Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-221345

Resumo

A língua azul e a doença epizoótica hemorrágica são viroses caracterizadas pela ocorrência de distúrbios hemorrágicos em cervídeos e são responsáveis por impactos negativos na conservação dessas espécies. Essas doenças apresentam como agentes etiológicos os vírus BTV e EHDV, respectivamente. A vacinação é o método mais eficaz de controle e prevenção dessas viroses, entretanto, no Brasil, vacinas contra o BTV e o EHDV não são licenciadas pelos órgãos competentes e não há vacinas disponíveis para cervídeos no mercado nacional e exterior. Em razão do exposto, o principal objetivo dessa pesquisa foi o desenvolvimento de vacinas e a realização de ensaios pré-clínicos com formulações vacinais contendo amostras de BTV-3, BTV-14, BTV-18, BTV-19, BTV-22, BTV-24, EHDV-1 e EHDV-2 isoladas na reserva biológica da Itaipu Binacional. As suspensões virais obtidas em laboratório foram inativadas pela beta-propriolactona, adjuvadas de 10% de hidróxido de alumínio e 40% de saponina e distribuídas em duas vacinas distintas: vacina 1 (sorotipos BTV-3, BTV-14, BTV-18 e BTV-19) e vacina 2 (sorotipos BTV-22, BTV-24, EHDV-1 e EHDV-2). Em seguida, testes de inativação viral, esterilidade, inocuidade e potência foram realizados. O teste de inativação viral confirmou a inativação completa dos vírus, enquanto o teste de esterilidade demonstrou a ausência de crescimento bacteriano. O teste de inocuidade, realizado em quatro coelhos, não evidenciou nenhum efeito adverso à vacinação. Para a realização do teste de potência, foram utilizados 15 coelhos distribuídos equitativamente em três grupos experimentais. Os animais foram vacinados isoladamente (G1 Vacina 1; G2 Vacina 2) e associadamente (G3 Vacinas 1+2) com três doses, administradas aos 0, 21 e 51 dias de experimentação. As mensurações de anticorpos totais e anticorpos neutralizantes do teste de potência foram realizadas, respectivamente, por meio de imunodifusão em gel de ágar (IDGA), utilizando as amostras coletadas aos 81 dias de experimentação, e soroneutralização em microplaca, utilizando as amostras coletadas aos 0, 21, 51 e 81 dias de experimentação. Os resultados do IDGA indicaram a presença de anticorpos totais em 100% dos animais testados para BTV, demonstrando que os antígenos foram capazes de induzir resposta imune humoral. Não foram realizados testes de IDGA para o EHDV. Já no teste de soroneutralização, as medianas obtidas indicaram ausência de anticorpos neutralizantes para o EHDV e presença de anticorpos neutralizantes para o vírus BTV-18 (na vacinação isolada), e BTV-18, BTV-19 e BTV-24 (na vacinação associada) nas amostras coletadas no 81º dia de experimentação. Foi possível observar que as formulações desenvolvidas não foram capazes de induzir resposta de anticorpos neutralizantes para todos os sorotipos e que a vacinação associada promoveu melhor resposta imune humoral. Nossos resultados permitirão o desenvolvimento de novas pesquisas para a formulação de vacinas para cervídeos brasileiros.

---

Bluetongue and epizootic hemorrhagic are viruses diseases characterized by the occurrence of hemorrhagic disorders in deer and are responsible for negative impacts on these species conservation. These diseases have BTV and EHDV viruses, respectively, as their etiologic agents. Vaccination is the most effective method of controlling and preventing these viruses. However, in Brazil, vaccines against BTV and EHDV are not licensed by regulatory organizations and there are no vaccines available for deer in national or foreign markets. In view of the above, the main objective of this research was the development of vaccines and the performance of pre-clinical trials with vaccine formulations containing samples of BTV-3, BTV-14, BTV-18, BTV-19, BTV22, BTV -24, EHDV-1 and EHDV-2 isolated in the biological reserve of Itaipu Binacional. The viral suspensions obtained in the laboratory were inactivated by beta-propiolactone, adjuvanted with 10% aluminum hydroxide and 40% saponin and distributed in two different vaccines: vaccine 1 (serotypes BTV-3, BTV-14, BTV-18 and BTV -19) and vaccine 2 (serotypes BTV-22, BTV-24, EHDV-1 and EHDV-2). Then, viral inactivation, sterility, inoculation, and potency tests were performed. The viral inactivation test confirmed complete virus inactivation, while the sterility test demonstrated the absence of bacterial growth. The inoculation test, carried out on four rabbits, did not show any adverse effects to vaccination. To perform the potency test, 15 rabbits were equally distributed in three experimental groups. The animals were vaccinated separately (G1 - Vaccine 1; G2 - Vaccine 2) and in combination (G3 - Vaccines 1 + 2) with three doses, administered at 0, 21 and 51 days of experimentation. The measurements of total antibodies and neutralizing antibodies of the potency test were carried out, respectively, by means of agar gel immunodiffusion (AGID), using the samples collected after 81 days of experimentation, and soroneutralization in microplate, using the samples collected at 0, 21, 51 and 81 days of experimentation. The results of the AGID indicated the presence of total antibodies in 100% of the animals tested for BTV, demonstrating that the antigens were able to induce humoral immune response. No AGID tests were performed for EHDV. In the soroneutralization test, the medians obtained indicated the absence of neutralizing antibodies for EHDV and the presence of neutralizing antibodies for BTV-18 virus (in the isolated vaccination), and BTV-18, BTV-19 and BTV-24 viruses (in the associated vaccination) in samples collected on the 81st day of experimentation. It was possible to observe that the formulations developed were not able to induce neutralizing antibody response for all serotypes and that the associated vaccination promoted a better humoral immune response. Our results will allow the development of new research for the formulation of vaccines for Brazilian deer

Biblioteca responsável: BR68.1