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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-9258

Resumo

O objetivo deste trabalho foi investigar a presença de dermatófitos e leveduras em cães saudáveis e doentes, bem como verificar a eficácia do repique em ágar batata (PDA) como complemento ao teste de sensibilidade in vitro para cepas de Malassezia pachydermatis. Foram coletadas 633 amostras a partir de 26 cães saudáveis (104 amostras), 131 com dermatite (343 amostras), 74 com otite (148 amostras) e 19 com desordens oftálmicas (38 amostras). A identificação fúngica foi baseada nos aspectos macro e micromorfológicos, além de provas bioquímicas. O teste de microdiluição foi realizado em placa de 96 poços utilizando o meio RPMI 1640 modificado. Observou-se que 14,3% (2/14) das culturas positivas de dermatite para M. pachydermatis e 40,9% (9/22) daquelas para Microsporum canis foram positivas no exame direto. A coloração de Gram apresentou positividade de 84,3% (70/83) das amostras de otite com cultura positiva para M. pachydermatis. Culturas a partir dos animais saudáveis foram positivas para M. pachydermatis em 13,5% (7/52) das amostras de pele, 42,3% (11/26) do ouvido e 3,8% (1/26) do saco conjuntival. Dos animais com dermatite, foi observado crescimento fúngico em 20,4% (70/343) das amostras, sendo o M. canis o fungo mais isolado (n=39), seguido de M. pachydermatis (n=30) e Malassezia sp. (n=3). Das 148 amostras de cães com otite, 90 (60,8%) foram positivas para M. pachydermatis e uma (0,7%) para Candida tropicalis. Dos espécimes clínicos da conjuntiva de animais com desordens oftálmicas, apenas uma amostra (2,6%) apresentou cultura positiva para M. pachydermaits. A partir da análise da sensibilidade antifúngica, observou-se que o repique em ágar batata permite tanto a determinação da CIM quanto da CFM. Dessa forma, foi observado que todas as cepas (n=50) apresentaram valores de CIM de < 0,03, 0,03, 2,0 e 4,0 μg/ml e de CFM 0,06, 0,125, 8,0 e 16,0 μg/ml para itraconazol, cetoconazol, voriconazol e fluconazol, respectivamente. Para a anfotericina B a CIM/CFM foi 4,0 μg/ml. A CIM e CFM para a caspofungina não foi estabelecida e foi provavelmente maior que 8,0 μg/ml, que foi a maior concentração testada para esta droga. Pode-se concluir que apesar da importância do exame direto, a cultura fúngica é essencial para diminuir a quantidade de resultados falso-negativos. Os dados evidenciaram que o M. canis foi o único dermatófito e o fungo mais freqüentemente isolado de animais apresentando dermatite. Além disto, foi verificado que a levedura M. pachydermatis está presente tanto em animais saudáveis quanto naqueles apresentando dermatite e desordens oftálmicas, e em maior freqüência em cães apresentando otite. Por fim, o repique em ágar batata como complemento ao teste de microdiluição em caldo pode ser uma alternativa para a análise da sensibilidade antifúngica in vitro de M. pachydermatis

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The aim of this study was to investigate the presence of dermatophytes and yeasts in healthy and diseased dogs, as well as to verify the efficacy of the subculture on potato dextrose agar as a complement to the in vitro susceptibility test for Malassezia pachydermatis strains. A total of 633 samples were collected from 26 healthy dogs (104 samples), 131 with dermatitis (343 samples), 74 with otitis (148 samples) and 19 with ocular diseases (38 samples). Fungal identification was based on macro and micromorphologic characteristics, as well as by specific biochemical tests. The microdilution assay was performed in 96-well plates using a modified RPMI 1640 medium. It was observed that 14.3% (2/14) of the positive dermatitis cultures for M. pachyermatis and 40.9% (9/22) of those for Microsporum canis were positive in the direct exam. Direct exam with Gram stais were positive in 84.3% (70/83) if the culture positive samples from otitis. Cultures from healthy animals were positive for M. pachydermatis in 13.5% (7/52) of the samples from the skin, 42.3% (11/26) from the ear and 3.8% (1/26) from the eye. Fungal growth was observed in 20.4% (70/343) samples from animals with dermatitis, with M. canis being the most isolated fungus (n=39), followed by M. pachydermatis (n=30) and Malassezia sp. (n=3). Of the 148 samples from dogs with otitis, 90 (60.8%) were positive for M. pachydermatis and one (0.7%) for Candida tropicalis. Of the clinical specimens from the conjunctiva of animals with ophthalmic disease, only one sample (2.6%) presented positive cultures for M. pachydermatis. Through the antifungic susceptibility analysis, it was observed that the subculture on PDA allows the determination of both MIC and MFC. Therefore, it was observed that all strains (n=50) had shown MIC values of < 0.03, 0.03, 2.0 and 4.0 μg/ml and MFC of 0.06, 0.125, 8.0 and 16.0 μg/ml for itraconazole, ketoconazole, voriconazole and fluconazole, respectively. For amphotericin B the MIC/MFC was 4.0 μg/ml. The MIC and MFC for caspofungine was not established and was probably higher than 8.0 μg/ml, which was the highest concentration tested for this drug. We can conclude that, although the importance of direct exam, fungal culture is essential to diminish the quantities of false negative results. The data also evidenced that M. canis was the only dermatophyte and the most isolated fungus from animals presenting dermatitis. In addition, it was verified that the yeast M. pachydermatis is found in healthy animals, as well as in those presenting dermatitis and ocular diseases, and more frequently in dogs with otitis. Finally, the subculture on potato dextrose agar as a complement to broth microdilution assay could be an alternative to the in vitro antifungal susceptibility testing for M. pachydermatis

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