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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-7455

Resumo

O presente trabalho teve por objetivo a detecção da via metabólica do chiquimato em Leishmania (Viannia) braziliensis. Para tanto foi utilizada a cepa 575 de L. braziliensis, cujo cultivo foi acrescido de N-fosfonometilglicina (glifosato), um inibidor competitivo da sétima enzima da via metabólica do chiquimato (5-fosfoenol-piruvil-chiquimato-3-fosfato-sintase). A viabilidade de promastigotas, mantidos sob cultivo, foi medida através da contagem hemocitométrica do número relativo de parasitas em meio axênico, por diferentes períodos de tempo, assim como pelo ensaio de exclusão de corante vital (Azul de Trypan). A atividade enzimática mitocondrial foi avaliada através do ensaio de desdobramento do azul de Tetrazólio (MTT). Os protozoários tratados foram, também, submetidos a cultivo em ausência de interferentes para avaliação da atividade parasiticida. Ensaios de toxidez, realizados em cultivos de hepatócitos e de macrófagos, serviram para se estimar a seletividade do estresse metabólico induzido pelo glifosato. As alterações morfológicas decorrentes do tratamento foram avaliadas através de microscopia ótica e microscopia eletrônica de transmissão. O efeito parasiticida ocorreu após a exposição de 0,39 mM de glifosato por 24 horas sobre 104 promastigotas. Os efeitos biológicos decorrentes da exposição a 0,02 mM de glifosato manifestaram-se independentemente do período de exposição (entre 1 e 150 minutos), pela paralisação dos movimentos flagelares para 90-100% dos promastigotas expostos, culminando com a morte dos parasitos após 180 minutos de exposição. A ação sobre o metabolismo energético foi confirmada através da detecção da ausência da atividade mitocondrial nos protozoários tratados. As alterações morfológicas observadas foram relacionadas a sinais apoptóticos. O tratamento dos protozoários com extratos vegetais confirmaram ser o metabolismo energético um alvo de interesse para a seleção de fármacos antiparasitários a serem empregados no controle de protozoários parasitas. O tratamento com extratos de Hydrocotyle umbellata, possuidora de atividade antioxidante indicou um favorecimento ao desenvolvimento parasitário. Ao contrário, a ação de Solanum crinitum, a qual apresenta modulação negativa para as formas infectantes de Trypanosoma cruzi, evidenciou estresse metabólico nos promastigotas, que se apresentaram paralisados após 15 minutos de exposição a 0,5 mg.mL-1 do extrato hexânico, com o aparecimento de intensa vacuolização citoplasmática , culminando com morte parasitária, após 30 minutos de exposição. Não foram observados efeitos tóxicos nas células de mamíferos expostas às concentrações de glifosato utilizadas, sugerindo um elevado índice terapêutico e indicando ser este uma potencial base para a formulação de novos fármacos para a leishmaniose tegumentar americana. Uma vez que o glifosato é seletivo para a via metabólica do chiquimato, pode-se depreender que em flagelados da família Kinetoplastidae, esta via metabólica está relacionada ao metabolismo energético mitocondrial e não à síntese de purinas, como ocorre em parasitos do filo Apicomplexa

Biblioteca responsável: BR68.1