Efectividad del temefos 1 % en larvas de Culex quinquefasciatus. Matanzas, 2019 / Effectiveness of temephos 1% in Culex quinquefasciatus larvae. Matanzas, 2019

RESUMEN Introducción: el temefos es el producto más utilizado para el tratamiento focal. Existe en diferentes formulaciones y se aplica para los depósitos de agua potable, en forma de gránulos de arena a una concentración del 1 %. Objetivo: determinar la duración de la efectividad del temefos, en su formulación costarricense Biolarv G1, en una población matancera de Culex quinquefasciatus. Materiales y métodos: se realizó un bioensayo de laboratorio, utilizando la F1 de una cepa matancera de Culex quinquefasciatus, la que se sometió a los efectos del Biolarv G1, lote 1180829. Se utilizaron tres variantes de recambio de agua potable. Resultados: la efectividad fue del 100 % de mortalidad larvaria hasta el 7º día en el recambio del 100 % de agua. Para el recambio del 50 % de agua, la mortalidad promedio del 1º al 17º día fue del 97,5 %. En el caso del recambio del 30 % de agua, la mortalidad fue del 100 % hasta el 27º día. Conclusiones: se demostró que el temefos, en su formulación Biolarv G1, puede tener mayor efectividad en recambios del 30 % de agua, con una durabilidad de alrededor de 30 días, lo que propicia la protección de los depósitos durante los ciclos de trabajo diseñados para la vigilancia y lucha antivectorial en Cuba.

ABSTRACT Introduction: temefos is the most widely used product for focal treatment. It exists in different formulations and is applied for drinking water tanks, in the form of sand-like granules at a concentration of 1 %. Objective: to determine the duration of temefos effectiveness, in its Costa Rican formulation Biolarv G1, in a Matanzas population of Culex quinquefasciatus. Materials and methods: a laboratory bioassay was performed, using the F1 of a Matanzas strain of Culex quinquefasciatus, which was subjected to the effects of Biolarv G1, lot 1180829. Three variants of drinking water replacement were used. Results: the effectiveness was 100% of larval mortality until the 7th day when 100 % of wáter was replaced. For the replacement of 50 % of water, average mortality was 97.5 % from the 1st to the 17th day. In the case of 30 % water replacement, mortality was 100 % up to the 27th day. Conclusions: it was shown that temefos, in its formulation Biolarv G1, can be more effective in replacements of 30 % of water, with a durability of about 30 days, which facilitates the protection of reservoirs during work cycles designed for surveillance and anti-vector control in Cuba.

Aprimoramento e avaliação da armadilha BR-Adult para coletar adultos vivos e imaturos de Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae)

As armadilhas para coleta de mosquitos atuais, em geral, não atendem ao requisito de coletar simultaneamente ovos e adultos vivos sem que dependa de uma fonte de energia elétrica, aspecto que limita o seu uso em Programas de Controle de Vetores. Diante disso, este estudo teve como objetivo avaliar o desempenho de um novo modelo de armadilha, BR-Adult, capaz de coletar ovos e adultos vivos de A. aegypti e C. quinquefasciatus. Ela foi confeccionada a partir de materiais plásticos de baixo custo, avaliada em condição simulada de campo e em Teste-Piloto de campo, nas dependências internas e externas do IAM, FIOCRUZ-PE. Nos testes de campo simulado a BR-Adult foi avaliada em suas três versões, comparada em versões distintas (versão 1 x versão 3) ou com a armadilha Double BR-OVT, ao longo de 20 meses. Para os testes eram liberados 50 fêmeas grávidas e 50 machos de A. aegypti e C. quinquefasciatus. Para os testes piloto em campo, foram selecionados seis pontos de instalação. As manutenções das armadilhas eram realizadas após um período de sete dias em campo. A água com Bti eram trocadas a cada 15 dias e as palhetas a cada sete dias. Os resultados das avaliações dos testes pareados BR-Adult (versão 1) versus Double BR-OVT, demonstraram que a Double BR-OVT foi mais eficiente na coleta de ovos e adultos. De um total de 3.449 ovos e 120 adultos coletados, a Double BR-OVT coletou 95% dos ovos ovipositados e 100% dos adultos aprisionados. Na comparação da BR-Adult (versão 3) com a Double BR-OVT, de um total de 8.021 ovos e 252 adultos coletados, a Double BR-OVT coletou 76% dos ovos ovipositados e 82% dos adultos aprisionados. Os resultados da avaliação do teste pareado BR- Adult (versão 1) versus BR-Adult (versão 3) demonstraram que a BR-Adult (versão 3) coletou mais imaturos e adultos. Um total de 3.693 ovos, 29 fêmeas e 3 machos de A. aegypti foram coletados, com média de 7,3 fêmeas, por repetição. Já a BR-Adult (versão 1) coletou 715 ovos, 15 fêmeas e 2 machos de A. aegypti, com média de 3,8 fêmeas, por repetição. Nos Testes- Piloto-IAM com a BR-Adult (versão 1) foram coletados 123 mosquitos adultos, destes, 34 fêmeas e 89 machos da espécie C. quinquefasciatus, e 11 ovos de Aedes spp. Com a BR-Adult (versão 2), os resultados de dezembro/2019 a março/2020 foram coletados 2351 ovos de A. aegypti apenas. De agosto a dezembro de 2020 foram coletados 2.532 ovos e 5 fêmeas de A. aegypti. De janeiro a abril de 2021 foram coletados 3.348 ovos e uma fêmea de A. aegypti e de C. quinquefasciatus. De maio a setembro de 2021, com BR-Adult, na versão 3, coletou 1.709 ovos de Aedes spp e 7 fêmeas de A. aegypti. Estes resultados permitem concluir que a armadilha BR-Adult foi capaz de coletar ovos e mosquitos adultos vivos de A. aegypti e C. quinquefasciatus, no entanto, sua baixa efetividade para a retenção dos mosquitos adultos, revela a necessidade de novos ajustes no instrumento, que permita uso em campo.

Desenvolvimento e validação de plataformas do tipo "Point-of-Care" para o diagnóstico molecular de arbovírus emergentes

As arboviroses, como as provocadas pelo o vírus Zika (ZIKV) e o vírus chikungunya (CHIKV), têm sido associadas a surtos em larga escala e epidemias em vários países de clima tropical e subtropical nos últimos anos. Atualmente, o diagnóstico dos pacientes infectados por estes vírus é realizado em laboratórios centralizados utilizando a reação de transcriptase reversa seguida da reação em cadeia da polimerase quantitativa (RT-qPCR), que, embora seja o método molecular padrão-ouro para o diagnóstico molecular, tem várias desvantagens para uso em áreas remotas e de poucos recursos, como alto custo e necessidade de equipamentos especializados. Essas desvantagens dificultam a aplicação e utilização para um grande número de amostras. As plataformas de diagnóstico point-of-care (POC) têm o potencial de superar essas limitações, especialmente em países em desenvolvimento. Com isso em mente, nós desenvolvemos e validamos duas plataformas de diagnóstico baseadas em RT-LAMP e biossensores moleculares para a detecção rápida do ZIKV e CHIKV em amostras de pacientes e amostras de mosquitos. O RT-LAMP foi capaz de detectar o ZIKV em diversos tipos de amostras (soro, urina, saliva e sêmen) em apenas 20 minutos, sem extração de RNA. O ensaio RT-LAMP foi altamente específico e até 100 vezes mais sensível do que RT-qPCR. Em seguida, validamos o ensaio com 100 amostras de soro de pacientes coletadas de casos suspeitos de infecção por arbovírus no estado de Pernambuco, epicentro da última epidemia de Zika. Comparado com a RT-qPCR, o ensaio RT-LAMP forneceu sensibilidade de 100%, especificidade de 93,75% e uma precisão geral de 95,00%. Por outro lado, os biossensores moleculares apresentaram sensibilidade similar e alta especificidade quando comparado a RTqPCR. Na sequência, validamos os biossensores com 268 amostras clínicas e as análises demonstraram sensibilidade de 94,52%, especificidade de 100% e uma precisão geral de 98,51%. Demonstrando a programabilidade e extensibilidade de ambas as plataformas de diagnóstico, alcançamos um desempenho de diagnóstico semelhante para a detecção do CHIKV em soro, saliva, urina e amostras de mosquitos. Por fim, também foi otimizado um método alternativo de extração do RNA baseado em fervura acoplado a técnica de RT-qPCR para a detecção molecular do ZIKV. Tomados em conjunto, o ensaio RT-LAMP e os biossensores moleculares fornecem duas alternativas promissoras e de baixo custo para o diagnóstico rápido do ZIKV e CHIKV e possuem o potencial de aumentar a capacidade diagnóstica em áreas afetadas por estes arbovírus emergentes, particularmente em países com baixa infraestrutura laboratorial.

Caracterização de vírus inseridos nos genomas de culicídeos vetores de patógenos

Elementos virais endogenizados (EVEs) são sequências de origem viral que se integraram no genoma do seu hospedeiro. Nos últimos anos, uma quantidade crescente de estudos tem demonstrado que EVEs podem adquirir uma variedade de novas funções, modificando ou originando novos genes e redes regulatórias. Mosquitos são artrópodes vetores de vários arbovírus (vírus transmitidos por Artrópodes) responsáveis por causar infecções nas populações humanas: como o vírus da dengue, chikungunya e Zika. Arbovírus possuem uma forte associação com algumas espécies de mosquitos, o que sugere que estes tenham co-evoluído com culicídeos há alguns milhares de anos. A disponibilidade de dados genômicos de culicídeos nos permite compreender as relações evolutivas e o impacto dos EVEs no genoma desses insetos. Dessa maneira, este projeto teve como objetivo caracterizar a diversidade de EVEs presentes nos genomas de 36 espécies de culicídeos, os quais representam, em sua maioria, espécies de importância médica/epidemiológica, bem como identificar possíveis impactos nestes genomas. Foram identificadas 1998 sequências de origem viral no material genético de 36 espécies de culicídeos, representando um total de 27 famílias virais. As famílias Rhabdoviridae, Chuviridae e Flaviviridae apresentam a maior quantidade de elementos endogenizados, com 597, 459 e 228 elementos, respectivamente. Foi possível relacionar dois possíveis eventos evolutivos atrelados a EVEs da família Chuviridae, a possível origem de um novo retrovírus, fruto da hibridização de retroelementos Pao com o gene que é traduzido em glicoproteína de Chuvirus, e um possível mecanismo antiviral a partir de glicoproteínas endogenizadas. Estes resultados refletem uma grande diversidade de vírus integrados ao genoma de culicídeos, e levantam questões sobre a importância desses elementos nos genomas estudados.

Avaliação do impacto de ações integradas de controle vetorial sobre a infestação de Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus em Recife-PE

Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus são vetores de patógenos que causam doenças no homem, sendo necessário investir em ações que reduzam suas populações, minimizando o contato mosquito-homem. Avaliamos o impacto do controle integrado de mosquitos (CIM) em dois bairros do Recife-PE. Ações realizadas: captura de alados, recolhimento massivo de ovos, iscas tóxicas para mosquitos e tratamento de criadouros. As ações foram realizadas em 80 imóveis, 40 no bairro da Várzea (Área 1), e 40 em Nova Descoberta (Área 2). Cada bairro com 2 extratos de 20 imóveis: ações simples (S) (1 OVT; 1 BR-ovt; captura de alados mensal) e ações intensificadas (I) (2 OVT; 2 BR-ovt; captura de alados quinzenal; iscas tóxicas). O Índice de Densidade de Ovos (IDO) e Densidade de Adultos (DA) foram utilizados para avaliar o impacto das ações de controle sob a densidade de mosquitos. Os mosquitos capturados foram processados por RT-qPCR e calculada a taxa de infecção mínima (MIR) para cada patógeno. Em A. aegypti foi investigada infecção vetorial DENV, CHIKV e ZIKV e em C. quinquefasciatus, a presença do parasita Wuchereria bancrofti e do vírus Zika. Após 12 ciclos de avaliação nas áreas houve redução de 88% no IDO da Área 1 e de 91% na Área 2. A DA de A. aegypti reduziu 89% na área 1 e 91% na área 2. A redução da DA de C. quinquefasciatus na área 1 foi de 92% e a área 2 de 76%. Em A. aegypti, capturados nos 12 ciclos de estudo, foram detectados pools infectados com ZIKV (Área 1 - MIR 84,14; Área 2 ­ MIR 153,43) e DENV (Área 2 ­ MIR 5,29). Já para C. quinquefasciatus, detectamos pools infectados com ZIKV (Área 1 ­ MIR 10,06; Área 2 ­ MIR 18,33) e Wuchereria bancrofti (Área 2 ­ MIR 4,23). Nossos resultados demonstram que o CIM, com ações simples ou intensificadas, reduzem a densidade local de culicídeos vetores em residências-alvo. Ressaltamos também a importância de inserir a vigilância de infecção vetorial em programas de controle de mosquitos para prever possibilidades de surtos de doenças e direcionar ações de controle emergenciais .