Bodesinas : espermadesinas codificadas por genes da vesícula seminal de caprinos domésticos (Capra hircus)
Teixeira, Darcio Italo Alves.
Tese
em Português
| VETTESES
| ID: vtt-7327
Resumo
O plasma seminal de mamíferos contêm entre outras, proteínas denominadas espermadesinas, as quais são as proteínas majoritárias do plasma seminal de suínos e eqüinos. Estas proteínas parecem estar envolvidas na capacitação espermártica e na interação espermatozóide-oócito. Previamente, foi relatada a presença de uma proteína relacionada às espermadesinas no plasma seminal de caprinos. Este trabalho foi executado em duas etapas com diferentes objetivos. Na primeira etapa, foram realizados estudos aprofundados sobre esta proteína e foi proposta a técnica de cromatografia de troca iônica para obtenção desta proteína seminal. Na segunda etapa, objetivou-se encontrar o gene que codifica a espermadesina caprina. O plasma seminal de quatro bodes Saanen adultos foi agrupado e dializado contra água destilada e congelado. Proteínas liofilizadas foram inseridas em uma coluna de cromatografia de troca iônica. Proteínas dializadas-liofilizadas do pico principal da DEAE-Sephacel foi aplicado a uma coluna C2/C18 acoplada ao RP-HPLC. As proteínas da cromatografia DEAE-Sephacel foram dializadas e submetidas a Heparina-Sepharose-HPLC. Para alcançar o segundo objetivo, foi preparado o cDNA do testículo e vesícula seminal de um bode sexualmente maturo. Para amplificar o cDNA 3-end foram testados dois primers desenhados de diferentes regiões conservadas da espermadesina caprina. O plasma seminal caprino produziu 6,47 ± 0,6 3 mg (media ± EP) de uma fração majoritária retida. A proteína foi primariamente denominada BSFP (proteína do fluído seminal de bode). A BSFP não mostrou capacidade ligante à heparina. Quanto à clonagem e seqüênciamento dos produtos de PCR levou à identificação de três novos cDNAs codificando as espermadesinas caprinas, os quais foram denominados bodesina-1, 2 e 3. Todas as três seqüências de aminoácidos deduzidas são altamente similares (50%) à espermadesina suína e a seqüência da bodesina-2 é idêntica ao N-terminal da BSFP. Em conclusão, a espermadesina caprina pode ser eficientemente isolada por cromatografia de troca iônica e fase reversa. Finalmente, estes resultados indicam que as bodesinas parecem formar uma família de multigenes que codificam proteínas com domínio CUB conservado essencial para sua função biológica. Ao nosso conhecimento, este é o rpimeiro relato de clonagem molecular das espermadesinas caprinas (bodesinas)
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BR68.1