Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Jaboticabal; s.n; 27/06/2006. 100 p.

Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-9597

Resumo

A reprodução sexual é um processo de extrema importância para a planta, uma vez garante a sua perpetuação. O sucesso do processo reprodutivo está diretamente ligado à interação pólen ? pistilo. Identificar genes específicos do pistilo, o momento em que os mesmos estão sendo expressos e suas respectivas funções é muito importante para um completo entendimento do processo reprodutivo. Experimentos anteriores de macroarranjo identificaram 48 genes, preferencialmente expressos no estigma/estilete de Nicotiana tabacum (Quiapim, 2005). Destes, 10 genes foram escolhidos, baseado em suas possíveis funções e nível de expressão relativa, para serem validados pela técnica de RT-PCR em tempo real (genes de interesse). Uma análise precisa do nível de expressão gênica, pela técnica de RT-PCR em tempo real, está diretamente ligada à utilização de genes de referência adequados. No presente trabalho, 3 genes constitutivos (?-actina, GAPDH e poliubiquitina) foram testados usando o sistema LUX, nos diferentes órgãos de N. tabacum (raiz, caule, folha, sépala, pétala, estame, estigma/estilete e ovário), através do programa geNorm. Dois genes constitutivos foram escolhidos como genes de referência, com o intuito de aumentar a confiabilidade dos resultados de análise da expressão dos genes de interesse. Os dois genes escolhidos, pelo programa geNorm, foram ?-actina e GAPDH. A combinação ?-actina e GAPDH, foi então utilizada para analisar o perfil de expressão dos 10 genes identificados anteriormente por macroarranjo, como preferenciais de estigma/estilete. A expressão dos genes foi quantificada nos diferentes órgãos vegetativos e reprodutivos da planta e também no estigma/estilete em cada um dos doze estágios do desenvolvimento floral. Foi encontrado um gene específico do estigma/estilete de N. tabacum (clone 022C03), expresso no fim do desenvolvimento floral, similar a proteína arabinogalactana AGPNa3, descrita

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The sexual reproduction is a process of extreme importance for the plant, since it guarantees its perpetuation. The success of the reproductive process is directly related to the pollen - pistil interaction. To identify pistil specific genes, the moment in which they are expressed and their respective functions, is very important for a complete understanding of the reproductive process. Previous macroarray experiments identified 48 genes preferentially expressed in the stigma/style of Nicotiana tabacum (Quiapim, 2005). Among these, 10 genes were chosen, based on their possible functions and relative expression level to be validated by the real time RT-PCR technique (genes of interest). An accurate analysis of the gene expression level, by the real time RT-PCR technique, is directly related to the use of adequate reference genes. In the present work, 3 constitutive genes (?-actin, GAPDH and poliubiquitin) were tested using the LUX system, in the different organs of N. tabacum (Root, Stem, Leaf, Sepal, Petal, Stamen, Stigma/Style and Ovary), through the geNorm program. Two constitutive genes were chosen as reference genes, with the intention of increasing the reliability of the results obtained by the analysis of expression of the genes of interest. The two genes chosen by the geNorm program were ?-actin and GAPDH. The combination ?-actin and GAPDH, was then used to analyze the expression profile of the 10 genes previously identified by macroarray as preferential of stigma/style. The expression of the genes was quantified in the different vegetative and reproductive organs of the plant, and also in stigmas/styles of each one of the twelve floral developmental stages. A N. tabacum stigma/style specific gene was found (clone 022C03). It is expressed at the end of the floral development, and is similar to the AGPNa3 arabinogalactan protein, previously described in N. alata. The clone 076B01 was shown to be flower specific, and preferential

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