Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Botucatu; s.n; 2009/06/26. 75 p.

Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-9512

Resumo

A infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) é uma das mais importantes doenças infecciosas dos gatos. Os gatos infectados apresentam uma variedade de sinais clínicos inespecíficos e para confirmar a infecção são necessários testes laboratoriais específicos. A detecção de anticorpos anti-FIV circulantes possui uma correlação direta com a infecção viral, pois uma vez infectado o gato permanece infectado permanentemente. No presente estudo, foi desenvolvido um método para produzir um antígeno recombinante com a fusão da proteína de capsídeo viral (p24) e o epítopo transmembrana (TM). O fragmento completo que codifica a p24 fundido com a sequência do epítopo TM foi obtido a partir do DNA pró-viral extraído do sangue periférico de um gato naturalmente infectado pelo FIV (subtipo B), confirmado pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Esse fragmento foi clonado e expresso em fase com a cauda de histidina (6xHis) na porção amino terminal. Foram utilizadas diferentes concentrações de isopropil1 ?-tiogalactopiranisídeo (IPTG) e tempos de incubação para induzir a expressão da proteína recombinante. Após análise por SDS-PAGE observou-se que a concentração final de 0,1 mol/L de IPTG e 3 horas de incubação induziram maior produção da proteína recombinante (29 kDa) e, que a proteína viral recombinante se encontrava na fração insolúvel. Essa fração foi purificada e usada como antígeno no ELISA indireto. Cinquenta amostras de soros e/ou plasma de gatos FIV positivos e negativos foram testados, e todos foram concordantes com a PCR ou o teste SNAP® FIV/FeLV Combo (IDEXX laboratories). Esses resultados mostram que o método utilizado para produzir a proteína recombinante do FIV foi eficiente e que é possível o seu uso para o diagnóstico da infecção pelo FIV

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Feline immunodeficiency virus (FIV) infection is one of the most important infectious diseases of cats. Infected cats exhibit a variety of non-specific clinical sign, so specific laboratory assay is necessary to confirm the diagnosis of FIV infection. Detection of anti-FIV circulate antibody has a direct correlation with the viral infection, because once a cat has been infected it will remain infected permanently. In this study, we developed a method to produce a recombinant fusion antigen with viral capsid protein (p24) and transmembrane (TM) epitope. Entire fragment that codify p24 fused with TM epitope sequence was obtained from pro-viral DNA extracted of peripheral blood of naturally FIV infected cat (subtype B), confirmed by polymerase chain reaction (PCR). This fragment was cloned and expressed in frame with a 6xHis N? terminal tag. Different final concentration of isopropyl ?-D thiogalactoside (IPTG) and incubation time was used to induce the expression of the recombinant protein. SDS-PAGE analysis demonstrated that IPTG final concentration of 0,1 mol/L and 3 hours after induction showed higher concentration of recombinant protein (29 kDa) and viral recombinant protein was located in the insoluble fraction. This fraction was purified and used as antigen in indirect ELISA. Fifty serums of FIV positive and negative cats were tested and all were concordant with PCR or SNAP® FIV/FeLV Combo test (IDEXX laboratories). These results demonstrate that the method used to produce the recombinant fused FIV protein was efficient and it is possible to use it for diagnostic of FIV infection

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