Desenvolvimento e validação de plataformas do tipo "Point-of-Care" para o diagnóstico molecular de arbovírus emergentes

As arboviroses, como as provocadas pelo o vírus Zika (ZIKV) e o vírus chikungunya (CHIKV), têm sido associadas a surtos em larga escala e epidemias em vários países de clima tropical e subtropical nos últimos anos. Atualmente, o diagnóstico dos pacientes infectados por estes vírus é realizado em laboratórios centralizados utilizando a reação de transcriptase reversa seguida da reação em cadeia da polimerase quantitativa (RT-qPCR), que, embora seja o método molecular padrão-ouro para o diagnóstico molecular, tem várias desvantagens para uso em áreas remotas e de poucos recursos, como alto custo e necessidade de equipamentos especializados. Essas desvantagens dificultam a aplicação e utilização para um grande número de amostras. As plataformas de diagnóstico point-of-care (POC) têm o potencial de superar essas limitações, especialmente em países em desenvolvimento. Com isso em mente, nós desenvolvemos e validamos duas plataformas de diagnóstico baseadas em RT-LAMP e biossensores moleculares para a detecção rápida do ZIKV e CHIKV em amostras de pacientes e amostras de mosquitos. O RT-LAMP foi capaz de detectar o ZIKV em diversos tipos de amostras (soro, urina, saliva e sêmen) em apenas 20 minutos, sem extração de RNA. O ensaio RT-LAMP foi altamente específico e até 100 vezes mais sensível do que RT-qPCR. Em seguida, validamos o ensaio com 100 amostras de soro de pacientes coletadas de casos suspeitos de infecção por arbovírus no estado de Pernambuco, epicentro da última epidemia de Zika. Comparado com a RT-qPCR, o ensaio RT-LAMP forneceu sensibilidade de 100%, especificidade de 93,75% e uma precisão geral de 95,00%. Por outro lado, os biossensores moleculares apresentaram sensibilidade similar e alta especificidade quando comparado a RTqPCR. Na sequência, validamos os biossensores com 268 amostras clínicas e as análises demonstraram sensibilidade de 94,52%, especificidade de 100% e uma precisão geral de 98,51%. Demonstrando a programabilidade e extensibilidade de ambas as plataformas de diagnóstico, alcançamos um desempenho de diagnóstico semelhante para a detecção do CHIKV em soro, saliva, urina e amostras de mosquitos. Por fim, também foi otimizado um método alternativo de extração do RNA baseado em fervura acoplado a técnica de RT-qPCR para a detecção molecular do ZIKV. Tomados em conjunto, o ensaio RT-LAMP e os biossensores moleculares fornecem duas alternativas promissoras e de baixo custo para o diagnóstico rápido do ZIKV e CHIKV e possuem o potencial de aumentar a capacidade diagnóstica em áreas afetadas por estes arbovírus emergentes, particularmente em países com baixa infraestrutura laboratorial.

Detection of Strongyloides stercoralis in Tierralta, Colombia using four parasitological methods / Detección de Strongyloides stercoralis en Tierralta, Colombia, utilizando cuatro métodos parasitológicos

Introduction: soil-borne helminth Strongyloides stercoralis is one of the most neglected among neglected tropical diseases. A study was conducted of the presence of S. stercoralis in a village from the department of Córdoba, Colombia, with the purpose of comparing the effectiveness of several diagnostic methods. Methods: stool samples from 262 persons were evaluated. Each sample was examined with four parasitological techniques: direct examination, agar plate culture (APC), the modified Baermann method, and the Harada-Mori technique. Results: S. stercoralis was detected by at least one of the techniques in four of the 262 samples: the Harada-Mori technique detected 2 cases, APC 1 case and direct examination 1 case. The modified Baermann method did not detect any case. No significant differences were found when comparing the techniques. Conclusions: results show that S. stercoralis is not endemic in the village of Córdoba, and that parasitological techniques should be used in combination to improve the quality of diagnosis.

Introducción: el helminto transmitido por el suelo, Strongyloides stercoralis es uno de los más olvidados entre las enfermedades tropicales desatendidas. Estudiamos la presencia de S. stercoralis en un pueblo en el departamento de Córdoba, Colombia, y evaluamos comparativamente el desempeño de diferentes métodos diagnósticos. Métodos: se evaluaron muestras de heces tomadas de 262 personas; cada muestra fue examinada usando cuatro técnicas parasitológicas: examen directo, método de agar en placa (APC), la técnica de Baermann modificado y el método de Harada-Mori. Resultados: S. stercoralis se detectó en cuatro de las 262 muestras evaluadas por al menos una de las técnicas utilizadas; el método deHarada-Mori detectó 2 casos, APC 1 caso y el examen directo 1 caso, mientras que la técnica de la Baermann modificado no detectó casos. No hubo diferencias significativas al comparar las técnicas. Conclusiones: estos resultados permiten concluir que S. stercoralis no es endémico en el pueblo de Córdoba y que las técnicas parasitológicas deben ser combinadas para mejorar el diagnóstico.