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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-762

Resumo

O presente trabalho utiliza a Espectrometria de Massas para caracterização e quantificação de diferentes analitos em matrizes biológicas. Inicialmente é demonstrado o desenvolvimento de uma técnica para análise direta de triacilgliceróis (TAG) em carnes e tecidos, que podem então ser caracterizados por seu perfil lipídico. Nesta técnica, uma etapa de foto aquecimento visa extrair quase instantaneamente TAG da matriz, utilizando pouco ou nenhum solvente. O conteúdo extraído e coletado num papel pardo é então analisado por EASI-MS (Easy Ambient Sonic-spray Ionization - Mass Spectrometry), revelando o perfil de TAG em poucos segundos, sem necessidade de hidrólise, derivação ou outras extrações. Thermally-imprinted EASI-MS (T-EASI-MS) é uma técnica capaz de diferenciar tipos de carnes e seus resultados mostraram-se concordantes com a literatura e com outras técnicas tradicionais para análise de lipídios. Num segundo momento, utilizou-se a espectrometria de massas como ferramenta de quantificação, através do desenvolvimento de dois métodos analíticos para análise de cortisol em plasma e leite bovinos, utilizando LC-MS/MS (cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas seqüencial). Os métodos aqui desenvolvidos foram validados utilizando a metodologia de compatibilização de matriz (para o plasma) e de calibração direta em solvente (curva não extraída) para o leite. Ambos os métodos empregaram pequeno volume de amostra e forneceram baixos limites de quantificação (0,1 ng mL e 0,15 ng mL de cortisol para o plasma e leite, respectivamente). A metodologia desenvolvida foi aplicada para análise de dois experimentos veterinários. No primeiro foi investigada a correlação entre as concentrações de cortisol no plasma e no leite bovino, bem como o efeito da ordenha sobre a concentração do cortisol nesses fluídos biológicos. No segundo nível de cortisol em vacas com e sem mastite sub-clínica foi investigado e os resultados foram comparados aos resultados obtidos por ELISA (Enzime-linked Immunosorbent Assay) para as mesmas amostras

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This research uses mass spectrometry (MS) as a tool to characterize and quantify different analytes in biological matrices. At first, the development of a technique for direct analysis of triacylglycerols (TAG) in meats and animal tissues is shown. This technique allows sample characterization through its lipid profile. It starts with a photo-heating process which aims to extract, almost instantaneously, TAG from the matrix, using very little amounts of solvent. The extract is collected on a paper which is then analyzed by EASI-MS (easy ambient sonic-spray ionization), thus revealing the TAG profile in a few seconds, without the use of hydrolysis, derivatization or exhaustive extractions. Thermally-imprinted EASI-MS (T-EASI-MS) is able to differentiate kinds of meats and has been shown to be in agreement with previous reported data and results from traditional techniques used for lipid analysis of the same samples. In a second phase, this research uses MS as a tool for quantitative analyses, through the development of two analytical methods for cortisol analysis in bovine plasma and milk, using a LC-MS/MS (liquid chromatography - tandem mass spectrometry) system. These methods were fully validated using the matrix matched methodology for plasma analysis and a non-extracted calibration curve (prepared in solvent) for milk analysis. Both methodologies use small amounts of sample and achieved very low limits of quantification (0.1 ng mL and 0.15 ng mL of cortisol for plasma and milk, respectively). The methods were applied to the analysis of samples from two veterinary experiments. In the first one, the aim was to investigate the correlation between bovine plasma and milk cortisol concentrations, as well as to determine if the milking process can change basal cortisol level in these fluids. In the second experiment, the aim was to evaluate whether milk cortisol concentrations varied or not in cows with or without sub-clinical mastitis. The samples of the second experiment were also analyzed by ELISA (enzime-linked immunosorbent assay) in order to compare the results with those from LC-MS/MS

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