Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Botucatu; s.n; 07/15/2010. 105 p.

Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-9547

Resumo

Este estudo teve como objetivo avaliar a possibilidade da utilização do processo de liofilização para a conservação de células espermáticas de cão (Canis lupus familiaris) e de gato (Felis silvestris catus) por longos períodos de tempo utilizando os meios SOF e HTF. Foi utilizado o ejaculado de 3 gatos colhidos com o uso de vagina artificial e de 6 cães colhidos por meio de manipulação digital. O sêmen foi avaliado para motilidade (CASA), vigor espermático, integridade de membranas e integridade de DNA. Após a diluição com HTF e SOF, o sêmen foi envasado em criotubos de 2,0mL, contendo 1 x 103 espermatozóides/mL. As amostras de sêmen de cão foram mantidas por 60 minutos à 5ºC, já as amostras de sêmen de gato permaneceram nessa mesma temperatura por apenas 20 minutos; logo após, foram transferidas para o vapor de nitrogênio durante 20 minutos e 15 minutos, respectivamente, e por fim, mergulhadas em nitrogênio. As amostras foram liofilizadas a -40ºC durante 48 horas e permaneceram com 1% de umidade após todo o processo. O armazenamento dos criotubos foi feito a 4ºC. As amostras foram ressuspendidas em seus respectivos meios (SOF ou HTF) para realizar as análises de integridade de membrana e de DNA. As sondas de Iodeto de Propidio (IP), FITC-PSA (glutinina de Pisum sativum conjugada a isotiocianato de fluoresceína) e JC-1 (Iodeto de 5,5?, 6,6?-tetracloro-1,1,3,3- tetraetilbenzimidazolilcarbocianina) mostraram que o tanto o meio SOF quanto o meio HTF conferiram proteção às membranas acrossomais, mas no que diz respeito aos danos causados à integridade do DNA espermático durante o processo de liofilização o meio SOF forneceu melhor proteção do que o HTF durante o processo de liofilização (P<0,0001). A análise ultra-estrutural mostrou edema de membranas plasmática e acrossomal, assim como regiões de ruptura de membranas. Em conclusão, o meio SOF se mostrou adequado para

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The objective of this study was to evaluate the feasibility of the freeze-drying process to preserve dog and cat sperm cells for long periods of time using either SOF or HTF as extenders. Semen was collected from 3 cats using an artificial vagina, and from 6 dogs by digital stimulation. Semen was assessed for motility, vigor, membrane integrity, and DNA integrity. After adding either HTF or SOF to the semen, they were put into 2.0 mL cryotubes (1x103 sperm/mL). Dog sperm was kept for 60 minutes at 5ºC, and cat sperm was kept for 20 minutes at the very same temperature. Samples were then kept put in nitrogen vapor for 20 and 15 minutes, respectively. Then they were plunged into liquid nitrogen. Sperm cells were freeze-dried at -40ºC for 48 h and ended up with 1% moisture. Cryotubes were kept at 4ºC. Samples were resuspended in their own extenders to assess membrane and DNA integrities. Both SOF and HTF protected acrosomal membrane, but SOF was more efficient in preserving the DNA when compared to HTF (P<0,0001). Despite the DNA integrity, electron microscopy showed plasma and acrosomal membrane disruption. Hence, SOF was a more suitable extender for freeze-drying canine and feline sperm. Further studies are needed with a view to ensuring its feasibility for ICSI procedures with freeze-dried sperm

Biblioteca responsável: BR68.1