tetA, besides the parC gene mutation p.T57S. 78.5% and 64.3% of L. monocytogenes strains showed biofilm formation ability at 37ºC/ 24h incubation and 12ºC/ 168h incubation respectively. There was no significant difference in biofilm formation ability between the two evaluated temperatures. Biofilm characterization, along with bacterial presence in poultry laughter plants analysed in this study, was confirmed by repeated and serial sampling at the same sampling points associated with biofilm formation ability in vitro essays. The results presented highlight the potential risk of cross-contamination in poultry slaughter plants. Adhesion and invasion essays, along with PMSCs absence in L. monocytogenes strains, and detection of antimicrobial resistance and multiresistent isolates in both evaluated microorganisms, highlight the potential risk regarding public health, and therefore show the importance of surveillance and maintenance of pathogen control programs in the meat production industry.

Biblioteca responsável: BR68.1