Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Niterói; s.n; 01/09/2012. 84 p.

Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-609

Resumo

A ehrlichiose canina é doença causada por bactérias Gram negativas estritamente intracelular, que pertencem ao gênero Ehrlichia.Diferentes espécies deste gênero podem parasitar leucócitos, eritrócitos e plaquetas e desencadear alterações patológicas em vários órgãos . O principal agente etiológico da ehrichiose canina é a espécie Ehrlichia canis. O diagnostico etiológico da ehrlichiose é importante para o tratamento e monitoramento epidemiológico da doença. O diagnostico laboratorial pode ser realizado através da visualização de mórulas em esfregaços sanguíneos, podendo ser confirmado pela titulação de anticorpos séricos, pelo isolamento do microrganismo ou ainda pela detecção do DNA da Ehrlichia spp pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). Os testes sorológicos são os mais indicados devido ás dificuldades encontradas nos testes de detecção direta do microrganismo. Entretanto, reações cruzadas podem ocorrer devido a antígenos comuns presentes nas diferentes espécies de gênero Ehrlichia. Proteínas antigênicas de superfície, características de E. canis, tem sido pesquisadas com o objetivo de melhorar a especificidade dos testes sorológicos. A identificação dessas moléculas tem possibilitado a obtenção de proteínas recombinantes que podem ser utilizadas como antígenos específicos evitando assim possíveis reações cruzadas. A produção de antígenos pela tecnologia do DNA recombinante permite a obtenção de grande quantidade de proteínas especificas a partir de cultura celular sem a necessidade de utilizar modelos in vivo (animais-infecções experimentais). Os testes comerciais para diagnostico da ehrlichiose canina são importados e onerosos para o clínico veterinário. Desta forma, o objetivo deste estudo foi obter, pela tecnologia do DNA recombinante, uma proteína antigênica de E. canis e avaliar a aplicação desse produto em testes imunológicos visando o diagnostico sorológicos da ehrlichiose canina. Para tanto, um isolado de E. canis (amostra São Paulo)foi cultivado em células DH82 para obtenção do DNA da bactéria. Após amplificação do DNA bacteriano, correspondente à porção antigênica da proteína TRP36, o fragmento foi ligado ao vetor de clonagem pBAD/Thio –TOPO. O plasmidio contendo o gene codificado da TRP36 foi transferido por eletroporação para células E. coli DH-10B para expressão da proteína TRP36. Após isolamento por cromatografia de afinidade, a proteína recombinante foi avaliada por ensaios imunológicos quanto a sua antigenicidade. Os testes de ELISA indireto e Western blot, utilizando a TRP36 como antígeno, revelaram a presença de anticorpos específicos nos soros de animais infectados naturalmente com E. canis. Estes resultados confirmam a antigenidade da proteína recombinante obtida. Os resultados dos testes preliminares de aglutinação do látex sensibilizado com essa proteína como antígeno, indicam a possibilidade de usar essa molécula recombinante no sorodiagnóstico da ehrlichiose canina.(AU)

Biblioteca responsável: BR68.1

Localização: BR68.1