AVALIAÇÃO DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES PARA DETECÇÃO DE ANTICORPOS CONTRA Mycobacterium bovis POR ELISA
Souza, Ingrid Ieda Fernando De.
Tese
em Português
| VETTESES
| ID: vtt-2253
Resumo
A tuberculose bovina é uma importante doença infecciosa crônica causada pela bactéria Mycobacterium bovis, responsável por consideráveis perdas econômicas, além de constituir problema de saúde pública. Os programas de controle da enfermidade realizados na maioria dos países são baseados na identificação e eliminação de animais infectados. A utilização de um teste sorológico, como o Ensaio de Imunoadsorção Enzimática (ELISA), pode incrementar a cobertura diagnóstica desta doença. Assim, o objetivo neste estudo foi produzir proteínas recombinantes CFP-10, ESAT-6, Mb0143, MPB83, PE5, PE13, TB10.4, TB15.3 e uma quimera com fragmentos hidrofílicos de MPB70, MPB83 e ESAT-6 de M. bovis e avaliá-las como antígenos em ensaios ELISA. Os genes foram clonados no plasmídeo pET- 47b(+), com exceção de mpb83, clonado em pRSET-C e tb10.4 clonado em pET-28a (+), sendo expressos em Escherichia coli Rosetta. Após purificação por cromatografia de afinidade, as proteínas foram testadas por ELISA com 107 soros de bovinos positivos ao Teste Cervical Comparativo (TCC) e 126 soros de animais negativos ao TCC. Detectaram-se sensibilidades entre 28% e 83,2%; e especificidades entre 58,7% e 92,9%. Os testes com ESAT-6, MPB83 e PE5 tiveram concordância média (índices kappa de 0,447; 0,554 e 0,404, respectivamente) e a quimera, uma boa concordância (índice kappa de 0,688) com o TCC. Os testes com as demais proteínas tiveram concordâncias mínimas com o TCC. Sugere-se que a combinação do ensaio ELISA utilizando a quimera com os testes intradérmicos pode melhorar a cobertura diagnóstica da tuberculose bovina
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BR68.1